【摘要】：【研究背景】冠心病(coronary artery disease,CAD)是危害人類健康的主要疾病,其發(fā)病率和死亡率居所有疾病之首。CAD的發(fā)生主要是由于冠狀動脈粥樣硬化所致,受遺傳因素和環(huán)境因素影響,其中遺傳因素起主導(dǎo)作用。高膽固醇是CAD的獨立危險因素之一,其在細(xì)胞中的蓄積與膽固醇的細(xì)胞代謝調(diào)控有關(guān)。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)是三磷酸結(jié)合盒(ATP-binding cassette,ABC)轉(zhuǎn)運體超家族中的成員之一,參與細(xì)胞內(nèi)膽固醇和磷脂向高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)轉(zhuǎn)運的過程,從而避免膽固醇嚴(yán)重沉積于外周細(xì)胞,在膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(reverse cholesterol transport,RCT)中起重要作用。既往研究顯示ABCG1基因內(nèi)或啟動子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性位點(single nucleotide polymorphisms,SNPs)與CAD的易感性有關(guān)。啟動子區(qū)的SNPs能導(dǎo)致ABCG1的表達(dá)水平改變,從而導(dǎo)致個體對CAD易感性的差異,致使啟動子活性下降的SNPs降低CAD的發(fā)病風(fēng)險,其主要機(jī)制可能是誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的凋亡所致。然而ABCG1存在多個轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)(promoter region A,B,C等),對于啟動子A中的SNPs是否與CAD的易感性有關(guān)也有研究報道,且與早發(fā)心肌梗死和冠脈病變血管數(shù)相關(guān)。但rs1378577是否影響ABCG1啟動子活性,以及在啟動子A區(qū)是否存在其它與CAD易感性有關(guān)的SNPs尚不清楚,本研究擬通過Sanger測序和雙螢光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定ABCG1啟動子A區(qū)與CAD易感性相關(guān)的SNPs和單倍型,進(jìn)一步揭示ABCG1參與CAD發(fā)生發(fā)展的分子遺傳機(jī)制�！狙芯磕康摹�1.探討ABCG1基因啟動子A近轉(zhuǎn)錄啟始位點區(qū)域的多態(tài)性對基因轉(zhuǎn)錄活性的影響。2.探討ABCG1啟動子A近轉(zhuǎn)錄啟始位點區(qū)域的多態(tài)性與中國南方漢族人群CAD易感性的關(guān)系�！狙芯糠椒ā�1.采用病例-對照研究,收集217例經(jīng)冠脈造影證實的CAD患者和142例對照者的血樣,提取基因組DNA;同時收集研究對象的詳細(xì)臨床資料。2.對ABCG1啟動子A轉(zhuǎn)錄啟始位點上游約1000 bp核苷酸序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增和Sanger法測序,計算SNPs位點基因型和等位基因型在各組中的頻率,并對序列進(jìn)行進(jìn)化分析,分析SNPs組成的單倍型及單倍型頻率分布。3.構(gòu)建ABCG1的組成型和突變型啟動子單倍型螢光素酶報告基因載體,轉(zhuǎn)染Hela和HCAEC,利用雙螢光素酶報告基因系統(tǒng)檢測不同單倍型的螢光素酶活性。4.統(tǒng)計分析:比較分析組或亞組間SNPs等位基因頻率、基因型頻率及其所形成的單倍型頻率差異。【結(jié)果】1.在ABCG1基因啟動子A轉(zhuǎn)錄啟始位點上游約1000 bp序列中發(fā)現(xiàn)3個多態(tài)性位點[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)],可形成ACG、GAT和GCG 3種單倍型,3個SNPs間強(qiáng)連鎖不平衡,Tajima’s D=2.655(P0.001)。2.三種組成型單倍型(ACG、GAT和GCG)的轉(zhuǎn)錄活性無顯著性差異。將GAT進(jìn)行點突變,得到兩種突變單倍型GAG和GCT,GAG單倍型的轉(zhuǎn)錄活性較組成型單倍型的轉(zhuǎn)錄活性升高約2倍,而GCT單倍型的轉(zhuǎn)錄活性與組成型單倍型無顯著差異。3.ABCG1啟動子A區(qū)SNP位點[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)]的等位基因頻率、基因型頻率及其形成的單倍型的頻率在CAD和對照組中分布無統(tǒng)計學(xué)差異,與早發(fā)CAD及CAD病變數(shù)量的嚴(yán)重程度亦無顯著相關(guān)性。【結(jié)論】1.ABCG1啟動子A區(qū)的3個SNPs[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)]形成的三種組成型單倍型的啟動子活性沒有顯著差異。2.ABCG1啟動子A區(qū)的3個SNPs[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)]的等位基因頻率、基因型頻率及其形成的組成型單倍型的頻率分布與CAD的易感性無顯著性相關(guān)。
【圖文】：

