本文關鍵詞：miR208b、328、145和155在大鼠H9c2細胞和ACS患者中的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的 急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)是一組由急性心肌缺血引起的臨床綜合征,是常見的心血管疾病之一,包括不穩(wěn)定心絞痛(unstable angina, UAP)、非ST段抬高心肌梗死(Non-ST-segment elevation myocardial infarction, NSTEMI)和ST段抬高心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction, STEMI),具有較高的致殘率和致死率,嚴重影響患者的生活質(zhì)量。ACS的早期診斷,尤其在心肌沒有發(fā)生壞死的可逆階段,對提高患者的生存率及生活質(zhì)量極為重要。目前,肌鈣蛋白(CTnT或CTnT)的測定是診斷急性心肌梗死特異性強和靈敏度高的標志物之一,但在患者發(fā)生胸痛6h內(nèi),CTnT/I可能由于靈敏度不高,在早期診斷方面受到限制,篩選新的心肌標志物用于ACS診斷具有重要意義。近年來,國內(nèi)外學者研究發(fā)現(xiàn)循環(huán)微小RNA (microRNA, miRNAs, miRs)可以輔助多種系統(tǒng)疾病的早期診斷。 MiRNAs于1993年在線蟲體內(nèi)首次被發(fā)現(xiàn),是一類長度約為18-25核苷酸的小分子RNA,其結(jié)構為非編碼單鏈分子。在動植物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)多種miRNAs的存在,其功能主要通過降解靶mRNA或者抑制蛋白質(zhì)的翻譯,參與調(diào)節(jié)細胞生長、增殖、分化與凋亡；與個體發(fā)育、機體代謝、多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。研究表明,miRNA在較長時間內(nèi)能夠以某種機制穩(wěn)定存在于人類及動物的血液、唾液、尿液等體液中,可能作為生物標志物用于腫瘤、代謝性疾病、組織損傷、炎癥疾病等多種疾病臨床診斷。報道顯示miR208b與心肌纖維、心肌肥厚、心力衰竭及心肌缺血發(fā)生有關；miR145與血管平滑肌細胞分化有關；miR-155表達于內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞,參與動脈粥樣硬化、原發(fā)性高血壓、心肌肥厚及心肌梗死的病理生理過程,并與血管重塑有關；miR328作為多種病理生理過程的重要調(diào)節(jié)因子,不僅在心血管疾病中表達,其他疾病,如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、阿爾茨海默病、原發(fā)性膽汁性肝硬化、乳腺癌耐藥性等也有異常表達。但是miR208b, miR328, miR145和miR155是否參與ACS發(fā)病,在ACS病程中的表達如何變化,仍需進一步研究。 基于上述研究背景,本研究做出以下假設：上述miRNAs在ACS發(fā)生心肌缺血時可能以某種形式釋放到血液中,使血液中相應miRNAs的水平發(fā)生變化,成為心肌細胞損傷的臨床輔助診斷指標。針對以上假設本課題進行如下研究：(1)在體外采用大鼠H9c2細胞,用Triton X-100破壞大鼠H9c2心肌細胞,觀察細胞培養(yǎng)上清液中miR208b, miR328, miR145, miR155和乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase, LDH)的變化趨勢和表達量改變,從體外細胞水平提供miR208b, miR328, miR145和miR155作為一個心肌損傷診斷的可能依據(jù)。(2)進一步檢測ACS患者血漿miR208b, miR328, miR145和miR155的表達水平,并檢測患者血漿中的心肌損傷指標如CK-MB、 CTnT等的表達水平,為揭示上述miRNAs在ACS診斷中的作用提供實驗依據(jù)。 方法 (1)采用不同濃度(0.I0%,1.00%及2.00%)的Triton X-100處理大鼠H9c2心肌細胞,建立心肌細胞壞死模型。 (2)細胞分組：PBS處理組、0.10%Triton X-100處理組、1.00%Triton X-100處理組及2.00%Triton X-100處理組,每組6孔。 (3)臨床分組： ACS患者50例為ACS組,包括20例UAP組及30例AMI組；對照組為16例健康體檢者。 (4)檢測細胞培養(yǎng)上清液和血漿中的LDH、肌鈣蛋白(CTnT)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)及其他生化指標,MTT法測定細胞增值情況。 (5)采用2-AACT實時熒光定量PCR方法(quantitative real-time PCR qRT-PCR)定量測定細胞培養(yǎng)上清液及血漿中上述miRNAs的表達水平。 結(jié)果 1細胞培養(yǎng)上清液PBS組與處理組心肌增殖、損傷及上述miRNAs表達水平比較： (1)MTT結(jié)果顯示與對照組比較,隨著Triton X-100作用濃度的升高,心肌細胞H9c2的存活率分別為(100%,71%,23%和16%),呈現(xiàn)下降趨勢(P0.05)。 (2)與PBS處理組比較,細胞培養(yǎng)上清液LDH表達量分別為(7.86±1.98、26.55±8.46、54.32±9.96、74.1±4.68)U/L,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (3)與PBS處理組比較,細胞培養(yǎng)上清液CK-MB的表達量為(60.42±10.4、120.5±12.78、156.2±10.5、160.3±14.9)U/L,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (4)與PBS處理組比較,細胞培養(yǎng)上清液1niR208b、miR328及miRl55相對表達量增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)；miR145相對表達量差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。除miR208b、miR155及miR328與LDH表達量呈相關性(P0.05)；miR-208b與CK-MB表達量呈相關性(P0.05)。 (5)細胞培養(yǎng)上清液miR-208b在6h,12h及24h表達水平為(19.3±3.25,18.7±2.36,18.21±1.21和18.1±2.3),差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2ACS組及對照組上述1niRNAs表達水平及比較： (1)ACS組血漿miR208b表達量為(265.70±256.24),miR328表達量為(8.12±3.81),與對照組表達量(1.00±0.00)比較顯著上調(diào),兩組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (2)ACS組血漿miR145表達量為(0.21±0.12),與對照組表達量(1.00±0.00)比較顯著下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (3)ACS組血漿miR155表達量為(1.00±0.26),與對照組表達量(1.00±0.00)比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3AMI組與UAP組上述miRNAs表達水平及比較： (1)AMI組血漿miR208b表達量為(442.16±±174.38),UAP組表達量未檢測出,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。AMI組血漿miR328表達量為(10.69±2.17),UAP組表達量為(4.26±2.06),兩組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (2) AMI組血漿miR145表達量為(0.19±0.10),UAP組表達量為(0.25±0.14),兩組差異無統(tǒng)計學意義。AMI組miR155表達量為(1.02±0.28),UAP組表達量為(0.96±0.22),兩組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 結(jié)論 (1)隨著Triton X-100濃度的增加,大鼠H9c2心肌細胞壞死數(shù)量增加,細胞上清液miR208b和miR328含量增加,心肌細胞壞死數(shù)量與細胞上清液miRNAs含量呈正相關性。 (2)ACS患者血漿miR208b、miR328及miR145可以從受損心肌細胞釋放入血,導致血漿中相應表達水平變化。血漿miR208b及miR328的表達水平與CTnT呈正相關,可能作為急性冠脈綜合征診斷及AMI與UAP鑒別診斷的敏感指標。
【關鍵詞】：微小RNA 急性冠脈綜合征(ACS) 大鼠H9c2心肌細胞
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R541.4
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-13
• 中英文~.略詞表13-15
• 引言15-17
• 材料與方法17-28
• 材料17-22
• 實驗方法22-28
• 實驗結(jié)果28-39
• 討論39-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-49
• 綜述 microRNA的研究進展49-66
• 參考文獻61-66
• 致謝66-67
• 個人簡歷、在校期間發(fā)表的學術論文與研究成果67

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 許嬋嬋;韓衛(wèi)青;肖冰;李寧寧;朱鼎良;高平進;;微小RNA在自發(fā)性高血壓大鼠主動脈的差異表達[J];生理學報;2008年04期

2 申華;周玉杰;;2011歐洲心臟病學會非ST段抬高型急性冠脈綜合征處理指南更新解讀[J];中國醫(yī)學前沿雜志(電子版);2011年05期

  本文關鍵詞：miR208b、328、145和155在大鼠H9c2細胞和ACS患者中的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：253744