【摘要】：目的觀察鋅離子能否誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬并探討鋅離子是否通過MUL1、ULK1誘導(dǎo)心肌細(xì)胞線粒體自噬。方法1.建立H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(H/R)損傷模型。2.Western blotting法檢測TOM20、TIM23、COXⅣ等線粒體標(biāo)記蛋白的表達(dá)水平。3.實(shí)時熒光定量PCR法檢測MUL1的基因表達(dá)水平。4.采用RNA干擾的方法特異性沉默MUL1基因的表達(dá)。5.采用熒光蛋白標(biāo)記和免疫熒光技術(shù)檢測線粒體和自噬體的共定位。6.采用RNA干擾的方法特異性沉默ULK1基因的表達(dá)。結(jié)果1.Western blotting結(jié)果顯示,與H/R組相比,用1μM Zn Cl2和4μM鋅載體處理H9c2心肌細(xì)胞30min(復(fù)氧前5 min至復(fù)氧后25 min),線粒體標(biāo)記蛋白TOM20、TIM23、COXⅣ表達(dá)減少,提示鋅能夠誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬。2.ZnCl2誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬被泛素化蛋白酶抑制劑MG132所抑制,說明鋅對H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬的作用是通過泛素化蛋白酶系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的。3.轉(zhuǎn)染MUL1 siRNA后,ZnCl2誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬明顯減弱。說明鋅誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬可能與MUL1有關(guān)。4.免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MUL1 siRNA使GFP-LC3綠色熒光減弱,TOM20紅色熒光增強(qiáng),進(jìn)一步證實(shí)鋅可能通過MUL1誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬。5.轉(zhuǎn)染ULK1 siRNA后,ZnCl2誘導(dǎo)的線粒體自噬明顯減弱,說明鋅通過ULK1途徑誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬。6.轉(zhuǎn)染MUL1 siRNA后,ULK1蛋白表達(dá)明顯增多,說明MUL1調(diào)控ULK1蛋白的穩(wěn)定性。7.Zn Cl2使ULK1的蛋白表達(dá)水平明顯減少,而這種作用可被泛素化蛋白酶抑制劑MG132抑制。這一結(jié)果說明,在鋅誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬的過程中,ULK1的蛋白表達(dá)水平受泛素蛋白酶系統(tǒng)的調(diào)控。結(jié)論1.鋅離子誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞發(fā)生線粒體自噬,且有明顯的時間依賴性,其中30 min作用時間最為明顯。2.鋅離子可能通過泛素化蛋白酶系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)線粒體自噬。3.鋅離子通過MUL1調(diào)控ULK1的蛋白水平,進(jìn)而誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞線粒體自噬。
文內(nèi)圖片：
圖片說明：ZnCl2處理H9c2心肌細(xì)胞示意圖
[Abstract]:Objective to observe whether zinc ion can induce mitochondrial autophagy in H9c2 cardiomyocytes and to explore whether zinc ion can induce mitochondrial autophagy in H9c2 cardiomyocytes through MUL1,ULK1. Method 1. The model of hypoxia / reoxidation (H 鈮，

本文編號：2512601