本文關(guān)鍵詞：1-磷酸鞘氨醇信號通過TGF-β-纖維化促進(jìn)心肌梗死后心肌重構(gòu)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 心肌梗死（MI）是導(dǎo)致心力衰竭（HF）最常見的原因。以成纖維細(xì)胞活化和心肌纖維化為特點的心肌重構(gòu)是心衰發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)。然而，導(dǎo)致心梗后心衰發(fā)展過程中成纖維細(xì)胞活化和心肌纖維化的具體機(jī)制目前尚不完全清楚。 1-磷酸鞘氨醇（S1P）是鞘脂類物質(zhì)的代謝產(chǎn)物，具有抗凋亡、促炎、誘導(dǎo)纖維化等多種生物作用，參與調(diào)控全身多種病理生理過程。機(jī)體中存在多種調(diào)控S1P水平的合成酶和降解酶類。鞘氨醇激酶（SphK1）是調(diào)控心肌S1P生成的關(guān)鍵酶，S1P裂解酶（SPL）是催化S1P降解的唯一不可逆性酶類，兩者均是細(xì)胞內(nèi)調(diào)控S1P水平的關(guān)鍵酶。 本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，S1P可通過抑制心肌細(xì)胞凋亡減輕心肌缺血/再灌注損傷。然而，越來越多的實驗研究發(fā)現(xiàn)，局部S1P水平增高可導(dǎo)致多個組織/器官發(fā)生炎癥反應(yīng)和纖維化。那么，MI后心肌組織中是否存在S1P水平增高？S1P是否促進(jìn)心肌纖維化和心衰進(jìn)展？目前均不完全清楚。研究發(fā)現(xiàn)SphK1過表達(dá)小鼠出現(xiàn)心肌肥厚和心肌纖維化等心肌重構(gòu)表現(xiàn)。然而，SPL在MI后病理性心肌重構(gòu)中的作用卻尚未見報道。實驗?zāi)康?（1） MI后心肌組織中SphK1和S1P的變化 （2）通過抑制SPL活性增加S1P水平，，觀察S1P對MI后心肌重構(gòu)的作用和機(jī)制 實驗方法 （1）12只成年雄性C57BL/6J小鼠（25~30g，第四軍醫(yī)大學(xué)動物中心提供）行左冠狀動脈前降支結(jié)扎術(shù)，建立心肌梗死（MI, n=6）模型或假手術(shù)（Sham,n=6）模型； （2） MI后4周，采用western blot檢測心肌組織中SphK1的蛋白水平； （3）采用ELISA試劑盒，分別檢測MI和Sham組小鼠手術(shù)4周后血清和心肌組織中的S1P水平； （4）分離培養(yǎng)乳鼠心臟成纖維細(xì)胞，分別采用0、0.1、1.0和10umol/L的S1P處理24小時，采用western blot和實時定量PCR分別檢測成纖維細(xì)胞TGF-β的蛋白和mRNA表達(dá)； （5）采用SPL的siRNA轉(zhuǎn)染乳鼠心臟成纖維細(xì)胞，48小時后采用western blot檢測SPL蛋白表達(dá)，再檢測S1P處理對細(xì)胞TGF-β蛋白表達(dá)的影響； （6）60只成年雄性C57/BL6J小鼠隨機(jī)分為以下4組：假手術(shù)組（Sham, n=10）、心肌梗死組（MI, n=20）、假手術(shù)+THI組（Sham+THI, n=10）和心肌梗死+THI組（MI+THI, n=20）。其中，THI是SPL的特異性抑制劑，以25mg/L溶于飲水中，于MI或sham術(shù)后24h首次飼喂小鼠，2次/天，飼喂2周； （7） MI4周后，采用ELISA試劑盒檢測心肌組織中S1P含量；（與3重復(fù)） （8） MI4周后，采用western blot檢測TGF-β蛋白表達(dá)； （9） MI4周后，采用實時定量PCR檢測心肌組織中Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原的mRNA表達(dá)； （10） MI4周后，采用小動物心臟超聲儀評估小鼠心臟結(jié)構(gòu)和心臟功能變化； （11） MI4周后，根據(jù)HW/BW評價心肌肥厚； （12） MI4周后，采用masson-trichrome染色檢測心肌纖維化； （13） MI4周后，采用實時定量PCR檢測心肌組織中ANP、BNP和α-SMA的mRNA表達(dá)。 實驗結(jié)果 （1）與Sham組相比，小鼠MI4周后心肌組織中SphK1蛋白表達(dá)顯著升高（P0.05）； （2）與Sham組相比，小鼠MI4周后血清S1P濃度無顯著改變，但心肌組織中S1P水平明顯增高（P0.05）； （3）在分離培養(yǎng)的乳鼠心臟成纖維細(xì)胞中，S1P劑量依賴性增加TGF-β的蛋白和mRNA表達(dá)，1.0μmol/L的S1P即可顯著增加TGF-β的蛋白和mRNA表達(dá)（均P0.05）； （4） SPL的siRNA轉(zhuǎn)染后48小時，乳鼠心臟成纖維細(xì)胞中SPL顯著下降（P0.05）；SPL的siRNA顯著增加S1P對成纖維細(xì)胞TGF-β蛋白表達(dá)的上調(diào)作用（P0.05）； （5）手術(shù)4周后，與Sham組相比，Sham+THI組小鼠心肌組織中S1P的水平顯著增加（P0.05）；與Sham組相比，MI組小鼠心肌組織中S1P的水平顯著增加（P0.05）；與MI組相比，MI+THI組小鼠心肌組織中S1P的水平顯著增加（P0.05）； （6）手術(shù)4周后，western