本文關(guān)鍵詞：PKD2在Ox-LDL抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是發(fā)生于全身大中型動(dòng)脈血管的致命性病變,是導(dǎo)致心肌梗塞和腦梗塞等疾病發(fā)生的主要因素。研究表明,AS主要發(fā)生于動(dòng)脈血管的局部性區(qū)域,即動(dòng)脈血管的彎曲處和分叉處。學(xué)界認(rèn)為局部性血流動(dòng)力學(xué)因素所導(dǎo)致的動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷是AS形成的一個(gè)重要原因。研究發(fā)現(xiàn),在血流動(dòng)力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)的過程中,內(nèi)皮細(xì)胞纖毛(Cilia)起著關(guān)鍵性作用。其中,主要位于纖毛上的離子通道調(diào)控蛋白PKD2[polycystic kidney disease 2(autosomal dominant)]在血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為和管腔功能穩(wěn)態(tài)維持中起著重要的作用。前期研究結(jié)果顯示:低振蕩剪切應(yīng)力(OS)可顯著地抑制內(nèi)皮細(xì)胞PKD2蛋白的表達(dá),進(jìn)而導(dǎo)致血管功能障礙乃至AS的形成。同時(shí),已有的研究表明氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)是導(dǎo)致的動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷以及AS形成的一個(gè)重要原因。那么,Ox-LDL促血管內(nèi)皮損傷及AS形成是否是通過抑制PKD2蛋白的表達(dá)及其功能途徑?為此,本文開展了Ox-LDL對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞PKD2蛋白表達(dá)及其功能影響的研究。目的:以血管內(nèi)皮細(xì)胞PKD2蛋白功能為研究對(duì)象,確定Ox-LDL對(duì)PKD2蛋白表達(dá)及其功能的影響,以及PKD2調(diào)控e NOS的活性的分子信號(hào)機(jī)制。研究方法:采用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)PKD2和Ca MKKβ等基因的表達(dá)水平;免疫熒光染色法(ICC)、Western blotting等方法檢測(cè)PKD2、Ca MKKβ、p-AMPK、AMPK、p-e NOS蛋白的表達(dá)和活性。結(jié)果:(1)Ox-LDL可顯著抑制內(nèi)皮細(xì)胞PKD2的基因和蛋白表達(dá)水平,以及e NOS活性。(2)內(nèi)皮細(xì)胞PKD2基因沉默(si RNA)可顯著抑制PKD2的基因和蛋白表達(dá)水平,以及PKD2下游靶基因Ca MKKβ、p-AMPK等蛋白的表達(dá)和e NOS活性。(3)體外實(shí)驗(yàn)初步顯示:Ox-LDL可顯著抑制PKD2下游靶基因Ca MKKβ的基因表達(dá)水平以及AMPK的磷酸化;AMPK的激活劑AICAR可部分補(bǔ)救Ox-LDL下調(diào)的PKD2下游靶基因AMPK和e NOS的活性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明:長(zhǎng)期高脂喂食可顯著增加Apo E-/-小鼠的體重和血脂水平,抑制PKD2基因的表達(dá)水平。結(jié)論:(1)Ox-LDL可抑制內(nèi)皮細(xì)胞PKD2的基因和蛋白表達(dá)水平,以及e NOS的活性。(2)Ox-LDL可能通過PKD2信號(hào)途徑下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞e NOS的活性,進(jìn)而參與血管內(nèi)皮損傷及動(dòng)脈粥樣硬化的形成。
【關(guān)鍵詞】：Ox-LDL PKD2 內(nèi)皮細(xì)胞 eNOS
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 1 緒論9-17
• 1.1 問題的提出與研究意義9
• 1.2 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀9-15
• 1.2.1 動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展9-10
• 1.2.2 血管內(nèi)皮細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中的作用10-11
• 1.2.3 Ox-LDL致動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展11-13
• 1.2.4 PKD2在維持血管結(jié)構(gòu)完整和功能性調(diào)控中的作用13-15
• 1.3 本文研究目的和研究?jī)?nèi)容15
• 1.3.1 研究目的15
• 1.3.2 主要研究?jī)?nèi)容15
• 1.4 本文創(chuàng)新點(diǎn)15-16
• 1.5 技術(shù)路線16-17
• 2 Ox-LDL下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞PKD2的表達(dá)和e NOS活性17-36
• 2.1 引言17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料18-21
• 2.2.1 主要儀器設(shè)備18
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品18-20
• 2.2.3 相關(guān)試劑的配制20-21
• 2.3 相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法21-30
• 2.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的培養(yǎng)21-23
• 2.3.2 實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平23-26
• 2.3.3 免疫熒光染色法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平26-27
• 2.3.4 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平27-30
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-34
• 2.4.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的培養(yǎng)30-32
• 2.4.2 Ox-LDL下調(diào)PKD2的表達(dá)32-33
• 2.4.3 Ox-LDL下調(diào)eNOS的活性33-34
• 2.5 討論34-36
• 3 PKD2調(diào)節(jié)AMPK-eNOS信號(hào)通路36-44
• 3.1 引言36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料36-38
• 3.2.1 主要儀器設(shè)備36-37
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品37-38
• 3.2.3 相關(guān)試劑的配制38
• 3.3 相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法38-39
• 3.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的培養(yǎng)38-39
• 3.3.2 實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平39
• 3.3.3 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平39
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-42
• 3.4.1 PKD2 siRNA下調(diào)PKD2的表達(dá)39-40
• 3.4.2 PKD2下調(diào)eNOS的活性40
• 3.4.3 PKD2介導(dǎo)AMPK途徑下調(diào)eNOS的活性40-42
• 3.5 討論42-44
• 4 體內(nèi)外PKD2介導(dǎo)Ox-LDL抑制的內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性44-54
• 4.1 引言44-45
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料45-47
• 4.2.1 主要儀器設(shè)備45-46
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品46-47
• 4.2.3 相關(guān)試劑的配制47
• 4.3 相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法47-48
• 4.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的培養(yǎng)47
• 4.3.2 實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平47-48
• 4.3.3 Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平48
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-52
• 4.4.1 在體外，Ox-LDL通過AMPK途徑下調(diào)eNOS的活性48-50
• 4.4.2 在體內(nèi)，Ox-LDL下調(diào)PKD2的表達(dá)50-52
• 4.5 討論52-54
• 5 結(jié)論與展望54-55
• 5.1 本研究的主要結(jié)論54
• 5.2 后期研究的展望54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 附錄 作者在攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目情況64

