【摘要】：背景：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)移植修復(fù)梗死心肌已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)。MSCs遷移到損傷心肌區(qū)域是修復(fù)組織至關(guān)重要的一步,但很多研究均表明經(jīng)血管移植時(shí),遷移到受損區(qū)域的MSCs極少。因此,研究調(diào)控MSCs遷移的相關(guān)機(jī)制至關(guān)重要。我們前期研究證實(shí),缺氧預(yù)處理能提高M(jìn)SCs的遷移能力,同時(shí)缺氧預(yù)處理也能上調(diào)miR-211的表達(dá)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,miR-211能調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞的遷移。因此,我們推測(cè)miR-211在MSCs遷移過(guò)程中起重要作用。本課題的目的就是研究miR-211對(duì)MSCs遷移能力的調(diào)控作用及具體機(jī)制。 方法和結(jié)果：體外的Transwell遷移實(shí)驗(yàn)提示,miR-211過(guò)表達(dá)能提高M(jìn)SCs的遷移能力,而下調(diào)miR-211的表達(dá)能降低MSCs的遷移能力。miR-211過(guò)表達(dá)或表達(dá)下調(diào)的雄性MSCs經(jīng)尾靜脈移植到雌性大鼠急性心梗模型中,2天后檢測(cè)GFP表達(dá)和SRY基因來(lái)定性和定量MSCs遷移到梗死周邊區(qū)的能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示miR-211過(guò)表達(dá)能增加MSCs遷移梗死周邊區(qū)的細(xì)胞數(shù)量。心梗28天后,與PBS及MSCs對(duì)照組相比,miR-211過(guò)表達(dá)的MSCs組大鼠心功能改善,疤痕面積縮小。Targetscan等生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)STAT5A可能是miR-211的靶基因,雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)、RT-PCR和蛋白電泳,證實(shí)miR-211能結(jié)合至STAT5A的3’-UTR區(qū),調(diào)控STAT5A的轉(zhuǎn)錄。體內(nèi)和體外功能學(xué)實(shí)驗(yàn)提示,上調(diào)STAT5A能抑制MSCs的遷移能力,下調(diào)STAT5A能提高M(jìn)SCs的遷移能力。miR-211過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的遷移能力增加,能被STAT5A抑制。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,STAT3在MSCs的遷移中起到及其重要的作用,且缺氧預(yù)處理也能調(diào)控STAT3的活性。我們預(yù)測(cè)STAT3與miR-211可能有相互作用。染色質(zhì)免疫共沉淀和熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證STAT3可以直接結(jié)合到miR-211的啟動(dòng)子區(qū)域并能調(diào)控miR-211的表達(dá)。 結(jié)論：STAT3/miR-211/STAT5A信號(hào)通路在MSCs的遷移過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。經(jīng)靜脈移植miR-211過(guò)表達(dá)的MSCs改善心梗后心功能。
【圖文】：

MSCs遷移能力（100.6±9.70細(xì)胞數(shù)/每個(gè)視野，PO.Ol.圖。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)miR-211過(guò)表達(dá)顯著提高了 MSCs遷移能力（胞數(shù)/每個(gè)視野，PO.Ol.圖2A&B )。這表明miR-211在MSC其重要的調(diào)節(jié)作用。

圖6 STAT5A負(fù)調(diào)控MSCs的遷移能力。A我們?cè)O(shè)計(jì)了三段特異性與STAT5A結(jié)合的ShRNA序列，下調(diào)STAT5A的表達(dá)效果都還可以，我們選擇了效果最好的shRNA30 B MSCs感染過(guò)STAT5A過(guò)表達(dá)病毒72小時(shí)后，western blot驗(yàn)證STAT5A的蛋白水平明顯升高。C MSCs感染過(guò)STAT5A-over及STAT5A-shRNA后，我們用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證細(xì)胞的功能改變。D統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)STAT5A表達(dá)下調(diào)后MSCs遷移到下室的數(shù)量有明顯增加，而STAT5A過(guò)表達(dá)后MSCs的遷移能力則顯著減弱，每組n=3,標(biāo)尺為200^im。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R542.22

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2547618