發(fā)布時(shí)間：2019-09-04 12:12

【摘要】：目的短鏈�；o酶A脫氫酶(Short-chain acyl-Co A dehydrogenase,SCAD)是脂肪酸β氧化的限速酶,能夠特異性地分解短鏈�；o酶A底物。前期研究表明,SCAD在調(diào)控心肌肥大以及心肌細(xì)胞凋亡中有著重要作用。本課題旨在研究SCAD在心肌纖維化中的作用,探討游泳運(yùn)動(dòng)以及過氧化物酶體增殖物活化受體a(peroxisome proliferator-activated receptora,PPARa)對SCAD表達(dá)的影響,為確立SCAD作為心肌纖維化防治的新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。方法1.采用自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心肌纖維化模型,并觀察游泳運(yùn)動(dòng)對其的影響,檢測SCAD的m RNA、蛋白表達(dá)、酶活性變化、ATP含量、脂肪酸代謝變化以及相關(guān)心肌纖維化指標(biāo)。2.原代培養(yǎng)心肌纖維化動(dòng)物模型的心臟成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts,CFs),檢測SCAD的表達(dá)量、酶活性的改變、ATP含量以及脂肪酸代謝的變化,并觀察游泳運(yùn)動(dòng)對其的影響。同時(shí)檢測纖維化因子collagen I、collagen III以及a-SMA的變化。3.采用血管緊張素II(angiotensin,Ang II)刺激原代培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞,構(gòu)建體外的心肌纖維化細(xì)胞模型。檢測SCAD的m RNA以及蛋白變化。進(jìn)一步采用SCAD最優(yōu)干擾序列siRNA-1186刺激心臟成纖維細(xì)胞,檢測SCAD的表達(dá)量、酶活性、ATP含量以及脂質(zhì)代謝的變化,同時(shí)檢測細(xì)胞增殖、collagen I、collagen III、a-SMA以及羥輔氨酸含量的變化。并且與Ang II誘導(dǎo)的心肌纖維化細(xì)胞模型相比較。4.采用PPARa激動(dòng)劑非諾貝特(Fenofibrate,Feno)(10mM)預(yù)處理30 min后,再以Ang II或者siRNA-1186刺激原代培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞。檢測PPARa和SCAD的m RNA、蛋白表達(dá)變化、SCAD酶活性的變化、ATP含量、脂質(zhì)代謝的變化,同時(shí)檢測細(xì)胞增殖,collagen I、collagen III、a-SMA以及羥輔氨酸含量的變化。結(jié)果1.SHR在20周齡時(shí)表現(xiàn)為心肌纖維化,SCAD的表達(dá)以及酶活性顯著下調(diào),脂肪酸β氧化速率、ATP含量、脂肪酸攝取顯著下降;膠原以及a-SMA顯著上調(diào)。SHR游泳運(yùn)動(dòng)組經(jīng)過12周游泳耐力訓(xùn)練后,心肌纖維化明顯改善,膠原以及a-SMA顯著下調(diào)。同時(shí),SCAD表達(dá)以及酶活性顯著上調(diào),ATP含量以及脂肪酸氧化能力顯著增加。2.與對照組相比,SHR大鼠心臟成纖維細(xì)胞中SCAD的表達(dá)和酶活性顯著下降,且脂肪酸氧化水平顯著降低,而纖維化因子collagen I、collagen III以及a-SMA在m RNA和蛋白水平均明顯上調(diào);相反,SHR游泳組大鼠的心臟成纖維細(xì)胞中SCAD的表達(dá)和酶活性顯著升高,脂肪酸氧化水平顯著提升,而纖維化因子collagen I、collagen III以及a-SMA在m RNA和蛋白水平均明顯下調(diào),且心臟成纖維細(xì)胞增殖被明顯抑制,其變化趨勢與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一致。3.Brd U ELISA結(jié)果顯示:原代培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞增殖具有Ang II濃度和時(shí)間依賴性,且在Ang II濃度大于100n M,作用時(shí)間大于24h時(shí),具有顯著性差異。Western Blot和RT-PCR結(jié)果顯示,在Ang II濃度為100n M,作用時(shí)間為36h和48h時(shí),SCAD的表達(dá)量下降更為顯著。Si RNA-1186或Ang II刺激的心臟成纖維細(xì)胞中SCAD的表達(dá)量顯著下調(diào),酶活性顯著下降,脂肪酸氧化水平明顯降低,ATP含量明顯降低;與此同時(shí),siRNA-1186能誘導(dǎo)心臟成纖維細(xì)胞增值率顯著上升,纖維化因子collagen I、collagen III以及a-SMA顯著上升,與Ang II誘導(dǎo)的心肌纖維化細(xì)胞模型程度一致。4.與siRNA-1186組相比,Feno+siRNA-1186組中SCAD和PPARα的表達(dá)量均顯著上調(diào),酶活性顯著升高,脂肪酸氧化水平明顯上升,ATP含量明顯升高,心臟成纖維細(xì)胞增值率、纖維化因子collagen I、collagen III以及a-SMA顯著下降;與Ang II組相比,Feno+Ang II組中SCAD和PPARα的表達(dá)量亦明顯上調(diào),酶活性顯著升高,脂肪酸氧化水平明顯上升,ATP含量明顯升高;且Feno預(yù)處理后心臟成纖維細(xì)胞增殖被明顯抑制,纖維化因子collagen I、collagen III以及a-SMA顯著下降。結(jié)論SCAD表達(dá)下調(diào)與心肌纖維化密切相關(guān),游泳運(yùn)動(dòng)可能通過上調(diào)SCAD表達(dá),從而改善心肌纖維化。SCAD對心肌纖維化的調(diào)控作用由PPARα介導(dǎo),SCAD可能作為心肌纖維化防治的新靶點(diǎn)。
【圖文】：

P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4.1血壓、心率的變化圖2-1 A顯示,自發(fā)性高血壓大鼠隨著周齡的增長，血壓逐漸升高，在 18周齡血壓基本穩(wěn)定在高壓水平，自發(fā)性高血壓游泳組游泳后血壓就降低了，且有事件依賴性。圖2-1 B顯示,與對照組相比，wistar 游泳組大鼠經(jīng)過游泳訓(xùn)練后，心率發(fā)生了一定程度地下降；此外，，經(jīng)過游泳訓(xùn)練，自發(fā)性高血壓大鼠的心率也出現(xiàn)了一定程度下降。

27圖 2-2.超聲心動(dòng)圖及參數(shù)Figure 2-2. The echocardiogram parameters in rats. (A) Representative charts oftransthoracic M-mode echocardiograms. (B E) The interventricular septal thicknessand LV posterior wall thickness. (F-G) The LV internal dimensions at diastole andsystole. (H-I) The LV end volume at diastole and systole. (J-K) The ejection fractionand fractional shortening. IVSd: interventricular septal thickness at end-diastole;
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R542.23

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2531751