【摘要】：目的:完善對(duì)心肌組織樣結(jié)構(gòu)的鑒定,探究不同心肌組織裂解液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)定向分化的影響;探究組織工程化心肌的構(gòu)建。方法:以全心組織裂解液定向誘導(dǎo)BMSCs分化為心肌組織樣結(jié)構(gòu)為實(shí)驗(yàn)對(duì)照,分別用心房肌組織裂解液、心室肌組織裂解液誘導(dǎo)BMSCs定向分化。倒置相差顯微鏡下觀察誘導(dǎo)過程中細(xì)胞的形態(tài)變化,透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)各組細(xì)胞相關(guān)蛋白(α-actin和cTnI),qRT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞ANP、HCN4和MLC-2v基因的表達(dá)。采用免疫熒光組織化學(xué)染色方法,檢測(cè)心肌組織樣結(jié)構(gòu)內(nèi)相關(guān)蛋白(collagenⅠ、collagenⅢ、VEGF、vWF、CD31以及cTnI),探究心肌組織樣結(jié)構(gòu)的構(gòu)成。結(jié)果:(1)全心組織裂解液能誘導(dǎo)BMSC分化為較復(fù)雜的心肌組織樣結(jié)構(gòu),經(jīng)免疫熒光染色法檢測(cè),可見結(jié)構(gòu)內(nèi)有cTn I、VEGF、vWF、CD31陽性細(xì)胞,細(xì)胞間檢測(cè)出collagenⅠ、collagenⅢ,且以collagenⅠ為主。(2)全心組織裂解液能誘導(dǎo)BMSCs分化為較復(fù)雜的心肌組織樣結(jié)構(gòu),在同等條件下,心房肌組織裂解液和心室肌組織裂解液不能誘導(dǎo)出心肌組織樣結(jié)構(gòu)。(3)心房肌組織裂解液組,在誘導(dǎo)分化的過程中,觀察到有大量的分泌顆粒產(chǎn)生。(4)心房肌組織裂解液誘導(dǎo)組中可檢測(cè)到ANP、HCN4高表達(dá),MLC-2v不表達(dá)。心室肌組織裂解液誘導(dǎo)組中可檢測(cè)到MLC-2v高表達(dá),ANP、HCN4不表達(dá)。結(jié)論:全心組織裂解液誘導(dǎo)BMSCs形成的心肌組織樣結(jié)構(gòu),不僅有心肌樣細(xì)胞,還有早期分化的內(nèi)皮樣細(xì)胞;結(jié)締組織包裹心肌樣細(xì)胞形成束狀結(jié)構(gòu),內(nèi)含大量主要成分為Ⅰ型膠原蛋白的膠原纖維。心房肌組織裂解液可誘導(dǎo)BMSCs向心房肌細(xì)胞方向分化,心鈉素ANP高表達(dá),竇房結(jié)細(xì)胞標(biāo)志物HCN4高表達(dá)。心室肌組織裂解液可誘導(dǎo)BMSCs向心室肌細(xì)胞方向分化,心室肌細(xì)胞特異性肌球蛋白輕鏈MLC-2v高表達(dá)。功能活動(dòng)對(duì)形態(tài)與結(jié)構(gòu)的發(fā)生、發(fā)育有重要的促進(jìn)作用,是形態(tài)與結(jié)構(gòu)發(fā)育成熟的必備條件。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R542.2
【圖文】：

-aP0BMSCs培養(yǎng)3d（×5）

-bP0BMSCs培養(yǎng)7d（×5）

-c P3 BMSCs 培養(yǎng) 3d（×5） 圖 1-1-d P3 BMSCs 培養(yǎng) 7d（×5）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2743926