【摘要】：研究背景動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病,不穩(wěn)定粥樣硬化斑塊的破裂導致血栓形成及急性冠脈綜合癥的發(fā)生�；|(zhì)金屬蛋白-9可以降解細胞外基質(zhì),研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達分泌失衡,與粥樣斑塊的不穩(wěn)定密切相關。脂多糖與去甲腎上腺素均可參與粥樣斑塊的病理發(fā)展過程。但脂多糖與去甲腎上腺素如何調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達及相關的機制仍不清楚。我們的研究目的是探討去甲腎上腺素與脂多糖,這兩種與動脈粥樣硬化相關的因子,對于基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達的調(diào)控及機制。研究方法單核細胞參與粥樣硬化斑塊的病理進程。我們利用單核細胞系THP-1以及THP-1誘導分化來的巨噬細胞測定去甲腎上腺素與LPS對基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達的影響。主要研究方法包括：1.利用實時定量PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶,基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1mRNA在單核細胞的表達情況。2.利用Elisa測定細胞上清中基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的表達。3.利用明膠酶譜方法測定THP-1以及THP-1誘導而來的巨噬細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9的明膠降解活性。4. Western Blot實驗研究去甲腎上腺素與脂多糖對基質(zhì)金屬蛋白酶-9分泌相關信號通路的調(diào)控。5.通過應用腎上腺素受體抑制劑,MAPK通路抑制劑以及C-FOS siRNA等干預手段來闡明具體的機制。研究結(jié)果1.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導的THP-1細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9/基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的mRNA以及蛋白表達。2.在THP-1及THP-1誘導的巨噬細胞,去甲腎上腺素可以增強脂多糖介導的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的酶活性。3. Beta腎上腺素受體抑制劑普萘洛爾預處理可以抑制去甲腎上腺素／脂多糖介導的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達,而alpha腎上腺素受體抑制劑酚妥拉明則沒有作用。4.去甲腎上腺素上調(diào)脂多糖介導的單核細胞ERK, JNK的磷酸化水平,并抑制P38的激活。ERK, JNK抑制劑抑制了去甲腎上腺素和脂多糖介導的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的分泌及酶活性。5.去甲腎上腺素可以上調(diào)LPS介導的C-FOS的表達。這種作用可以被ERK, JNK的抑制劑以及普萘洛爾所逆轉(zhuǎn)。C-FOS敲低后,去甲腎上腺素/LPS介導的MMP-9的酶活性上調(diào)被抑制。6.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導的C-JUN的磷酸化水平。結(jié)論1.去甲腎上腺素可以增強脂多糖介導的單核細胞與巨噬細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達及酶活性。2.去甲腎上腺素通過激活Beta腎上腺素受體來實現(xiàn)與脂多糖的協(xié)同作用。3.去甲腎上腺素通過激活細胞內(nèi)的ERK/JNK信號通路調(diào)控脂多糖介導的THP-1基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達。4.AP-1轉(zhuǎn)錄因子的組成成分C-FOS以及C-JUN在去甲腎上腺素與脂多糖協(xié)同介導基質(zhì)金屬蛋白酶-9的過程中起重要作用。
【圖文】：

單核細胞可ＬNB粗附在活化的內(nèi)皮細胞，浸潤聚集在斑塊區(qū)域，分化成為巨途細逡逑胞。巨噓細胞吞噓脂質(zhì)，形成泡沫細胞。這些免疫細胞同時可！＾NB分泌《種炎癥因逡逑子，促進平滑肌細胞的遷移增趣，促進斑塊的進展（［２－７］（圖１－１）。在動脈粥逡逑樣硬化斑塊易破裂的部位，也往往是免疫細胞大量聚集的部位巧］。這提示我們，逡逑單核及巨哇細胞與斑塊的穩(wěn)定性密切相關。逡逑基質(zhì)金屬蛋白酶－９邋（Ｍａｔｒｉｘ邋ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９，ＭＭＰ－９）是邋ＭＭＰ邋家族的一逡逑員，又被稱為明膠酶Ｂ（ｇｅｌａｔｉｎ邋Ｂ）。ＭＭＰ－９及其內(nèi)源性抑制劑（ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ邋ｏｆ逡逑ｍａｔｒｉｘ邋ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１，ＴＩＭＰ４）共同參與維持細胞外基質(zhì)的平衡［９－１３］。除此逡逑之外，ＭＭＰ－９的底物還包括炎癥因子，，細胞因子等［１４－１６］。近些年的研究證實，逡逑ＭＭＰ－９與粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性相關［１７，邋１|�。噎h(huán)矯媯停停校箍桑。轓B通過降解細逡逑胞外基質(zhì)

５．２０００ｘ２０ｎｉｉｎ。逡逑可從看到血樣被分為四層，第一層：為血漿或紐織勻漿液層。第二層：狀乳白包單個核細胞。第Ｅ層：為透明分離液層。第四層；為紅細胞層。吸管將６管中的第二層白朦層（２０山）轉(zhuǎn)移到５０ｍｌ離，心管，加入５０ｍｌ生（圖邋３－１邋）。逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5

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