【摘要】：研究背景最近幾年來,高血壓病導(dǎo)致心腦血管的常見合并癥和并發(fā)癥逐年攀升,給患者生存質(zhì)量及預(yù)后帶來嚴重的不良影響。高血壓是一種長期、慢性遷延性疾病,持久的血壓升高將損害血管內(nèi)膜和平滑肌,使其舒縮功能下降,久而久之,心臟前后負荷增加,導(dǎo)致心肌損傷和血管重構(gòu)及動脈硬化。高血壓對心臟產(chǎn)生首當其沖的影響以左心室肥厚改變?yōu)橹?心肌細胞病理性肥大是高血壓導(dǎo)致的心臟主要病理改變。因此,如何進行有效的降壓治療對保護心血管系統(tǒng)具有重要的意義。作為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors, ACEI)的依那普利降壓效果明顯,不僅可以有效舒張血管,而且可以拮抗對腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng),可使腎臟血管壁和腦血管舒張,協(xié)同降低血壓,并減輕心臟、腎臟、腦等重要靶器官的并發(fā)癥。但是口服給藥生物利用度低,如何改善藥物的生物利用度是臨床研究的熱點之一,也將對藥物效果產(chǎn)生積極的促進作用。為此,本研究嘗試使用頰粘膜給藥,以探討以其為代表的非胃腸道粘膜給藥的合理性。理論上,頰粘膜血管密集,血流豐富,藥物吸收快,且避免了肝臟的首過效應(yīng);同時頰粘膜通透性較高,是體內(nèi)通透性僅次于鼻粘膜和胃腸道粘膜的組織,而且酶含量較少,因此與其他粘膜給藥方式相比,頰粘膜給藥的方式可在短時間內(nèi)達到一定的血藥有效濃度,且波動較小,藥效平穩(wěn)而持久；此外,頰粘膜制劑服藥方便,患者依從性也較強。為了探討頰粘膜制劑的有效性,本研究選取一線抗高血壓藥物依那普利為基礎(chǔ)來制備依那普利口頰粘膜給藥系統(tǒng),并探討其生物利用度,臨床療效、以及患者的治療依從性。在體內(nèi)實驗方面,本研究采用自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)作為動物模型,分別采用普通依那普利劑型和口頰粘膜劑型給藥治療,從血壓、心功能方面、逆轉(zhuǎn)左室重塑、心臟ACE和ACE2mRNA及蛋白質(zhì)、醛固酮、血管緊張素、一氧化氮、內(nèi)皮素表達等方法進行觀察,并進行統(tǒng)計學(xué)分析,然后初步探討其相關(guān)機制,為治療高血壓提供新藥物劑型,在提高治療效果的同時降低靶器官的損害,為臨床治療提供新的思路。目的1.為了提高療效和患者依從性,制備新型依那普利的口頰粘膜給藥系統(tǒng),對比其與普通依那普利劑型的生物效應(yīng),以求克服生物利用度低的問題。2.觀察普通依那普利劑型和口頰粘膜劑型對SHR的血壓、心功能、左室重構(gòu)的影響,并探討其相關(guān)作用機制。3.觀察依那普利口頰粘膜給藥系統(tǒng)對SHR心臟ACE和ACE2表達的影響,以及血清醛固酮、血管緊張素Ⅱ、一氧化氮和內(nèi)皮素表達的影響。方法1.依那普利口頰粘膜的制備使用粘膜粘附性多聚物、通過溶劑涂布技術(shù),將依那普利的口頰粘膜給藥系統(tǒng)配制成口腔貼膜的形式。2.檢測SHR血壓、心肌重塑及組織學(xué)分析1.實驗分組：取30只SD大鼠,制備成自發(fā)性高血壓模型,編號1-30。1)WKY對照組：取10只WKY大鼠,給予5ml/kg生理鹽水灌胃,qd；2)SHR對照組：取10只SHR大鼠,5ml/kg生理鹽水灌胃；3)普通依那普利劑型組：取10只SHR大鼠,給予依那普利lmg/kg,溶于5ml/kg雙蒸水中,灌胃,qd；4)口頰粘膜劑型組：取10只SHR大鼠,給予依那普利口頰粘膜劑1mg/kg,口服,qd；療程均為14天。2.血壓的測量：檢測尾動脈血壓,記錄相應(yīng)的AMP、LVEDP、LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax數(shù)據(jù),3.