【摘要】：目的探究miR-99a-5p和miR-639在骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓細胞中的表達水平情況,并且分析其與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,同時利用miRNA靶基因在線預(yù)測軟件等生物信息學(xué)方法對兩者的靶基因進行預(yù)測及功能分析,探討miR-99a-5p和miR-639在MDS疾病過程中的意義,以期為MDS發(fā)病機制研究及臨床診療工作中提供新的理論依據(jù)。方法首先應(yīng)用miRNA表達譜芯片結(jié)合分層聚類的方法分別對9例MDS患者(5例IPSS低、中危和4例IPSS高�；颊�)和6例健康對照組骨髓細胞中miR-99a-5p和miR-639的表達情況進行檢測。然后利用實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(Real-time PCR)技術(shù)在52例初診MDS患者(包括31例IPSS低危和中危1在內(nèi)的相對低危組患者、21例IPSS中危2和高危在內(nèi)的相對高危組患者)、18例初診MDS轉(zhuǎn)急性髓系白血病(以下簡稱“轉(zhuǎn)白”)患者及19例健康對照組的骨髓細胞中miR-99a-5p和miR-639的表達水平進行驗證,并分析兩者在MDS不同亞組的表達情況,然后分別探索兩者與包括染色體核型分析、外周血血象(中性粒細胞絕對值、血紅蛋白量及血小板計數(shù))和骨髓原始細胞比例在內(nèi)的臨床病理參數(shù)的相關(guān)性,運用Miranda、Targetscan和Microcosm三種靶基因在線分析軟件分別預(yù)測miR-99a-5p和miR-639可能的靶基因,取其預(yù)測結(jié)果的交集,通過進行基因功能富集分析(GO-analysis)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路富集分析(KEGG Pathway analysis),并進一步結(jié)合現(xiàn)有相關(guān)的靶基因文獻報道選出最終可能的潛在靶基因。結(jié)果1.miRNA表達譜芯片結(jié)合分層聚類結(jié)果顯示在MDS患者中有92個miRNA表達顯著上調(diào)(比值R≥2)和198個miRNA表達顯著下調(diào)(比值R≤0.5)。其中,miR-99a-5p呈現(xiàn)表達水平的上調(diào)(R=4.42,p0.05),miR-639表達水平出現(xiàn)下調(diào)(R=0.18,p0.01)。2.利用Real-time PCR技術(shù)在大樣本MDS患者及MDS轉(zhuǎn)白患者骨髓細胞中分別對miR-99a-5p和miR-639表達水平進行驗證,結(jié)果顯示:與健康對照組相比,miR-99a-5p在總MDS樣本骨髓中呈顯著高表達(R=4.69,p=5.05×10~(-13)),與基因芯片的結(jié)果一致,其中相對低危組(低危組和中危1組)的表達量是對照組的2.40倍(p=9.61×10~(-4)),相對高危組(中危2組和高危組)的表達量是對照組的6.66倍(p=2.65×10~(-8)),MDS轉(zhuǎn)白組的表達量是對照組的6.35倍(p=5.66×10~(-6))。miR-639在總MDS樣本骨髓中的表達水平相較健康對照組則呈現(xiàn)顯著下調(diào)(R=0.64,p=7.90×10-5),與基因芯片結(jié)果一致,其中相對低危組(低危組和中危1組)的表達量與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.46),相對高危組(中危2組和高危組)的表達量是對照組的0.42倍(p=1.06×10~(-7)),MDS轉(zhuǎn)白組的表達量是對照組的0.41倍(p=1.29×10~(-7))。3.將miR-99a-5p和miR-639在所有MDS患者(包括MDS轉(zhuǎn)白患者)中的表達量分別與MDS患者臨床病理參數(shù)進行相關(guān)性分析結(jié)果顯示:患者染色體核型分析情況與miR-99a-5p表達量無明顯差異(異常組:2.89±1.31正常組:2.00±1.93,p=0.12),外周血血象與其表達量之間無明顯相關(guān)(中性粒細胞絕對值:r=-0.252,p=0.094;血紅蛋白量:r=0.016,p=0.913;血小板計數(shù):r=0.241,p=0.107),但骨髓原始細胞比例與其表達量呈正相關(guān)(r=0.645,p=1.33×10~(-6))。而miR-639的表達量與MDS患者染色體核型分析情況呈現(xiàn)相關(guān)性(C=0.378,p=0.010),并且miR-639在染色體異常組的表達量相較染色體正常組低(異常組:0.54±0.29正常組:0.79±0.31,p=0.015),外周血血象與其表達量之間同樣無明顯相關(guān)(中性粒細胞絕對值:r=0.033,p=0.829;血紅蛋白量:r=-0.036 p=0.809;血小板計數(shù):r=-0.148,p=0.326),骨髓原始細胞比例與其表達量則呈負相關(guān)(r=-0.527,p=1.42×10~(-4))。4.運用Miranda、Targetscan和Microcosm三種靶基因在線分析軟件分別對miR-99a-5p和miR-639的靶基因進行預(yù)測并取其結(jié)果的交集顯示:miR-99a-5p可能的靶基因12個,而miR-639可能的靶基因4個。miR-99a-5p和miR-639可能靶基因基因功能富集分析和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路富集分析結(jié)果顯示:miR-99a-5p的靶基因功能主要富集于有機環(huán)化合物、DNA、核酸等的結(jié)合和蛋白磷酸酶、轉(zhuǎn)移酶等的激活及RNA生物合成過程、轉(zhuǎn)錄過程等的調(diào)控(p0.05),信號通路主要富集于白細胞跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)移信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、腫瘤蛋白聚糖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等(p0.05)。miR-639的靶基因功能富集于有機環(huán)化合物、特定序列DNA、核酸等的結(jié)合和特定序列DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的活性及RNA代謝過程、轉(zhuǎn)錄過程等的調(diào)控(p0.05),尚未得到有關(guān)靶基因的相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。結(jié)合miRNA負調(diào)控原理及現(xiàn)有關(guān)于miR-99a-5p和miR-639預(yù)測的靶基因的相關(guān)文獻報道得出:miR-99a-5p最終可能潛在的靶基因為ST5,miR-639最終可能潛在的靶基因為POU2F2。結(jié)論1.miR-99a-5p的表達水平與MDS骨髓原始細胞比例呈正相關(guān),高表達的miR-99a-5p可能參與了MDS疾病的發(fā)生發(fā)展過程。2.與正常對照組相比,miR-639在MDS相對低危組(低危組和中危1組)患者骨髓細胞的表達量無明顯差異,而在相對高危組(中危2組和高危組)及轉(zhuǎn)白組患者骨髓細胞中表達顯著降低;在所有MDS患者(包括MDS轉(zhuǎn)白患者)中,miR-639的表達水平與骨髓原始細胞比例呈負相關(guān),并且染色體異常組的患者骨髓細胞中miR-639的表達量相對染色體正常組更低。以上提示低表達的miR-639可能參與了MDS疾病的進展。3.miR-99a-5p可能通過靶向負調(diào)控ST5而參與了MDS發(fā)生發(fā)展的過程。4.miR-639可能通過負調(diào)節(jié)靶基因POU2F2而參與了MDS疾病的進展。
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【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R551.3

【參考文獻】

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本文編號：2488896