【摘要】：第一部分心肌炎及心衰小鼠心臟功能與血清維生素D水平的關(guān)系目的：用純化的心肌肌球蛋白免疫誘導(dǎo)小鼠構(gòu)建自身免疫性心肌炎及心衰模型,檢測(cè)心肌炎及心衰模型動(dòng)物心臟功能和血清維生素D水平,并分析二者之間的關(guān)系。方法：6-8周雄性BALB/c小鼠飼養(yǎng)在同濟(jì)醫(yī)學(xué)院無(wú)病原微生物(SPF)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,所有小鼠被隨機(jī)分成4組,EAM組和其正常對(duì)照組A組：心衰模型組和其正常對(duì)照組B組。使用心臟α肌球蛋白重鏈多肽免疫小鼠,將多肽溶解在無(wú)菌PBS中,濃度為2mg/ml,充分溶解混勻后與等體積的完全弗氏佐劑充分乳化,EAM組小鼠在實(shí)驗(yàn)的第0天和第7天于腹股溝區(qū)進(jìn)行皮下注射誘導(dǎo)心肌炎；心衰組分別在第0天、第7天和第30天各進(jìn)行一次腹股溝區(qū)皮下注射免疫誘導(dǎo),每只小鼠每次的注射劑量為200ug/200ul的多肽乳化液。各對(duì)照組在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)于腹股溝區(qū)皮下給予200ulPBS和完全弗氏佐劑乳化劑注射。在實(shí)驗(yàn)第21天,給EAM組和對(duì)照組A組小鼠行心臟超聲心動(dòng)圖、心肌組織蘇木精-伊紅染色(HE染色)、心肌組織Masson染色和血清標(biāo)本維生素D含量測(cè)定；心衰組和對(duì)照組B組小鼠在初次免疫后第12個(gè)月行心臟超聲心動(dòng)圖檢查、心肌組織蘇木精-伊紅染色(HE染色)、心肌組織Masson染色和血清標(biāo)本維生素D含量測(cè)定。結(jié)果：與相應(yīng)對(duì)照組相比,EAM組和心衰組小鼠心臟LVEF和LVFS均明顯減低,心臟LVEDd、LVEDs明顯增加,心臟重量和體重的比值明顯增加(P0.01)。與對(duì)照組A組相比,EAM組小鼠心肌組織出現(xiàn)了明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化,正常心肌纖維被破壞,血清維生素D水平低于對(duì)照組A組(P0.05);與對(duì)照組B組相比,心衰組小鼠心腔明顯增大,心室壁變薄,心臟出現(xiàn)明顯纖維化改變,未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),血清維生素D水平低于對(duì)照組B組(P0.05)。進(jìn)一步用Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),EAM組小鼠血清維生素D水平與心臟LVEF和LVFS呈正相關(guān)(r=0.75, P=0.020; r=0.75, P=0.020),與LVEDs呈負(fù)相關(guān)(r=-0.717,P=0.030)；心衰組小鼠血清維生素D水平與LVEF和LVFS也呈正相關(guān)(r=0.738, P=0.037; r=0.714, P=0.047),與LVEDd呈負(fù)相關(guān)(r=-0.810,P=0.015)。結(jié)論：用純化的心肌肌球蛋白免疫小鼠可以成功構(gòu)建自身免疫性心肌炎和心衰模型,心肌炎和心衰模型心臟功能與血清維生素D水平具有相關(guān)性。第二部分1,25-(OH)2D3在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎中的作用目的：研究維生素D活性衍生物1,25(OH)2 D3在自身免疫性心肌炎中的作用及其潛在的機(jī)制。方法：將6-8周的雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分成三組,正常對(duì)照組,EAM+溶劑對(duì)照組,EAM+1,25(OH)2 D3處理組。使用心臟α肌球蛋白重鏈多肽免疫小鼠,EAM+溶劑對(duì)照組和EAM+1,25(OH)2 D3處理組小鼠在實(shí)驗(yàn)的第0天和第7天于腹股溝區(qū)進(jìn)行皮下注射,誘導(dǎo)心肌炎,對(duì)照組小鼠在相同的時(shí)間點(diǎn)給予200ul PBS和完全弗氏佐劑乳化劑在腹股溝區(qū)進(jìn)行皮下注射。在首次免疫的當(dāng)天開(kāi)始給EAM+1,25(OH)2 D3處理組小鼠腹腔注射1,25(OH)2 D3,劑量為每只小鼠單次注射1,000 ng/kg體重,隔天注射一次直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(即從實(shí)驗(yàn)第0天開(kāi)始到第21天結(jié)束)；EAM+溶劑對(duì)照組小鼠腹腔注射同等體積的95%乙醇和花生油的混合液,注射時(shí)間同EAM+1,25(OH)2 D3處理組。在實(shí)驗(yàn)第21天,將所有小鼠做心臟超聲心動(dòng)圖檢測(cè)評(píng)價(jià)心臟功能：心肌組織行蘇木精-伊紅染色(HE染色)觀察組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)；用TUNEL檢測(cè)心臟組織心肌細(xì)胞凋亡情況；采用透射電子顯微鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)caspase3蛋白的表達(dá)分布情況；免疫印跡分析(Western blot)檢測(cè)自噬過(guò)程中重要蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：與溶劑處理的EAM組小鼠相比,1,25(OH)2 D3處理的EAM組小鼠心臟功能得到改善,心臟質(zhì)量和體重比值減低。1,25(OH)2 D3處理減少了心肌組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和心肌細(xì)胞凋亡。EAM小鼠心臟存在自噬異常,自噬小體形成增多,清除受阻,1,25(OH)2 D3處理能夠恢復(fù)心臟自噬流,減少自噬小體的聚集。結(jié)論：1,25(OH)2 D3可以改善EAM小鼠心臟功能,減少心肌細(xì)胞凋亡,減輕EAM嚴(yán)重程度；1,25(OH)2 D3可能是通過(guò)調(diào)節(jié)自噬來(lái)發(fā)揮心臟保護(hù)功能的。
【圖文】：