DNA（GAT 單倍型質(zhì)粒） 1.6 μL生成產(chǎn)物 D（2）第二輪 PCR反應(yīng)體系①總體系 50 μLddH2O 22.4 μLrime STAR Max DNA Polymerase（2×） 25 μL正向引物 a（10 μmol/L） 0.5 μL反向引物 b（10 μmol/L） 0.5 μL產(chǎn)物 A、B 1.6 μL生成最終產(chǎn)物突變單倍型 GAG，示意圖見圖 1。

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文反應(yīng)體系②總體系 50 μLddH2O 22.4 μLPrime STAR Max DNA Polymerase（2×） 25 μL正向引物 Kpn I-ABCG1（10 μmol/L） 0.5 μL反向引物 Hind Ⅲ-ABCG1（10 μmol/L） 0.5 μL產(chǎn)物 C、D 1.6 μL生成最終產(chǎn)物突變單倍型 GCT，見示意圖 2。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁潔玲;王洋洋;司艷輝;李海珠;陳立強(qiáng);;ABCA1和ABCG1在動脈粥樣硬化中的研究進(jìn)展[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2016年10期

2 陳偉偉;高潤霖;劉力生;朱曼璐;王文;王擁軍;吳兆蘇;李惠君;顧東風(fēng);楊躍進(jìn);鄭哲;蔣立新;胡盛壽;;《中國心血管病報告2015》概要[J];中國循環(huán)雜志;2016年06期

3 丁佩劍;金秀菊;孫寶信;;人類單核苷酸多態(tài)性研究進(jìn)展[J];臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志;2016年12期

4 尚茹茹;劉曉紅;張錦;袁鋒;溫婷;;致動脈粥樣硬化過程中不同表型的巨噬細(xì)胞對泡沫細(xì)胞形成的影響及機(jī)制[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2015年11期

5 田朝偉;莫沛;李愛群;劉世明;;ABCG1基因啟動子區(qū)多態(tài)性與中國南方漢族人群冠心病多支血管病變的相關(guān)性[J];中國急救醫(yī)學(xué);2015年07期

6 汪瑋琳;謝云;;泡沫細(xì)胞形成與動脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展[J];繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2015年04期

7 王越越;汪琦瑛;韓國鑫;申曉東;夏蕾;金琴花;章明;高磊;黎檀實;朱海燕;;青年冠心病患者臨床特點及危險因素分析[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2015年04期

8 楊婷;王蘇夢;汪俊軍;;ABCG1在膽固醇轉(zhuǎn)運中作用研究新進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2015年01期

9 Hai-mu Yao;Tong-wen Sun;You-dong Wan;Xiao-juan Zhang;Xin Fu;De-liang Shen;Jin-ying Zhang;Ling Li;;Domestic versus imported drug-eluting stents for the treatment of patients with acute coronary syndrome[J];World Journal of Emergency Medicine;2014年03期

10 王法琦;顧紅梅;章大衛(wèi);;三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體和細(xì)胞膽固醇外排[J];生命的化學(xué);2014年03期

，

本文編號：2546157