【摘要】：目的研究非對(duì)稱二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)對(duì)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC)的損傷作用,并探討內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)增強(qiáng)劑AVE3085對(duì)ADMA損傷的HCAEC的保護(hù)作用。方法原代培養(yǎng)的HCAEC分4個(gè)組:對(duì)照組、ADMA組、ADMA+AVE3085組、ADMA+DMSO組,在含相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后,應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞中eNOS基因的表達(dá);應(yīng)用Western-Blot方法檢測(cè)細(xì)胞中eNOS和磷酸化eNOS(p-eNOSser1177)蛋白的表達(dá)量;應(yīng)用熒光探針檢測(cè)細(xì)胞NO的釋放量和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成量;應(yīng)用熒光鏡檢和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果與對(duì)照組比較,ADMA使eNOS表達(dá)顯著下調(diào)(F=1041.17,q=80.50,P0.01),eNOS和p-eNOSser1177表達(dá)量也隨之下降(F=391.35~432.74,q=23.55~34.62,P0.01),NO釋放量降低(F=600.36,q=32.18,P0.01),ROS生成增加(F=918.05,q=38.62,P0.01),凋亡細(xì)胞的數(shù)量顯著增加(F=126.98~361.55,q=13.60~24.53,P0.01)。與ADMA組相比,ADMA+AVE3085可顯著恢復(fù)eNOS-m RNA的表達(dá)(F=1041.17,q=36.83,P0.01),上調(diào)eNOS和p-eNOSser1177蛋白的表達(dá)(F=391.35~432.74,q=22.35~35.41,P0.01),促進(jìn)NO釋放(F=600.36,q=28.17,P0.01),抑制ROS生成(F=918.05,q=34.11,P0.01),顯著抑制細(xì)胞凋亡(F=126.98~361.55,q=12.65~21.91,P0.01)。結(jié)論ADMA對(duì)HCAEC具有損傷作用。AVE3085通過上調(diào)eNOS基因,eNOS和p-eNOSser1177蛋白的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞NO釋放,抑制細(xì)胞ROS的產(chǎn)生和凋亡對(duì)HCAEC起到保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.4

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本文編號(hào)：2584153