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 管昌益;肖子杰;;對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有保護(hù)作用的中藥篩選[J];中醫(yī)藥通報(bào);2002年01期

2 李峻;許玲;魏品康;;消痰散結(jié)方對(duì)體外腫瘤誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年S1期

3 高笑舸,崔桅;中藥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究概況[J];天津藥學(xué);2003年02期

4 呂鶴,劉冉,張巍,袁云;血管內(nèi)皮細(xì)胞病變與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2005年02期

5 吳少科;曾榮;郭偉韜;;血管內(nèi)皮細(xì)胞在骨形成及修復(fù)中的作用及機(jī)制[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年06期

6 陳彥平;眭承志;;激素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用的影響的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊;2008年08期

7 王麗萍;祝光禮;;中醫(yī)藥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2008年12期

8 宋立群;周延萌;馬小茜;高允生;;中藥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2009年06期

9 韓建科;;氧化低密度脂蛋白損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年02期

10 曹梅;齊華林;李玉雯;陳春燕;桂莉;李偉;;瘦素在誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活物抑制物-1表達(dá)中的作用[J];海南醫(yī)學(xué);2011年24期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王麗萍;祝光禮;;中醫(yī)藥對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究進(jìn)展[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)心血管病專業(yè)委員會(huì)第七次學(xué)術(shù)年會(huì)暨省級(jí)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2007年

2 葉盛;張懷勤;林以諾;黃偉劍;張艷麗;邵小琳;;雷帕霉素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

3 楊宗城;;血管內(nèi)皮細(xì)胞在燒傷早期臟器損害的發(fā)病中起關(guān)鍵作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

4 鄭懷恩;李大元;王俊茹;Martin Hauer-Jensen;;他汀對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞放射防護(hù)作用的研究[A];全國(guó)非電離輻射與電離輻射生物效應(yīng)及防護(hù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

5 李震;黃紅林;;有機(jī)磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

6 王楠;呂欣;范傳東;霍思維;張尚立;苗俊英;;二甲基亞砜對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

7 李震;黃紅林;;有機(jī)磷對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

8 夏尊恩;李艷;汪明;;脫氫表雄酮抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的初步探索[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

9 徐軍;齊法蓮;陳英劍;胡成進(jìn);;金芪降糖片對(duì)糖尿病患者血管內(nèi)皮細(xì)胞及其功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

10 喬亮;陸樹良;高見佳宏;郭靜萍;優(yōu)美香;尾鄉(xiāng)賢;廖鎮(zhèn)江;史濟(jì)湘;;高糖對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];全國(guó)燒傷早期處理專題研討會(huì)論文集[C];2002年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 張超群；范曉莉;尼莫地平可保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

2 記者　劉云濤;保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞 防治糖尿病并發(fā)癥[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 山東濰坊市益都中心醫(yī)院血液科主任醫(yī)師 崔釗;感染時(shí)血小板為何減少[N];健康報(bào);2007年

4 董德伍;體外反搏研究進(jìn)入新階段[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2002年

5 萬(wàn)同己;VC、VE對(duì)DM患者腎臟的保護(hù)作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

6 廖福龍;用生物力藥理學(xué)研究中藥是一新領(lǐng)域[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 咼恒娟;睡眠呼吸暫停模式間歇低氧對(duì)大鼠淋巴細(xì)胞凋亡及淋巴細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

2 何霆;miR-542-3p抑制腫瘤新生血管的機(jī)制研究[D];清華大學(xué);2015年

3 楊小梅;黑龍江立克次體感染早期Tim-3的免疫學(xué)作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

4 劉s

本文編號(hào)：287561