【摘要】：目的探討辛伐他汀在氧化低密度脂蛋白(ox LDL)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞焦亡中的作用及機(jī)制。方法 ox LDL作用于J774A.1小鼠巨噬細(xì)胞,采用乳酸脫氫酶(LDH)釋放試劑盒檢測(cè)LDH的釋放,熒光顯微鏡觀(guān)察吖啶橙(AO)、溴化乙錠(EB)的染色情況來(lái)判斷焦亡細(xì)胞膜的完整性;Western blot檢測(cè)LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-1與白介素-1β(IL-1β)的蛋白表達(dá)情況;分別加入辛伐他汀、3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬阻斷劑等藥物后,檢測(cè)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果的變化情況。結(jié)果在ox LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞脂質(zhì)聚集的過(guò)程中,辛伐他汀藥物有保護(hù)膜完整性的作用,并且顯著減少LDH的釋放,AO/EB熒光染色結(jié)果可觀(guān)察到橘紅色熒光(EB)所占比例顯著降低,并抑制caspase-1的激活和IL-1β的分泌。然而,當(dāng)巨噬細(xì)胞的自噬過(guò)程被3-MA所阻斷時(shí),Western blot結(jié)果顯示LC3-Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)下調(diào),caspase-1的活性和成熟的IL-1β分泌增加;同時(shí)LDH實(shí)驗(yàn)和染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示,LDH釋放增多、AO/EB染色中橘紅色熒光增加,表明ox LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞膜的損傷進(jìn)一步加重。結(jié)論辛伐他汀可抑制ox LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡,可能與增強(qiáng)ox LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞自噬有關(guān)。
【圖文】：

。2．1．2AO/EB染色結(jié)果在應(yīng)用oxLDL后，EB橘紅色熒光顯著上升;與正常細(xì)胞組相比，加入不同濃度辛伐他汀(0.5、1.0μmol/L)后，EB的熒光無(wú)明顯變化;而在oxLDL的基礎(chǔ)上加入辛伐他汀后，EB橘紅色熒光所占的比例呈減少的趨勢(shì)。見(jiàn)圖1B。2．23-MA阻斷辛伐他汀對(duì)oxLDL介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞自噬的增強(qiáng)作用在ox-LDL及1.0μmol/L辛伐他汀處理的J774A.1細(xì)胞中，在3-MA的作用下，LC3-Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)明顯下降至(0.32±4.65)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=224.05，P＜0.01)。見(jiàn)圖2。2．33-MA阻斷自噬對(duì)辛伐他汀抑制oxLDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡影響圖1LDH的釋放和AO/EB復(fù)染情況A:LDH的釋放;B:AO/EB復(fù)染×400;1:對(duì)照組;2:oxLDL;3:0．5μmol/L辛伐他汀;4:1．0μmol/L辛伐他汀;5:oxLDL+0．5μmol/L辛伐他汀;6:oxLDL+1．0μmol/L辛伐他汀;與oxLDL比較:#P＜0.05圖23-MA作用巨噬細(xì)胞LC3-Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)1:oxLDL;2:oxLDL+辛伐他汀;3:oxLDL+辛伐他汀+3-MA;與oxLDL+辛伐他汀比較:##P＜0.012．3．13-MA作用后LDH釋放檢測(cè)結(jié)果正常細(xì)安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Nov;52(11)·1655·

少的趨勢(shì)。見(jiàn)圖1B。2．23-MA阻斷辛伐他汀對(duì)oxLDL介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞自噬的增強(qiáng)作用在ox-LDL及1.0μmol/L辛伐他汀處理的J774A.1細(xì)胞中，在3-MA的作用下，LC3-Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)明顯下降至(0.32±4.65)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=224.05，，P＜0.01)。見(jiàn)圖2。2．33-MA阻斷自噬對(duì)辛伐他汀抑制oxLDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞焦亡影響圖1LDH的釋放和AO/EB復(fù)染情況A:LDH的釋放;B:AO/EB復(fù)染×400;1:對(duì)照組;2:oxLDL;3:0．5μmol/L辛伐他汀;4:1．0μmol/L辛伐他汀;5:oxLDL+0．5μmol/L辛伐他汀;6:oxLDL+1．0μmol/L辛伐他汀;與oxLDL比較:#P＜0.05圖23-MA作用巨噬細(xì)胞LC3-Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)1:oxLDL;2:oxLDL+辛伐他汀;3:oxLDL+辛伐他汀+3-MA;與oxLDL+辛伐他汀比較:##P＜0.012．3．13-MA作用后LDH釋放檢測(cè)結(jié)果正常細(xì)安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Nov;52(11)·1655·

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