【摘要】：目的:探討原發(fā)性高血壓左室肥厚患者循環(huán)mi RNA的特異性表達(dá)變化,為高血壓左室肥厚的診斷和預(yù)測(cè)尋找新的生物學(xué)標(biāo)志。方法:入選原發(fā)性高血壓合并左室肥厚及原發(fā)性高血壓不合并左室肥厚患者各5例,采集患者血漿標(biāo)本并進(jìn)行mi RNA提取,通過高通量二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)兩組患者循環(huán)mi RNA表達(dá)變化,對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析篩選出差異性表達(dá)mi RNA,進(jìn)一步通過生物信息學(xué)分析差異表達(dá)mi RNA的靶基因并進(jìn)行功能富集分析,初步探討差異表達(dá)mi RNA的功能。結(jié)果:篩選出原發(fā)性高血壓左室肥厚患者差異化特異性表達(dá)mi RNA共64個(gè),其中35個(gè)表達(dá)上調(diào),29個(gè)表達(dá)下調(diào);生物信息學(xué)分析顯示差異性表達(dá)mi RNA的功能主要涉及心肌細(xì)胞腎上腺素信號(hào)、神經(jīng)活化配體/受體相互作用、免疫炎癥反應(yīng)、脂肪酸代謝等與高血壓左室肥厚密切相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控,其中hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b富集的功能最為顯著。結(jié)論:原發(fā)性高血壓左室肥厚患者外周循環(huán)中存在特異性mi RNA表達(dá)譜,可為原發(fā)性高血壓左室肥厚的診斷和預(yù)測(cè)提供候選生物學(xué)標(biāo)志。目的:觀察心肌細(xì)胞肥大過程中mi R-31與LATS2的表達(dá)變化,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)原代大鼠心肌細(xì)胞,給予10-6 mol/LAng II刺激構(gòu)建體外心肌細(xì)胞肥大模型,q RT-PCR檢測(cè)心肌肥大基因ANP、β-MHC表達(dá),心肌細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白熒光探針染色觀察心肌細(xì)胞形態(tài)的變化,以確認(rèn)心肌細(xì)胞肥大模型。q RT-PCR檢測(cè)心肌細(xì)胞肥大過程中mi R-31與LATS2的表達(dá)變化,Western blot進(jìn)一步檢測(cè)LATS2蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:給予10-6 mol/LAngII刺激成功構(gòu)建心肌細(xì)胞肥大模型,干預(yù)2天后即可檢測(cè)到心肌細(xì)胞肥大基因ANP、β-MHC表達(dá)上調(diào),干預(yù)4天后心肌細(xì)胞熒光染色顯示心肌細(xì)胞表面積明顯增大。伴隨心肌細(xì)胞的肥大變化,mi R-31表達(dá)顯著上調(diào),而LATS2在基因及蛋白水平均明顯下調(diào)。結(jié)論:給予Ang II刺激可成功構(gòu)建心肌細(xì)胞肥大模型;伴隨心肌細(xì)胞的肥大變化,mi R-31表達(dá)顯著上調(diào),而LATS2在基因及蛋白水平均明顯下調(diào)。目的:通過下調(diào)肥大心肌細(xì)胞中mi R-31的表達(dá),觀察mi R-31對(duì)LATS2及心肌細(xì)胞肥大的調(diào)控作用方法:構(gòu)建mi R-31抑制物慢病毒載體(LV-mi R-31-inhibitor),體外感染心肌細(xì)胞肥大模型,q RT-PCR檢測(cè)肥大基因ANP、β-MHC表達(dá),心肌細(xì)胞F肌動(dòng)蛋白熒光探針染色觀察心肌細(xì)胞形態(tài)的變化,監(jiān)測(cè)心肌細(xì)胞肥大的演變。q RT-PCR檢測(cè)心肌細(xì)胞肥大演變過程中LATS2的表達(dá)變化,Western blot進(jìn)一步檢測(cè)LATS2蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:LV-mi R-31-inhibitor感染心肌細(xì)胞肥大模型可大幅下調(diào)mi R-31表達(dá)水平,并可促使心肌細(xì)胞肥大基因ANP、β-MHC表達(dá)下調(diào),同時(shí)心肌細(xì)胞熒光染色顯示細(xì)胞表面積明顯減小;伴隨心肌細(xì)胞肥大的演變,LATS2在基因水平略有上調(diào)但無顯著差異,而蛋白水平表達(dá)卻明顯增加。結(jié)論:下調(diào)肥大心肌細(xì)胞mi R-31表達(dá)水平可一定程度逆轉(zhuǎn)心肌細(xì)胞肥大,mi R-31可能通過作用于LATS2調(diào)控心肌細(xì)胞肥大的發(fā)生。目的:驗(yàn)證mi R-31對(duì)LATS2的直接靶向調(diào)控作用。方法:采用雙螢光素酶質(zhì)粒作為工具載體,分別插入LATS2-3'UTR野生型(LATS2-3'UTR)及突變型(LATS2-3'UTR-MU)基因片段,構(gòu)建LATS2-3'UTR及LATS2-3'UTR-MU雙螢光素酶基因報(bào)告載體。將熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒及雙螢光素酶空載質(zhì)粒(LATS2-3'UTR-NC)與mi R-3l過表達(dá)質(zhì)粒及mi R-3l空載質(zhì)粒兩兩分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性以鑒定mi R-3l對(duì)LATS2的靶向作用。結(jié)果:與mi R-3l過表達(dá)質(zhì)粒及LATS2-3'UTR-MU雙螢光素酶基因報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組相比,mi R-3l過表達(dá)質(zhì)粒及LATS2-3'UTR雙螢光素酶基因報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性顯著性降低。結(jié)論:mi R-3l可與LATS2的3'UTR結(jié)合實(shí)現(xiàn)其對(duì)LATS2靶向調(diào)控作用。
【圖文】：

集分析（圖 2.1、圖 2.2、表 2.5、表 2.6）。對(duì)差異倍數(shù)最大的 10 個(gè) miRNA（上調(diào)選擇 5 個(gè)，，下調(diào)選擇 5 個(gè)）進(jìn)行 pathway 富集分析圖構(gòu)建，得到了 4 個(gè) miRNA（hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b）的功能富集結(jié)果（圖2.3）。

圖 2.1 上調(diào) miRNA 調(diào)控靶基因的功能富集分析結(jié)果圖。左圖代表生物學(xué)過程(BP),中途代表分子功能（MF），右圖代表細(xì)胞組成（CC）。圖中橫坐標(biāo)代表富集的基因個(gè)數(shù)，圖例（顏色深淺）代表富集的顯著性 p 值。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R544.11

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