研究背景:肥胖/高脂血癥誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)以及心律失常的具體分子機(jī)制不是完全清楚。CaMKII是一個(gè)多功能的絲氨酸/蘇氨酸激酶,已經(jīng)被報(bào)道參與介導(dǎo)多種心血管器質(zhì)性疾病以及各種不同原因所引起的心律失常的發(fā)生于發(fā)展中。然而,其在肥胖/高脂血癥誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)以及心律失常過(guò)程中的作用尚不清楚;研究目標(biāo):本文主要是探討CaMKII在肥胖/高脂血癥誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)以及心律失常過(guò)程中的作用及其分子機(jī)制;研究方法:（1）為了研究CaMKII在肥胖誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)中作用,我們建立了體外飽和游離脂肪酸（棕櫚酸）刺激的H9C2的細(xì)胞模型以及體內(nèi)高脂飲食（HFD）喂養(yǎng)16周的APOE-/-小鼠動(dòng)物模型,在這兩種模型中,我們給予CaMKII藥理學(xué)抑制劑（KN93或者M(jìn)yr-AIP）進(jìn)行藥物干預(yù),然后檢測(cè)抑制CaMKII對(duì)游離脂肪酸/高脂血癥誘導(dǎo)的心肌病理?yè)p傷（包括心肌凋亡、肥大和纖維化）以及多種細(xì)胞病理信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程（包括炎癥、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、線粒體功能紊亂）的影響;（2）為了研究CaMKII在肥胖誘導(dǎo)的心律失常中的作用,我們?cè)诟咧嬍常℉FD）喂養(yǎng)16周的APOE-/-小鼠動(dòng)物模型中,給予CaMKII特異性抑制劑... 

【文章來(lái)源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１：?ＣａＭＫＩＩ通過(guò)調(diào)節(jié)線粒體凋亡通路進(jìn)而介導(dǎo)ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)的Ｈ９Ｃ２的凋亡

應(yīng)［１９］。接著我們探討了?ＣａＭＫＩＩ是否參與介導(dǎo)了這些病理改變過(guò)程中。ＲＴ－ｑＰＣＲ??實(shí)驗(yàn)顯示當(dāng)ｐａｌｍｉｔａｔｅ處理細(xì)胞１２ｈ后，細(xì)胞中的肥大相關(guān)指標(biāo)以及纖維化指標(biāo)均??明顯升高，而這些變化均可被ＫＮ９３或者Ｍｙｒ－ＡＩＰ所抑制（圖２Ａ）。同樣地，我??們也發(fā)現(xiàn)纖維化指標(biāo)ＴＧＦ－ｐｌ以及ｃｏｌｌａｇｅｎｌ的蛋白水平在ｐａｌｍｉｔａｔｅ處理２４ｈ后也??是增高的（圖２Ｂ）。為了進(jìn)一步明確ＣａＭＫＩＩ活性抑制對(duì)細(xì)胞肥大的影響，我們??利用羅丹明－鬼筆環(huán)肽染色后對(duì)細(xì)胞表面積進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)細(xì)胞ｐａｌｍｉｔａｔｅ處理細(xì)胞??２４ｈ細(xì)胞的表面積明顯增加，而這種改變可以被ＫＮ９３或者Ｍｙｒ－ＡＩＰ所抑制。總之，??這些研究結(jié)果證明了?ＣａＭＫＩＩ在ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大和纖維化過(guò)程中發(fā)??揮著重要作用。??ＰＡ（３００ｐＭ）??Ｄ????Ａ?Ｍｙｒ－ＡＩＰ?ＫＮ９３??３１?□?ａｆｊ?Ｃｔｒｌ?ＲＡ?（５ｐＭ）?（５ｐＭ）??，?ＳｐＡ＾ＡｉｋｓｐＭ）?ＴＧＦ－Ｐ１?ｍｍｍ?—？?？＾？｜２５ＫＤ??ＩＥＳＵ?ＰＡ＋ＫＮ９３（５ｍＭ）?卜二〒：二二??．?Ｃｏｌｌａｇｅｎｌ?—，一攀＂鍵?１３〇?ｋｄ??Ｘ?ｇａｐｄｈ?ｍｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍｍ?ｍｍｍ＼?３７?ｋ〇??｝?．?ｆ］?ｉ?ｆｏ－８－?＊?＃?ＳＳ＂??Ａ?Ｔ?■?＊?ｎ＿?ｉ?＾?＿Ｌ?ＥＳ３?ＰＡ＊Ｍｙｒ－ＡＩＰ??Ｂ?－ＬＨＸ?■?Ｈ?Ｉ０．６＊?＿?■?ＣＤ?ＰＡ＊Ｍｙｒ－ＫＮ９Ｓ??１１?ＩＩＩ?ＩＢｉ?１１

總ＣａＭＫＩＩ蛋白表達(dá)水平的時(shí)間依賴性效應(yīng)。當(dāng)ｐａｌｍｉｔａｔｅ刺激Ｈ９Ｃ２細(xì)胞不同時(shí)??間，我們發(fā)現(xiàn)磷酸化ＣａＭＫＩＩ的蛋白水平從刺激的ｌｈ開始持續(xù)增高，并且在刺激??１２后依然是增高的，表明ｐａｌｍｉｔａｔｅ可以激活ＣａＭＫＩＩ?（圖３Ａ）。同時(shí)，我們也發(fā)??現(xiàn)總ＣａＭＫＩＩ的蛋白水平從ｐａｌｍｉｔａｔｅ刺激２ｈ開始也逐漸增加（圖３Ａ）。接著我們??在Ｈ９Ｃ２細(xì)胞中探討了?ＣａＭＫＩＩ是否參與到ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過(guò)程中，通??過(guò)分析了?ＣａＭＫＩＩ抑制對(duì)ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)的炎癥基因的ｍＲＮＡ與蛋白表達(dá)水平的影??響，我們發(fā)現(xiàn)利用ＫＮ９３或者Ｍｙｒ－ＡＩＰ抑制ＣａＭＫＩＩ可以明顯降低ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)??的炎性基因的ｍＲＮＡ以及蛋白表達(dá)水平，例如ＴＮＦ－ｃｔ、ＩＬ－ｌｐ、ＩＣＡＭ－ｌ以及ＭＣＰ－１??（圖３Ｂ－３Ｃ）。這些結(jié)果表明ＣａＭＫＩＩ在ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)的心肌炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著??重要的作用。接著我們檢測(cè)了?ＣａＭＫＩＩ活性抑制對(duì)ｐａｌｍｉｔａｔｅ誘導(dǎo)的炎性信號(hào)通路??ＭＡＰＫ和ＮＦ－ｋＢ信號(hào)通路激活的影響。從圖３Ｄ和３Ｅ可以看到ｐａｌｍｉｔａｔｅ處理ｌｈ??可以明顯升高ｐ－ＪＮＫ、ｐ－ＥＲＫ以及ｐ－Ｐ３８的蛋白表達(dá)水平，同時(shí)降低ＩｋＢｃｘ蛋白表??達(dá)水平并誘導(dǎo)ＮＦ－ｋＢ?Ｐ６５亞基的細(xì)胞核轉(zhuǎn)移，然而這些改變均可被Ｍｙｒ－ＡＩＰ或者??ＫＮ９３明顯抑制

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Neuroprotective effects of cold-inducible RNA-binding protein during mild hypothermia on traumatic brain injury[J]. Guan Wang,Jian-ning Zhang,Jia-kui Guo,Ying Cai,Hong-sheng Sun,Kun Dong,Cheng-gang Wu.  Neural Regeneration Research. 2016(05)



本文編號(hào)：2897389