第一部分目的:血小板功能檢測(cè)包括血小板聚集試驗(yàn)及其他血小板激活及功能的評(píng)估。其中,全血流式細(xì)胞術(shù)具有樣本需求量小,采用全血樣本接近體內(nèi)激活狀態(tài),不受血小板計(jì)數(shù)影響等優(yōu)點(diǎn)。P-選擇素作為一種特異性血小板表面標(biāo)志物,介導(dǎo)血小板與包括單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞在內(nèi)的白細(xì)胞聚集發(fā)揮炎癥誘導(dǎo)作用。本研究擬從采樣、激活、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)等方面探討血小板表面P-選擇素的檢測(cè)方法,并進(jìn)一步探索血小板表面P-選擇素是否能成為一種較好的反應(yīng)抗血小板治療的指標(biāo)。方法:使用21號(hào)直針從健康受試者外周靜脈穿刺,采集2.7mL血樣于枸櫞酸鈉抗凝劑的采血管。在前處理中采取控制變量法,采用不同的全血稀釋倍數(shù),多種激動(dòng)劑種類(lèi)及濃度梯度,設(shè)定不同流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)參數(shù)比較血小板表面的P-選擇素表達(dá)情況。結(jié)果:1.采血后將樣本稀釋10倍可減少血小板聚集;2.P-選擇素表達(dá)與ADP劑量呈較好的正相關(guān)性,ADP濃度達(dá)到20μM可見(jiàn)P-選擇素表達(dá)到達(dá)峰值。3.鞘液流速對(duì)檢測(cè)結(jié)果存在影響。4.隨貯存時(shí)間增加,血小板表面P-選擇素的表達(dá)量明顯增加。結(jié)論:在采血后應(yīng)即刻前處理,進(jìn)行適當(dāng)?shù)臉悠废♂?以ADP（終濃度20μM）激活處理,并以采用較低的... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２?１０倍稀釋的全血樣本無(wú)拖帶效應(yīng)??

流式細(xì)胞儀采樣參數(shù)探索??表６不同流式細(xì)胞儀采集速度的Ｐ－選擇素表達(dá)??編號(hào)?１２３ＡＤＰ?終濃度?０?ｌ〇ＨＭ?２０＾Ｍ?ｌｏｗ－ＭＦＩ?１．３７?１．９２?２．２０ｍｅｄｉｕｍ－ＭＦＩ?２．１４?２．７２?３．００論何種ＡＤＰ濃度激活，相比于低流速，以中速進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)收板表面Ｐ－選擇素的ＭＦＩ均有增加。在低或中流速收集的樣本中，Ｐ－在ＡＤＰ＝２０卩Ｍ基本可達(dá)最大表達(dá)量。??？?ｌｏｗ－ＭＦＩ?．ｍｅｄｉｕｍ－ＭＦＩ??

圖４不同樣本貯存時(shí)間的Ｐ－選擇素表達(dá)??隨貯存時(shí)間増加，血小板表面Ｐ－選擇素的表達(dá)量明顯増加（陽(yáng)性百分比或平均??光強(qiáng)度）。加入ＡＤＰ激動(dòng)后的Ｐ－選擇素表達(dá)較激動(dòng)前仍有增加。同時(shí)貯存超過(guò)２４??時(shí)的樣本（Ｓ１－Ｓ４）中部分出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（結(jié)果未顯示）。、??析及討論??血小板的流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，不同于紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，主要體現(xiàn)在以下方面。??一，血小板計(jì)數(shù)的正常值為ｌ〇〇－３５〇ｘｌ〇９／Ｌ，全血樣本中血小板濃度較髙；其二，??血小板生物學(xué)活性較脆弱，從采樣至上機(jī)檢測(cè)過(guò)程中受各種因素影響，包括①不同??類(lèi)型／濃度的血小板激動(dòng)劑；②不恰當(dāng)激活：止血帶、穿刺損傷、劇烈振蕩、離心、??滌；③時(shí)間：采樣至前處理時(shí)間，前處理至流式細(xì)胞學(xué)時(shí)間；其三，血小板體積??小，門(mén)控策略除了采用ＦＳ／ＳＳ，應(yīng)至少采用一種特異的血小板標(biāo)記性抗體，如ＣＤ６１、??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]四氫小檗堿對(duì)血小板聚集和血栓形成的抑制作用(英文)[J]. 宣波,王偉,李德興.  Acta Pharmacologica Sinica. 1994(02)



本文編號(hào)：2905513