本文關鍵詞：PKD2在Ox-LDL抑制血管內(nèi)皮細胞eNOS活性中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是發(fā)生于全身大中型動脈血管的致命性病變,是導致心肌梗塞和腦梗塞等疾病發(fā)生的主要因素。研究表明,AS主要發(fā)生于動脈血管的局部性區(qū)域,即動脈血管的彎曲處和分叉處。學界認為局部性血流動力學因素所導致的動脈血管內(nèi)皮損傷是AS形成的一個重要原因。研究發(fā)現(xiàn),在血流動力學信號傳導的過程中,內(nèi)皮細胞纖毛(Cilia)起著關鍵性作用。其中,主要位于纖毛上的離子通道調(diào)控蛋白PKD2[polycystic kidney disease 2(autosomal dominant)]在血管內(nèi)皮細胞生物學行為和管腔功能穩(wěn)態(tài)維持中起著重要的作用。前期研究結果顯示:低振蕩剪切應力(OS)可顯著地抑制內(nèi)皮細胞PKD2蛋白的表達,進而導致血管功能障礙乃至AS的形成。同時,已有的研究表明氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)是導致的動脈血管內(nèi)皮損傷以及AS形成的一個重要原因。那么,Ox-LDL促血管內(nèi)皮損傷及AS形成是否是通過抑制PKD2蛋白的表達及其功能途徑?為此,本文開展了Ox-LDL對血管內(nèi)皮細胞PKD2蛋白表達及其功能影響的研究。目的:以血管內(nèi)皮細胞PKD2蛋白功能為研究對象,確定Ox-LDL對PKD2蛋白表達及其功能的影響,以及PKD2調(diào)控e NOS的活性的分子信號機制。研究方法:采用實時定量PCR(RT-PCR)檢測PKD2和Ca MKKβ等基因的表達水平;免疫熒光染色法(ICC)、Western blotting等方法檢測PKD2、Ca MKKβ、p-AMPK、AMPK、p-e NOS蛋白的表達和活性。結果:(1)Ox-LDL可顯著抑制內(nèi)皮細胞PKD2的基因和蛋白表達水平,以及e NOS活性。(2)內(nèi)皮細胞PKD2基因沉默(si RNA)可顯著抑制PKD2的基因和蛋白表達水平,以及PKD2下游靶基因Ca MKKβ、p-AMPK等蛋白的表達和e NOS活性。(3)體外實驗初步顯示:Ox-LDL可顯著抑制PKD2下游靶基因Ca MKKβ的基因表達水平以及AMPK的磷酸化;AMPK的激活劑AICAR可部分補救Ox-LDL下調(diào)的PKD2下游靶基因AMPK和e NOS的活性。體內(nèi)實驗證明:長期高脂喂食可顯著增加Apo E-/-小鼠的體重和血脂水平,抑制PKD2基因的表達水平。結論:(1)Ox-LDL可抑制內(nèi)皮細胞PKD2的基因和蛋白表達水平,以及e NOS的活性。(2)Ox-LDL可能通過PKD2信號途徑下調(diào)內(nèi)皮細胞e NOS的活性,進而參與血管內(nèi)皮損傷及動脈粥樣硬化的形成。
【關鍵詞】：Ox-LDL PKD2 內(nèi)皮細胞 eNOS
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 1 緒論9-17
• 1.1 問題的提出與研究意義9
• 1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀9-15
• 1.2.1 動脈粥樣硬化的研究進展9-10
• 1.2.2 血管內(nèi)皮細胞在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中的作用10-11
• 1.2.3 Ox-LDL致動脈粥樣硬化的研究進展11-13
• 1.2.4 PKD2在維持血管結構完整和功能性調(diào)控中的作用13-15
• 1.3 本文研究目的和研究內(nèi)容15
• 1.3.1 研究目的15
• 1.3.2 主要研究內(nèi)容15
• 1.4 本文創(chuàng)新點15-16
• 1.5 技術路線16-17
• 2 Ox-LDL下調(diào)內(nèi)皮細胞PKD2的表達和e NOS活性17-36
• 2.1 引言17-18
• 2.2 實驗材料18-21
• 2.2.1 主要儀器設備18
• 2.2.2 實驗試劑及藥品18-20
• 2.2.3 相關試劑的配制20-21
• 2.3 相關實驗方法21-30
• 2.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)的培養(yǎng)21-23
• 2.3.2 實時定量PCR(RT-PCR)檢測mRNA的表達水平23-26
• 2.3.3 免疫熒光染色法檢測蛋白表達水平26-27
• 2.3.4 Western blot檢測蛋白表達水平27-30
• 2.4 實驗結果30-34
• 2.4.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)的培養(yǎng)30-32
• 2.4.2 Ox-LDL下調(diào)PKD2的表達32-33
• 2.4.3 Ox-LDL下調(diào)eNOS的活性33-34
• 2.5 討論34-36
• 3 PKD2調(diào)節(jié)AMPK-eNOS信號通路36-44
• 3.1 引言36
• 3.2 實驗材料36-38
• 3.2.1 主要儀器設備36-37
• 3.2.2 實驗試劑及藥品37-38
• 3.2.3 相關試劑的配制38
• 3.3 相關實驗方法38-39
• 3.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)的培養(yǎng)38-39
• 3.3.2 實時定量PCR(RT-PCR)檢測mRNA的表達水平39
• 3.3.3 Western blot檢測蛋白表達水平39
• 3.4 實驗結果39-42
• 3.4.1 PKD2 siRNA下調(diào)PKD2的表達39-40
• 3.4.2 PKD2下調(diào)eNOS的活性40
• 3.4.3 PKD2介導AMPK途徑下調(diào)eNOS的活性40-42
• 3.5 討論42-44
• 4 體內(nèi)外PKD2介導Ox-LDL抑制的內(nèi)皮細胞eNOS活性44-54
• 4.1 引言44-45
• 4.2 實驗材料45-47
• 4.2.1 主要儀器設備45-46
• 4.2.2 實驗試劑及藥品46-47
• 4.2.3 相關試劑的配制47
• 4.3 相關實驗方法47-48
• 4.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)的培養(yǎng)47
• 4.3.2 實時定量PCR(RT-PCR)檢測mRNA的表達水平47-48
• 4.3.3 Western blot檢測蛋白表達水平48
• 4.4 實驗結果48-52
• 4.4.1 在體外，Ox-LDL通過AMPK途徑下調(diào)eNOS的活性48-50
• 4.4.2 在體內(nèi)，Ox-LDL下調(diào)PKD2的表達50-52
• 4.5 討論52-54
• 5 結論與展望54-55
• 5.1 本研究的主要結論54
• 5.2 后期研究的展望54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻56-64
• 附錄 作者在攻讀碩士學位期間參加的科研項目情況64

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4 劉s

本文編號：287561