【摘要】：背景：骨髓間充質干細胞(MSCs)移植修復梗死心肌已經成為研究的熱點。MSCs遷移到損傷心肌區(qū)域是修復組織至關重要的一步,但很多研究均表明經血管移植時,遷移到受損區(qū)域的MSCs極少。因此,研究調控MSCs遷移的相關機制至關重要。我們前期研究證實,缺氧預處理能提高MSCs的遷移能力,同時缺氧預處理也能上調miR-211的表達。根據相關文獻報道,miR-211能調控多種腫瘤細胞的遷移。因此,我們推測miR-211在MSCs遷移過程中起重要作用。本課題的目的就是研究miR-211對MSCs遷移能力的調控作用及具體機制。 方法和結果：體外的Transwell遷移實驗提示,miR-211過表達能提高MSCs的遷移能力,而下調miR-211的表達能降低MSCs的遷移能力。miR-211過表達或表達下調的雄性MSCs經尾靜脈移植到雌性大鼠急性心梗模型中,2天后檢測GFP表達和SRY基因來定性和定量MSCs遷移到梗死周邊區(qū)的能力。實驗結果提示miR-211過表達能增加MSCs遷移梗死周邊區(qū)的細胞數量。心梗28天后,與PBS及MSCs對照組相比,miR-211過表達的MSCs組大鼠心功能改善,疤痕面積縮小。Targetscan等生物信息學軟件預測STAT5A可能是miR-211的靶基因,雙熒光素酶報告基因系統、RT-PCR和蛋白電泳,證實miR-211能結合至STAT5A的3’-UTR區(qū),調控STAT5A的轉錄。體內和體外功能學實驗提示,上調STAT5A能抑制MSCs的遷移能力,下調STAT5A能提高MSCs的遷移能力。miR-211過表達誘導的遷移能力增加,能被STAT5A抑制。根據文獻報道,STAT3在MSCs的遷移中起到及其重要的作用,且缺氧預處理也能調控STAT3的活性。我們預測STAT3與miR-211可能有相互作用。染色質免疫共沉淀和熒光素酶報告基因實驗驗證STAT3可以直接結合到miR-211的啟動子區(qū)域并能調控miR-211的表達。 結論：STAT3/miR-211/STAT5A信號通路在MSCs的遷移過程中起到關鍵作用。經靜脈移植miR-211過表達的MSCs改善心梗后心功能。
【圖文】：

MSCs遷移能力（100.6±9.70細胞數/每個視野，PO.Ol.圖。同時我們發(fā)現miR-211過表達顯著提高了 MSCs遷移能力（胞數/每個視野，PO.Ol.圖2A&B )。這表明miR-211在MSC其重要的調節(jié)作用。

圖6 STAT5A負調控MSCs的遷移能力。A我們設計了三段特異性與STAT5A結合的ShRNA序列，下調STAT5A的表達效果都還可以，我們選擇了效果最好的shRNA30 B MSCs感染過STAT5A過表達病毒72小時后，western blot驗證STAT5A的蛋白水平明顯升高。C MSCs感染過STAT5A-over及STAT5A-shRNA后，我們用Transwell遷移實驗驗證細胞的功能改變。D統計發(fā)現STAT5A表達下調后MSCs遷移到下室的數量有明顯增加，而STAT5A過表達后MSCs的遷移能力則顯著減弱，每組n=3,標尺為200^im。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R542.22

【共引文獻】

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本文編號：2547618