目的:在人源iPS細(xì)胞向心肌細(xì)胞定向分化的過程中,通過慢病毒感染過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Tbx3或Tbx18,探索人源iPSCs（induced pluripotent stem cells,誘導(dǎo)多能干細(xì)胞）能否向竇房結(jié)樣細(xì)胞富集分化。方法:1.人源iPS細(xì)胞的培養(yǎng):使用Bio CISO人源iPS培養(yǎng)基培養(yǎng)iPS細(xì)胞（LHpb-Yaab C3）,以1:4¹:7比例進(jìn)行傳代,復(fù)蘇和傳代時加入ROCK抑制劑減少細(xì)胞凋亡,提高克隆存活率。2.人源iPS細(xì)胞干性的檢測:顯微鏡下觀察穩(wěn)定傳代培養(yǎng)的細(xì)胞是否具備iPS細(xì)胞的典型特征。運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測干性基因（Oct3/4、Sox2和Nanog）在iPS細(xì)胞中的表達(dá)水平。運(yùn)用免疫熒光方法檢測iPS細(xì)胞特異性標(biāo)記物,細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子（OCT4、NANOG）和細(xì)胞膜蛋白（SSEA4、TRA-1-60）的表達(dá)情況。3.人源iPS細(xì)胞向心肌細(xì)胞定向分化的誘導(dǎo):細(xì)胞融合度接近100%時開始誘導(dǎo)分化,誘導(dǎo)分化當(dāng)天使用RPMI+B27（-）無胰島素培養(yǎng)基,并加入GSK3抑制劑CHIR（6μM）,24小時后換成新鮮正常的RPMI+B27（-）... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡下人源iPS細(xì)胞的形態(tài)

細(xì)胞的體積較小，細(xì)胞核大而明顯，細(xì)胞質(zhì)較少，核質(zhì)比高，如圖所示。圖 1：顯微鏡下人源 iPS 細(xì)胞的形態(tài)。A：4×；B：20×。Fig1: Morphology of human iPS cells under microscope. A: 4×; B: 20×.1.2 實(shí)時熒光定量 PCR 檢測人源 iPS 細(xì)胞干性標(biāo)記物A B

圖 3：免疫熒光顯微鏡下 iPS 特異細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子 OCT4 和 NANOG 的染色結(jié)果。A1，B1：DAPI 核染色；A2：OCT4 熒光染色；B2：NANOG 熒光染色；A3，B3：Merge 合成圖。Fig3: iPS specific nuclear transcription factor，OCT4 and NANOG was determined bymmunofluorescent method. A1, B1: DAPI nuclear staining; A2: OCT4 fluorescentstaining; B2: NANOG fluorescent staining; A3, B3: Merge diagram.SSEA4C1 C2 C3D1 D2 D3DAPISSEA4Merge


本文編號：2895023