【摘要】：研究背景動(dòng)脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病,不穩(wěn)定粥樣硬化斑塊的破裂導(dǎo)致血栓形成及急性冠脈綜合癥的發(fā)生�；|(zhì)金屬蛋白-9可以降解細(xì)胞外基質(zhì),研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)分泌失衡,與粥樣斑塊的不穩(wěn)定密切相關(guān)。脂多糖與去甲腎上腺素均可參與粥樣斑塊的病理發(fā)展過程。但脂多糖與去甲腎上腺素如何調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)及相關(guān)的機(jī)制仍不清楚。我們的研究目的是探討去甲腎上腺素與脂多糖,這兩種與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的因子,對于基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的調(diào)控及機(jī)制。研究方法單核細(xì)胞參與粥樣硬化斑塊的病理進(jìn)程。我們利用單核細(xì)胞系THP-1以及THP-1誘導(dǎo)分化來的巨噬細(xì)胞測定去甲腎上腺素與LPS對基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的影響。主要研究方法包括：1.利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶,基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1mRNA在單核細(xì)胞的表達(dá)情況。2.利用Elisa測定細(xì)胞上清中基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的表達(dá)。3.利用明膠酶譜方法測定THP-1以及THP-1誘導(dǎo)而來的巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9的明膠降解活性。4. Western Blot實(shí)驗(yàn)研究去甲腎上腺素與脂多糖對基質(zhì)金屬蛋白酶-9分泌相關(guān)信號通路的調(diào)控。5.通過應(yīng)用腎上腺素受體抑制劑,MAPK通路抑制劑以及C-FOS siRNA等干預(yù)手段來闡明具體的機(jī)制。研究結(jié)果1.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的THP-1細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9/基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的mRNA以及蛋白表達(dá)。2.在THP-1及THP-1誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞,去甲腎上腺素可以增強(qiáng)脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的酶活性。3. Beta腎上腺素受體抑制劑普萘洛爾預(yù)處理可以抑制去甲腎上腺素／脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá),而alpha腎上腺素受體抑制劑酚妥拉明則沒有作用。4.去甲腎上腺素上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的單核細(xì)胞ERK, JNK的磷酸化水平,并抑制P38的激活。ERK, JNK抑制劑抑制了去甲腎上腺素和脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的分泌及酶活性。5.去甲腎上腺素可以上調(diào)LPS介導(dǎo)的C-FOS的表達(dá)。這種作用可以被ERK, JNK的抑制劑以及普萘洛爾所逆轉(zhuǎn)。C-FOS敲低后,去甲腎上腺素/LPS介導(dǎo)的MMP-9的酶活性上調(diào)被抑制。6.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的C-JUN的磷酸化水平。結(jié)論1.去甲腎上腺素可以增強(qiáng)脂多糖介導(dǎo)的單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)及酶活性。2.去甲腎上腺素通過激活Beta腎上腺素受體來實(shí)現(xiàn)與脂多糖的協(xié)同作用。3.去甲腎上腺素通過激活細(xì)胞內(nèi)的ERK/JNK信號通路調(diào)控脂多糖介導(dǎo)的THP-1基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達(dá)。4.AP-1轉(zhuǎn)錄因子的組成成分C-FOS以及C-JUN在去甲腎上腺素與脂多糖協(xié)同介導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶-9的過程中起重要作用。
【圖文】：

單核細(xì)胞可ＬN(yùn)B粗附在活化的內(nèi)皮細(xì)胞，浸潤聚集在斑塊區(qū)域，分化成為巨途細(xì)逡逑胞。巨噓細(xì)胞吞噓脂質(zhì)，形成泡沫細(xì)胞。這些免疫細(xì)胞同時(shí)可�。轓B分泌《種炎癥因逡逑子，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的遷移增趣，促進(jìn)斑塊的進(jìn)展（［２－７］（圖１－１）。在動(dòng)脈粥逡逑樣硬化斑塊易破裂的部位，也往往是免疫細(xì)胞大量聚集的部位巧］。這提示我們，逡逑單核及巨哇細(xì)胞與斑塊的穩(wěn)定性密切相關(guān)。逡逑基質(zhì)金屬蛋白酶－９邋（Ｍａｔｒｉｘ邋ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９，ＭＭＰ－９）是邋ＭＭＰ邋家族的一逡逑員，又被稱為明膠酶Ｂ（ｇｅｌａｔｉｎ邋Ｂ）。ＭＭＰ－９及其內(nèi)源性抑制劑（ｔｉｓｓｕｅ邋ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ邋ｏｆ逡逑ｍａｔｒｉｘ邋ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１，ＴＩＭＰ４）共同參與維持細(xì)胞外基質(zhì)的平衡［９－１３］。除此逡逑之外，ＭＭＰ－９的底物還包括炎癥因子，，細(xì)胞因子等［１４－１６］。近些年的研究證實(shí)，逡逑ＭＭＰ－９與粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性相關(guān)［１７，邋１|�。噎h(huán)矯媯停停校箍桑。轓B通過降解細(xì)逡逑胞外基質(zhì)

５．２０００ｘ２０ｎｉｉｎ。逡逑可從看到血樣被分為四層，第一層：為血漿或紐織勻漿液層。第二層：狀乳白包單個(gè)核細(xì)胞。第Ｅ層：為透明分離液層。第四層；為紅細(xì)胞層。吸管將６管中的第二層白朦層（２０山）轉(zhuǎn)移到５０ｍｌ離，心管，加入５０ｍｌ生（圖邋３－１邋）。逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5

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