【摘要】：研究背景和目的心臟重構(gòu)是由心臟超負荷或者損傷引起的病理狀態(tài),表現(xiàn)為心臟大小、形態(tài)和隨后的功能變化,這些變化嚴重影響疾病預后。因此,對心臟重構(gòu)預防和治療的研究具有重大的臨床意義。CYP2J2代謝花生四烯酸生成EETs。CYP2J2/EETs系統(tǒng)廣泛存在于人類的心血管系統(tǒng)中,國內(nèi)外研究表明CYP2J2/EETs對心血管具有廣泛的保護作用,而且極有可能參與了心臟重構(gòu)的病理生理調(diào)節(jié),然而目前對這一科學問題的研究和認識非常有限,故本研究對CYP2J2/EETs系統(tǒng)抗心臟重構(gòu)的作用和機理進行了系統(tǒng)深入的研究。由于心肌細胞和心肌成纖維細胞在心臟重構(gòu)的過程中發(fā)揮了重要的作用,本研究著重從CYP2J2/EETs對心肌細胞和成纖維細胞的作用方面闡明其抗心臟重構(gòu)的作用和機制。實驗方法及結(jié)果8周齡的C57BL/6小鼠(野生型)和aMHC-CYP2J2-Tr小鼠(心肌細胞特異性高表達CYP2J2的小鼠)以1.5μg/kg/min的劑量持續(xù)泵入AngⅡ2周。通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),本研究證實心肌細胞高表達CYP2J2增加了心肌組織和循環(huán)血中EETs水平,同時本研究證明心肌細胞特異性高表達CYP2J2抑制了AngⅡ誘導的心肌肥厚、心肌纖維化和心功能不全。CYP2J2的保護作用與激活PPARy和抑制氧化應(yīng)激/NF-κB及TGF-β1/smad兩個通路相關(guān),而CYP2J2的保護作用同時也被PPARy阻斷劑GW9662部分阻斷。體外實驗結(jié)果闡明了CYP2J2的代謝產(chǎn)物EETs對心肌細胞和心肌成纖維細胞的作用和機制。首先,在心肌細胞中,11,12-EET抑制AngⅡ誘導的心肌細胞肥大、重構(gòu)相關(guān)蛋白(TIMP1、TGF-β1和Collagen I)的表達,其保護作用與激活PPARγ和抑制氧化應(yīng)激/NF-κB通路相關(guān)。與此同時,PPARy的阻斷劑GW9662抑制了11,12-EET的心肌細胞保護效應(yīng)和氧化應(yīng)激/NF-κB通路,而氧化應(yīng)激的清除劑NAC發(fā)揮了與11,12-EET類似且協(xié)同的效應(yīng)。這表明EETs通過激活PPAR-γ進而抑制氧化應(yīng)激介導的NF-κB信號通路,最終抑制Ang Ⅱ誘導的心肌細胞肥大和重構(gòu)相關(guān)蛋白表達。此外,被11,12-EET干預后的心肌細胞條件培養(yǎng)液能抑制成纖維細胞的轉(zhuǎn)分化和TGF-β1/Smad信號通路的激活。其次,在成纖維細胞中,11,12-EET直接作用于心肌成纖維細胞,抑制Ang Ⅱ誘導的心肌成纖維細胞增殖、遷移、轉(zhuǎn)分化和分泌膠原,且NO/cGMP通路的激活和Gα12/13及下游RhoA/ROCK通路的抑制參與了這一過程。而siRNA介導的Ga12/13或RhoA的沉默與11,12-EET發(fā)揮了類似效應(yīng)。與此同時,NO/cGMP通路的抑制劑部分阻斷了11,12-EET對Gα2/13的抑制作用。這些結(jié)果表明CYP2J2/EETs通過NO/cGMP途徑抑制Ga12/13及其下游RhoA/ROCK通路,進而抑制心肌成纖維細胞的纖維化反應(yīng)。結(jié)論CYP2J2/EETs抑制AngⅡ誘導的心臟重構(gòu),其機制主要包括對心肌細胞和成纖維細胞的作用。首先,在心肌細胞中,CYP2J2/EETs通過激活PPAR-γ抑制氧化應(yīng)激進而抑制NF-κBP65入核,從而抑制心肌細胞肥大及重構(gòu)相關(guān)蛋白的表達。另外,EETs通過抑制心肌細胞旁分泌促纖維化因子,進而抑制心肌成纖維細胞的轉(zhuǎn)分化和TGF-β1/Smad信號通路的激活。其次,在心肌成纖維細胞中,CYP2J2/EETs通過NO/cGMP途徑抑制Gα12/13及其下游RhoA/ROCK通路,進而抑制心肌成纖維細胞的纖維化反應(yīng)。本研究系統(tǒng)深入地闡明了CYP2J2及其代謝產(chǎn)物EETs抑制AngⅡ誘導的心臟重構(gòu)的作用和機制,完善了AA-CYP2J2-EETs系統(tǒng)的相關(guān)理論,為干預表氧化酶-EETs途徑應(yīng)用于心臟重構(gòu)的防治提供了理論依據(jù)。
【圖文】：

Ｈ、也肌細胞特異性商表達ＣＹＰ２Ｊ２抑制Ａｎｇｌｌ誘導的也臟重構(gòu)。逡逑必肌細胞氋表達ＣＹＰ２Ｊ２抑制Ａｎｇｌｌ誘導的也臟重構(gòu)，具體表現(xiàn)為；１、屯臟整逡逑體觀表明也肌細胞z┍澩錚茫伲校玻剩慘種疲粒睿紓歟煊盞嫉囊蒼郮棿螅，

本文編號：2522075