背景缺血性心臟病是嚴(yán)重威脅人類健康的重要心血管疾病之一。我們前期的研究顯示自噬在缺血預(yù)適應(yīng)的心肌保護(hù)作用中發(fā)揮重要作用。但是缺血再灌注會(huì)因?yàn)檎T發(fā)過度自噬而導(dǎo)致缺血再灌注損傷。缺血預(yù)適應(yīng)這種短暫和輕微的氧化應(yīng)激如何避免自噬性細(xì)胞死亡從而發(fā)揮心肌保護(hù)作用,目前還不是很清楚。我們的研究擬通過細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討缺血預(yù)適應(yīng)是否通過動(dòng)力相關(guān)蛋白1介導(dǎo)的線粒體自噬拯救缺血再灌注心肌的自噬清除。方法在細(xì)胞試驗(yàn)中,H9C2心肌細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染線粒體基質(zhì)靶向標(biāo)記mito Ds Red(紅色)和自噬溶酶體標(biāo)記CD63-GFP(綠色)后,我們應(yīng)用H2O2培養(yǎng)基構(gòu)建構(gòu)建H9C2心肌細(xì)胞短暫輕微的氧化應(yīng)激模型,應(yīng)用營養(yǎng)饑餓培養(yǎng)基(HBSS)構(gòu)建H9C2心肌細(xì)胞非選擇性自噬模型,(1)檢測不同環(huán)境下ROS水平;(2)用激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體形態(tài)及線粒體與自噬溶酶體的共定位;(3)用電子顯微鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。然后用DRP1-si RNA沉默H9C2心肌細(xì)胞的DRP1表達(dá),再次經(jīng)過上述H2O2和HBSS培養(yǎng)基處理,以Western blot analysis檢測細(xì)胞自噬底物蛋白水平。在離體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,我們應(yīng)用Langendorff-Perfusion動(dòng)物模型,觀察Mi RNA499抑制DRP1去磷酸化對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞自噬的影響。結(jié)果細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,H202可以使ROS適度升高,從而誘發(fā)線粒體自噬而不觸發(fā)非選擇性自噬。饑餓環(huán)境下可以同時(shí)誘導(dǎo)線粒體自噬和非選擇性自噬,而敲除DRP1的表達(dá)時(shí),線粒體自噬被抑制,非選擇性自噬不受影響,說明DRP1介導(dǎo)了線粒體自噬過程。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明Mi R499可以通過抑制DRP1的激活,減少IPC心肌的線粒體自噬水平,說明IPC是通過DRP1介導(dǎo)的線粒體自噬發(fā)揮作用的。結(jié)論適度升高的活性氧可以獨(dú)立誘導(dǎo)線粒體自噬,而不誘導(dǎo)非選擇性自噬。IPC通過Drp1介導(dǎo)的線粒體自噬減輕氧化應(yīng)激和挽救缺血再灌注心肌的自噬清除。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R54
【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒言
2 實(shí)驗(yàn)研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)裝置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 ROS 流式檢測結(jié)果
    3.2 激光共聚焦和電子顯微鏡結(jié)果
    3.3 Western blot analysis
    3.4 Si RNA 轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞 P62、 LC3Western blot analysis
    3.5 離體大鼠心肌各組 DRP1、P62、 LC3B 濃度水平及 Western blotanalysis
4 結(jié)果分析與結(jié)論
    4.1 結(jié)果分析
    4.2 討論
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)

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