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自噬與線粒體Cx43在心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷中的變化及作用研究

發(fā)布時(shí)間:2020-12-12 00:58
  目的:研究缺氧復(fù)氧對(duì)心肌細(xì)胞自噬和線粒體Cx43的影響,探討自噬與線粒體Cx43在心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷中的關(guān)系及作用。方法:分別對(duì)乳鼠原代心肌細(xì)胞和H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),根據(jù)培養(yǎng)情況最終選擇H9c2心肌細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)對(duì)H9c2心肌細(xì)胞更換為不含血清的低糖DMEM培養(yǎng)基并置于缺氧(5%C02、2%02)培養(yǎng)箱中12h作為缺氧處理,后恢復(fù)含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基及常氧培養(yǎng)12h作為復(fù)氧處理。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、CCK-8檢測(cè)細(xì)胞存活率、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒測(cè)培養(yǎng)液中LDH活性,建立心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧(H/R)模型。按隨機(jī)原則將心肌細(xì)胞分為五組:對(duì)照組、H/R組、格爾德霉素組(GA組)、3-甲基腺嘌呤組(3-MA組)、格爾德霉素+3-甲基腺嘌呤組(GA+3-MA組)。GA處理是在缺氧復(fù)氧前先對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行30min的GA(1μmol/L)預(yù)處理;3-MA處理是在缺氧復(fù)氧同時(shí)在培養(yǎng)基中加入3-MA(5mmol/L)進(jìn)行干預(yù)。CCK-8檢測(cè)細(xì)胞存活率,JC-1法檢測(cè)線粒體膜電位,Western blot測(cè)定Beclin-1、LC3B、線粒體Cx43及線粒體磷酸化Cx4... 

【文章來(lái)源】:南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】:73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

自噬與線粒體Cx43在心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷中的變化及作用研究


圖1-2?H9c2心肌細(xì)胞??Fig.?1-2?H9c2?cardiomyocytes??

心肌細(xì)胞,對(duì)照組,缺氧復(fù)氧,復(fù)氧


B?C??圖1-1原代心肌細(xì)胞A:?jiǎn)蝹(gè)、分散的心肌細(xì)胞,B:心肌細(xì)胞簇,C:心肌細(xì)胞網(wǎng)??Fig.?1-1?Primary?cardiomyocytes?A:?single,?dispersed?cardiomyocytes,?B:?cardiomyocyte??cluster,?C:?cardiomyocyte?network??1.4.2?H9c2心肌細(xì)胞培養(yǎng)情況??于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞,H9c2心肌細(xì)胞呈梭形,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,生長(zhǎng)情??況良好。??圖1-2?H9c2心肌細(xì)胞??Fig.?1-2?H9c2?cardiomyocytes??1.?4.?3心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型建立情況??13??

透射電鏡,對(duì)照組,細(xì)胞的,線粒體


?S?2-??uln?1JJ,?11?J_n?^?Jn?1,11,1?n?n??圖2-2?各組細(xì)胞Beclin-1和LC3B的蛋白表達(dá)水平A:?Western?blot檢測(cè)結(jié)果,B:??各組Beclin-1蛋白水平的比較,C:各組LC3BII/LC3BI比值的比較(f±s,?SP<0.?05vs??對(duì)照組,'?<〇.?05?vs?H/R?組)??Fig.2-2?Protein?levels?of?Beclin-1?and?LC3B?in?each?group?A:?results?of?Western?blot,?B:??comparison?of?Beclin-1?protein?levels?in?each?group,?C:?comparison?of?LC3BII/LC3BI?ratios?in??each?group(x±s,?#P<0.05?vs?control,?*P<0.05vs?H/R?group)??2.?4.?2各組線粒體Cx43及p-Cx43蛋白水平的比較??由圖2-3可見(jiàn),H/R組的線粒體Cx43?


本文編號(hào):2911551

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