blot結(jié)果顯示：與Sham組相比，Sham+THI組小鼠心肌組織中TGF-β蛋白表達(dá)顯著增加（P0.05）；與Sham組相比，MI組小鼠心肌組織中TGF-β蛋白表達(dá)顯著增加（P0.05）；與MI組相比，MI+THI組小鼠心肌組織中TGF-β蛋白表達(dá)顯著增加（P0.05）； （7）手術(shù)4周后，實時定量PCR結(jié)果顯示：與Sham組相比，Sham+THI組小鼠心肌組織中Col1a1，Col3a1的mRNA表達(dá)顯著增加（兩者P0.05）；與Sham組相比，MI組小鼠心肌組織中Col1a1，Col1a3，Col3a1的mRNA表達(dá)顯著增加（均P0.05）；與MI組相比，MI+THI組小鼠心肌組織中Col1a1，Col1a3，Col3a1的mRNA表達(dá)顯著增加（均P0.05）； （8）手術(shù)4周后，小動物超聲心動圖結(jié)果顯示：與Sham組相比，Sham+THI組小鼠左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）和舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）均無顯著變化；與Sham組相比，MI組小鼠LVEF顯著降低（P0.05）、LVESD和LVEDD均顯著增大（均P0.05）；與MI組相比，MI+THI組小鼠射血分?jǐn)?shù)進(jìn)一步降低（P0.05）、LVESD和LVEDD均進(jìn)一步增大（均P0.05）； （9）手術(shù)4周后，與Sham組相比，Sham+THI組小鼠HW/BW比值無明顯改變；與Sham組相比，MI組小鼠HW/BW比值顯著增大（P0.05）；與MI組相比，MI+THI組小鼠HW/BW比值進(jìn)一步增大（P0.05）； （10）手術(shù)4周后，masson-trichrome染色結(jié)果顯示：與Sham組相比，Sham+THI組小鼠心肌纖維化程度無明顯改變；與Sham組相比，MI組小鼠心肌纖維化程度明顯加重；與MI組相比，MI+THI組小鼠心肌纖維化程度進(jìn)一步加重； （11）手術(shù)4周后，實時定量PCR結(jié)果顯示：與Sham組相比，Sham+THI組小鼠心肌組織中的ANP，BNP和α-SMA的mRNA表達(dá)無顯著改變；與Sham組相比，MI組小鼠心肌組織中ANP，BNP和α-SMA的mRNA表達(dá)顯著增加（均P0.05）；與MI組相比，MI+THI組小鼠心肌組織中ANP，BNP和α-SMA的mRNA表達(dá)顯著增加（均P0.05）。 結(jié)論 通過在體動物實驗和體外細(xì)胞實驗，本研究發(fā)現(xiàn)： （1）心肌梗死后心肌中S1P信號上調(diào)； （2） S1P上調(diào)TGF-β信號促進(jìn)心肌纖維化； （3）抑制SPL活性上調(diào)S1P信號加重MI后心肌重構(gòu)和心功能紊亂。
【關(guān)鍵詞】：1-磷酸鞘氨醇 1-磷酸鞘氨醇裂解酶 心肌梗死 心力衰竭 纖維化 腫瘤壞死因子-β
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R542.22
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• Abstract11-16
• 前言16-18
• 文獻(xiàn)回顧18-27
• 1 實驗材料27-30
• 1.1 實驗動物及分組27
• 1.2 主要儀器設(shè)備27-28
• 1.3 主要試劑材料28-30
• 2 實驗方法30-40
• 2.1 制備小鼠心肌梗死（MI）模型30
• 2.2 小動物心臟超聲儀測定心臟結(jié)構(gòu)和心臟功能30-31
• 2.3 心臟標(biāo)本的取材31
• 2.4 Masson-trichrome 染色31-32
• 2.5 Western blot32-35
• 2.6 總 RNA 的提取、反轉(zhuǎn)錄和 Real-time PCR35-37
• 2.7 心臟成纖維細(xì)胞的分離和培養(yǎng)37-40
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)分析40
• 3. 實驗結(jié)果40-49
• 3.1 MI 后心肌組織中 S1P 的生成酶 SphK1 表達(dá)顯著增加40-41
• 3.2 MI 所致心衰小鼠心肌組織中 S1P 含量顯著升高41-42
• 3.3 S1P 上調(diào)心臟成纖維細(xì)胞 TGF-β mRNA 與蛋白表達(dá)42-44
• 3.4 下調(diào) SPL 表達(dá)顯著增加心臟成纖維細(xì)胞 TGF-β蛋白表達(dá)44
• 3.5 SPL 特異性抑制劑 THI 能夠顯著上調(diào)左心室 S1P 水平44-45
• 3.6 抑制 SPL 活性顯著上調(diào)左心室 TGF-β表達(dá)45-46
• 3.7 抑制 SPL 活性顯著上調(diào)左心室膠原蛋白基因表達(dá)46-47
• 3.8 THI 飼喂增加了心梗后心臟重量與體重比值47
• 3.9 THI 飼喂加重了心梗后心功能紊亂47-48
• 3.10 THI 飼喂增加了心梗后左心室重構(gòu)基因表達(dá)48-49
• 3.11 THI 飼喂加重了心梗后心臟病理性結(jié)構(gòu)改變與間質(zhì)膠原沉積49
• 4 討論49-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-64
• 個人簡介及研究成果64-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張海嘯;史載祥;;中西醫(yī)結(jié)合防治心肌纖維化的研究進(jìn)展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2006年09期

  本文關(guān)鍵詞：1-磷酸鞘氨醇信號通過TGF-β-纖維化促進(jìn)心肌梗死后心肌重構(gòu)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：283274