各組小鼠必肌組織行ＨＥ染色，２１天ＥＡＭ組小鼠必肌正常量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和必肌組織壞死，對(duì)照組Ａ、對(duì)照組Ｂ和Ｈ細(xì)胞浸潤(rùn)，，放大２００Ｘ，標(biāo)尺＝１００ｕｍ逡逑也臟纖維化情況（圖片３）逡逑初次免疫后的第２１天，對(duì)對(duì)照組Ａ組和ＥＡＭ組必臟組織行Ｍａ所示，對(duì)照組Ａ組只有血管周?chē)泻苌倭康哪z原沉積，與對(duì)模型小鼠也臟組織有膠原纖維沉積（染色呈藍(lán)色）。在初次免組和必衰組也臟組織行Ｍａｓｓｏｎ染色，結(jié)果顯示，對(duì)照組Ｂ組原纖維沉積，也衰組小鼠血管周?chē)捅嘏K組織出現(xiàn)大量膠原纖，必室壁明顯變薄。逡逑

（Ｆｎ－１）邋ｍＲＮＡ的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ＥＡＭ組小鼠＇心肌組織中Ｃｏｌｌａｌ、Ｃｏｉｍ及逡逑Ｆｎ－１的表達(dá)已經(jīng)出現(xiàn)了明顯的升離（Ｐ邋＜０．０１），必衰組小鼠Ｃｏｌ邋Ｉ邋ａｌ、ＣｏＨＩＩ及Ｆｎ－１逡逑表達(dá)倍數(shù)X椉癰饗裕ǎ繡澹跡埃埃保ㄍ跡矗�。辶x希楨義稀鰣義

本文編號(hào)：2535182