心室重塑及心肌組織學(xué)分析：取心臟組織并檢測左心室重量和心肌組織內(nèi)膠原含量,采用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察心肌細胞病理和超微結(jié)構(gòu)變化；3.ACE及ACE2 mRM及蛋白的表達1.實驗分組：同第二部分。2.心肌組織ACE及ACE2 mRNA的表達：采用瓊脂糖凝膠電泳法測定。3.心肌組織ACE及ACE2蛋白的表達：取心肌組織標本,采用免疫組織化學(xué)染色法檢測,以及Western Blot法檢測。4.檢測血清醛固酮、血管緊張素II、內(nèi)皮素及一氧化氮1.實驗分組：同第二部分。2.血清醛固酮、血管緊張素II和內(nèi)皮素表達：采用放射免疫方法檢測。3.血清NO表達：采用硝酸還原酶法檢測。結(jié)果1.貼膜配方F2和F4具備良好的藥代動力學(xué)特性所有配方均顯示有高的藥物百分含量(96.45%至98.49%)。有良好膨脹特性的配方顯示有良好的駐留時間。在體外,發(fā)現(xiàn)包括貼膜(F2)在內(nèi)的高粘性羧甲纖維素鈉(SCMC-HV)的藥物釋放率最高(藥物釋放很快,在1.5小時內(nèi)釋放92.24%)、其次是貼膜F4(含有聚乙烯吡咯烷酮K-90 1% w/v個SCMC(HV) 1% w/v)。研究發(fā)現(xiàn),在10小時結(jié)束時,F2和F4的活體外藥物穿透率分別為82.24%和89.9%。配方F4具有快速釋放、快速吸收和最長體外停留時間的特性。2.依那普利口頰粘膜制劑對心肌細胞結(jié)構(gòu),血壓及心室重塑的影響1)心肌光鏡下觀察：WKY對照組：SHR對照組心肌細胞的損傷情況較WKY對照組更嚴重。SHR照組：光鏡下可見大鼠心肌細胞的肌纖維失去正常排列,直徑增粗,可見斷裂現(xiàn)象出現(xiàn),同時有間質(zhì)水腫；少數(shù)心肌間質(zhì)內(nèi)可見膠原纖維沉著；小血管周圍或附近的心肌細胞周圍可見大量炎性細胞浸潤,心肌細胞核萎縮,部分出現(xiàn)溶解、壞死。普通依那普利組：大鼠心肌病理改變明顯較其他兩個對照組改善。光鏡下,普通組大鼠的心肌細胞肌纖維略增粗,排列較整齊,肌束間隙稍有擴大,肌纖維細胞核完整,多為一個,位于肌纖維中央;有部分炎性細胞浸潤,少量細胞核膜不完整�？陬a粘膜劑型組：口頰粘膜劑型組比普通依那普利組改變更輕微,基本趨于正常。2)心肌超微結(jié)構(gòu)觀察：WKY對照組：心肌肌原纖維排列整齊、致密、無斷裂、線粒體體積大,數(shù)量多,嵴豐富排列緊密,肌漿網(wǎng)體積大、數(shù)量多,間質(zhì)中有少量的膠原纖維附著,以細纖維居多。SHR照組：心肌細胞腫脹明顯,心肌纖維排列紊亂,大量膠原纖維出現(xiàn)在細胞間質(zhì)中,肌原纖維部分溶解,可見大小不等的液泡,以閏盤兩側(cè)為重。肌原纖維常見肌節(jié)錯位和過度收縮,肌漿網(wǎng)略擴張,甚至擴張成大腔隙,腫脹斷裂,數(shù)目減少,間質(zhì)中粗大的和纖細的膠原纖維交織呈網(wǎng)狀穿插。線粒體腫脹、嵴部分斷裂溶解,模糊不清,形成線粒體內(nèi)大小不等的空泡區(qū),甚至溶解。明暗帶不清,Z-線扭曲、變形,肌絲斷裂、溶解,形成大量肌溶灶。普通依那普利劑型組：心肌細胞輕度腫脹,心肌纖維呈點陣狀排列,較整齊密集,膠原纖維較多,分布在細胞間質(zhì)中。心肌線粒體腫脹較多,并出現(xiàn)融合現(xiàn)象,排列較亂,嵴斷裂�？陬a粘膜劑型組：心肌纖維排列較整齊,細胞間質(zhì)中膠原纖維較少,大部分細胞核完整、清晰,少數(shù)細胞核膜不完整。線粒體結(jié)構(gòu)形態(tài)基本正常,呈橢圓形,線粒體嵴排列較規(guī)則,部分線粒體嵴有斷裂及碎片形成。線粒體體積減小,數(shù)量接近正常。