【摘要】：目的:探討原發(fā)性高血壓左室肥厚患者循環(huán)mi RNA的特異性表達變化,為高血壓左室肥厚的診斷和預(yù)測尋找新的生物學標志。方法:入選原發(fā)性高血壓合并左室肥厚及原發(fā)性高血壓不合并左室肥厚患者各5例,采集患者血漿標本并進行mi RNA提取,通過高通量二代測序技術(shù)檢測兩組患者循環(huán)mi RNA表達變化,對測序數(shù)據(jù)進行分析篩選出差異性表達mi RNA,進一步通過生物信息學分析差異表達mi RNA的靶基因并進行功能富集分析,初步探討差異表達mi RNA的功能。結(jié)果:篩選出原發(fā)性高血壓左室肥厚患者差異化特異性表達mi RNA共64個,其中35個表達上調(diào),29個表達下調(diào);生物信息學分析顯示差異性表達mi RNA的功能主要涉及心肌細胞腎上腺素信號、神經(jīng)活化配體/受體相互作用、免疫炎癥反應(yīng)、脂肪酸代謝等與高血壓左室肥厚密切相關(guān)信號通路的調(diào)控,其中hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b富集的功能最為顯著。結(jié)論:原發(fā)性高血壓左室肥厚患者外周循環(huán)中存在特異性mi RNA表達譜,可為原發(fā)性高血壓左室肥厚的診斷和預(yù)測提供候選生物學標志。目的:觀察心肌細胞肥大過程中mi R-31與LATS2的表達變化,為后續(xù)實驗提供依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)原代大鼠心肌細胞,給予10-6 mol/LAng II刺激構(gòu)建體外心肌細胞肥大模型,q RT-PCR檢測心肌肥大基因ANP、β-MHC表達,心肌細胞F肌動蛋白熒光探針染色觀察心肌細胞形態(tài)的變化,以確認心肌細胞肥大模型。q RT-PCR檢測心肌細胞肥大過程中mi R-31與LATS2的表達變化,Western blot進一步檢測LATS2蛋白表達變化。結(jié)果:給予10-6 mol/LAngII刺激成功構(gòu)建心肌細胞肥大模型,干預(yù)2天后即可檢測到心肌細胞肥大基因ANP、β-MHC表達上調(diào),干預(yù)4天后心肌細胞熒光染色顯示心肌細胞表面積明顯增大。伴隨心肌細胞的肥大變化,mi R-31表達顯著上調(diào),而LATS2在基因及蛋白水平均明顯下調(diào)。結(jié)論:給予Ang II刺激可成功構(gòu)建心肌細胞肥大模型;伴隨心肌細胞的肥大變化,mi R-31表達顯著上調(diào),而LATS2在基因及蛋白水平均明顯下調(diào)。目的:通過下調(diào)肥大心肌細胞中mi R-31的表達,觀察mi R-31對LATS2及心肌細胞肥大的調(diào)控作用方法:構(gòu)建mi R-31抑制物慢病毒載體(LV-mi R-31-inhibitor),體外感染心肌細胞肥大模型,q RT-PCR檢測肥大基因ANP、β-MHC表達,心肌細胞F肌動蛋白熒光探針染色觀察心肌細胞形態(tài)的變化,監(jiān)測心肌細胞肥大的演變。q RT-PCR檢測心肌細胞肥大演變過程中LATS2的表達變化,Western blot進一步檢測LATS2蛋白表達變化。結(jié)果:LV-mi R-31-inhibitor感染心肌細胞肥大模型可大幅下調(diào)mi R-31表達水平,并可促使心肌細胞肥大基因ANP、β-MHC表達下調(diào),同時心肌細胞熒光染色顯示細胞表面積明顯減小;伴隨心肌細胞肥大的演變,LATS2在基因水平略有上調(diào)但無顯著差異,而蛋白水平表達卻明顯增加。結(jié)論:下調(diào)肥大心肌細胞mi R-31表達水平可一定程度逆轉(zhuǎn)心肌細胞肥大,mi R-31可能通過作用于LATS2調(diào)控心肌細胞肥大的發(fā)生。目的:驗證mi R-31對LATS2的直接靶向調(diào)控作用。方法:采用雙螢光素酶質(zhì)粒作為工具載體,分別插入LATS2-3'UTR野生型(LATS2-3'UTR)及突變型(LATS2-3'UTR-MU)基因片段,構(gòu)建LATS2-3'UTR及LATS2-3'UTR-MU雙螢光素酶基因報告載體。將熒光素酶報告質(zhì)粒及雙螢光素酶空載質(zhì)粒(LATS2-3'UTR-NC)與mi R-3l過表達質(zhì)粒及mi R-3l空載質(zhì)粒兩兩分別轉(zhuǎn)染293T細胞,檢測各轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性以鑒定mi R-3l對LATS2的靶向作用。結(jié)果:與mi R-3l過表達質(zhì)粒及LATS2-3'UTR-MU雙螢光素酶基因報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組相比,mi R-3l過表達質(zhì)粒及LATS2-3'UTR雙螢光素酶基因報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性顯著性降低。結(jié)論:mi R-3l可與LATS2的3'UTR結(jié)合實現(xiàn)其對LATS2靶向調(diào)控作用。
【圖文】：

集分析（圖 2.1、圖 2.2、表 2.5、表 2.6）。對差異倍數(shù)最大的 10 個 miRNA（上調(diào)選擇 5 個，，下調(diào)選擇 5 個）進行 pathway 富集分析圖構(gòu)建，得到了 4 個 miRNA（hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b）的功能富集結(jié)果（圖2.3）。

圖 2.1 上調(diào) miRNA 調(diào)控靶基因的功能富集分析結(jié)果圖。左圖代表生物學過程(BP),中途代表分子功能（MF），右圖代表細胞組成（CC）。圖中橫坐標代表富集的基因個數(shù)，圖例（顏色深淺）代表富集的顯著性 p 值。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R544.11

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本文編號：2529893