【摘要】：遺傳性紅細胞病包括由紅細胞酶缺陷,血紅蛋白病,紅細胞膜組分異常等引起的以貧血為主要臨床表現(xiàn)的遺傳性疾病,是目前全球最常見的遺傳性疾病之一。在本研究中,我們收集了兩個遺傳性紅細胞病的家系,并對這兩個家系進行了分子遺傳學研究,分析了相關致病基因并鑒定了致病突變。第一部分 一個新的β珠蛋白基因簇大片段缺失導致δβ-地中海貧血背景β-地中海貧血主要以常染色體隱性遺傳為主,其致病的分子基礎是β-基因發(fā)生突變,導致β-珠蛋白合成減少,α-和β-珠蛋白鏈比例失衡,多余的α-珠蛋白沉積在紅細胞膜上,造成了紅細胞的損壞。由β-珠蛋白基因簇大片段缺失導致的β-地中海貧血比較罕見,在中國南方人群中出現(xiàn)頻率較高的缺失主要是中國型缺失以及東南亞型HPFH。本研究中,我們發(fā)現(xiàn)了一例重型β地中海貧血病人,該病人有一個來自父方的β地貧常見突變CD41-42(HBB:c.126_129del CTTT),來自母方的是一個新的β-珠蛋白基因簇大片段缺失本文通過家系研究對這一 β-珠蛋白基因簇大片段缺失進行分子鑒定,分析其對β-珠蛋白基因表達及其對患者表型的影響。材料與方法1.研究對象:先證者是來自江西的一位3歲女性,從4個月大時開始出現(xiàn)嚴重的溶血性貧血,從6個月大時每個月輸血2個單位,被診斷為重型地中海貧血,HBB基因測序顯示基因型為βCD41-42/βCD41-42,但是先證者的父母中只有父親基因型為βCD4142/βN。MLPA分析發(fā)現(xiàn)先證者及其母親DNA樣本中可檢出一個大片段缺失。2.實驗方法:通過NGS捕獲測序技術預測該缺失突變的斷裂點區(qū)域,并根據(jù)Gap-PCR的原理和方法,在斷裂點的兩端設計特異性引物,PCR擴增出特異性產(chǎn)物進行Sanger測序鑒定大片段缺失的準確斷裂點位置。結果先證者臨床診斷為重型地中海貧血(Thalassemia Major,TM),分別遺傳了父親的CD41-42(HBB:c.126 129del CTTT)與母親的大片段缺失。NGS預測該缺失突變長度約為222 kb,通過Gap-PCR方式擴增出重組DNA特異性條帶,對PCR產(chǎn)物進行Sanger測序驗證了這個缺失范圍為chr11:5031238-5254163(hg19),缺失大小為222,920 bp,斷裂點區(qū)存在一個四個堿基(GTCT)的微同源序列。結論1.本研究報道了一個全新的β-珠蛋白基因簇大片段缺失β223 kbdel,豐富了地中海貧血的突變譜,可加深對中國人群地貧類型的認識。2.MLPA與NGS技術結合,有助于提高罕見或者新發(fā)的拷貝數(shù)變異的檢出率。第二部分 一個遺傳性球形紅細胞增多癥家系致病突變的鑒定背景遺傳性球型紅細胞增多癥(Hereditary Spherocytosis,HS)是一種在世界范圍內(nèi)常見的遺傳性紅細胞膜疾病,臨床表現(xiàn)為貧血,黃疸,脾腫大,在血涂片中可見球形紅細胞,通過基因分析發(fā)現(xiàn)致病基因突變可以為臨床診斷提供有力證據(jù)。在本研究中,我們通過收集到一個遺傳性球紅的家系,并對其致病原因進行了分子遺傳學研究,在ANK1基因上發(fā)現(xiàn)了一個移碼突變(ANK1:c.2394_2397del CAGT)。材料與方法1.研究對象:先證者是一位來自廣東的6歲男性貧血患者,病因不明。檢查發(fā)現(xiàn)先證者脾臟增大,先證者父親因不明原因溶血在6歲時行脾全切術。我們在先證者及其父親的外周血中發(fā)現(xiàn)球形紅細胞。2.研究方法:采集先證者及其家庭成員外周血,采用SDS-PAGE對紅細胞膜蛋白成分進行分析。對錨蛋白ANK1基因進行Sanger測序查找致病突變。研究結果SDS-PAGE證實了 HS的診斷并提示該病例的錨蛋白缺失。對先證者及其父親的錨蛋白ANK1基因測序后發(fā)現(xiàn),22號外顯子存在四個堿基的缺失突變ANK1:c.2394 2397del CAGT。cDNA測序結果可見輕微套峰,突變后等位基因DNA序列一致,提示mRNA轉錄后被降解。結論1.我們確診了一例HS患者并明確了致病突變位點ANK1:c.2394 2397del CAGT,同時通過cDNA測序發(fā)現(xiàn)突變后等位基因的mRNA在體內(nèi)存在表達但表達量較低。2.ANK1：c.2394 2397del CAGT導致錨蛋白表達量下降,是導致球形紅細胞產(chǎn)生的主要原因。3.本研究表明SDS-PAGE結合Sanger測序可以作為HS基因分析的一種手段。
【圖文】：

圖１３１逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１．邋Ｉ邋ｈｃ邋ｔｌｉａｌａｓｓｅｍｉａ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｗｏｒｌｄ邋ａｎｄ邋Ｃ邋ｈｉｎａ逡逑

ＬＣＲ是存在于基因族上游的座位調(diào)控區(qū)（ｌｏｃｕｓ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｒｅｇｉｏｎ，邋ＬＣＲ），該調(diào)控位逡逑點對類（３－珠蛋白基因簇上的所有基因表達都非常重要。人體發(fā)育不同時期表達逡逑的（３珠蛋白示意如圖１－２所示。逡逑Ｓ邐Ｙｏｌｋ邋ｓａｃ邐Ｌｉｖｅｒ邐Ｓｐｌｅｅｎ邐：邐Ｂｏｎｅ邋ｍａｒｒｏｗ逡逑Ｈ邐１逡逑0＞邋ｌ00邐■邐邐邐邐—邋■邐－邐邐逡逑0邋ｉ邐ｉ邐ｉ邋＾ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐Ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ邐ｉ逡逑0３６邐Ｂｉｒｔｈ邐１２邐Ａｄｕｌｔ逡逑Ｐｏｓｔ－ｃｏｎｃｅｐｔｕａｌ邋ａｇｅ邋（ｍｏｎｔｈｓ）邐Ｐｏｓｔｎａｔａｌ邋ａｇｅ邋（ｍｏｎｔｈｓ）逡逑圖１－２人體發(fā)育不同時期的珠蛋白表達示意圖ｗ逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｎｏｎｎａｌ邋ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ邋ｓｗｉｔｃｈｅｓ邋ｉｎ邋ｇｌｏｂｉｎ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑全球每年約有３０萬血紅蛋白缺陷的嬰兒誕生，其中１７％是地中海貧血｜ｈ逡逑７１。據(jù)徐湘民主編的《地中海貧血預防控制操作指南》記載，，全球有８０００萬－逡逑９０００萬人是卩－地貧基因突變攜帶者，這些攜帶者婚配生育的下一代有１／４的逡逑機率患有嚴重的溶血性貧血癥狀的地中海貧血（中間型（３－地貧或重型（３－地逡逑貧
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R555

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本文編號：2663257