3)心肌細胞病理損傷方面：損傷程度從重到輕依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組。光鏡和電鏡觀察顯示：心肌超微結(jié)構(gòu)嚴重程度從重到輕依次為SHR對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組；與心肌細胞病理學(xué)結(jié)果一致,且兩個治療組細胞損傷均較對照組改善。4)血壓指標方面：AMP、LVEDP、LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax從重到輕依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組；與心肌細胞病理學(xué)和顯微鏡觀察結(jié)果一致,且兩個治療組細胞損傷均較對照組改善。5)心室重塑方面：心肌組織重量方面：各組LVM、LVMI差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；膠原蛋白含量方面：從高到低依次為SHR對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組,而治療后均較對照組更低,組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；3.依那普利口頰粘膜制劑對ACE及ACE2的影響1)心肌組織ACE及ACE2 mRNA的表達：ACE表達：表達程度從高到低依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口腔粘膜劑型組；ACE2 mRNA表達：表達程度從低到高依次為SHR照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口腔粘膜劑型組；且兩個治療組細胞損傷均較對照組改善。2)心肌組織ACE及ACE2蛋白的表達：ACE蛋白表達方面：表達程度從高到低依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口腔粘膜劑型組；ACE2蛋白表達方面：表達程度從低到高依次為SHR照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口腔粘膜劑型組；且兩個治療組細胞損傷均較對照組改善。4.依那普利口頰粘膜制劑對醛固酮、血管緊張素Ⅱ、ET、NO的影響1)醛固酮、血管緊張素II表達程度：從高到低依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組。2)內(nèi)皮素表達程度：從高到低依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組。3)NO表達程度：從低到高依次為SHR陰性對照組,WKY對照組,普通依那普利劑型組和口頰粘膜劑型組；且兩個治療組細胞損傷均較對照組改善(P0.05)。結(jié)論1.制備的依那普利口頰粘膜系統(tǒng),配方F4具有快速釋放、快速吸收和最長體外停留時間的特性。為后期進一步探索口頰粘膜藥物研究提供了基礎(chǔ)配方。2.與普通依那普利劑型相比,口頰粘膜制劑降壓療效明顯,對左室重構(gòu)具有明顯的逆轉(zhuǎn)作用。3.與普通依那普利劑型相比,口頰粘膜給藥系統(tǒng)顯著抑制SHR心臟ACE的表達,同時促進ACE2的表達。4.與普通依那普利劑型相比,口頰粘膜劑型給藥顯著下調(diào)SHR血清醛固酮、血管緊張素II、內(nèi)皮素水平并上調(diào)一氧化氮的表達。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1

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本文編號：2499615