【摘要】：目的：建立高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)測(cè)定血清支鏈氨基酸(branched-chain amino acids,BCAAs)、芳香族氨基酸(aromatic amino acids,AAAs)、谷氨酸(glutamate,Glu)、谷氨酰胺(glutamine, Gln)、溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholines,LPCs)、肉毒堿(carnitine,CO)和酯酰肉毒堿(acylcarnitines,AcyCNs)的方法,研究各代謝物與心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素、糖尿病(diabetes mellitus,DM)、頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(carotid intima-media thickness,cIMT)和頸動(dòng)脈斑塊的關(guān)系。方法： 用標(biāo)準(zhǔn)溶液建立各代謝物液相色譜分離和質(zhì)譜測(cè)定的條件。用含0.1%甲酸的異丙醇提取血清各目標(biāo)代謝物,氮?dú)庀麓蹈?用流動(dòng)相重組后進(jìn)行LC-MS/MS分析,用同位素內(nèi)標(biāo)法定量,評(píng)價(jià)方法的線性、檢測(cè)限(Limits of detection,LOD)、定量限(limits of quantification,LOQ)、基質(zhì)效應(yīng)、不精密度和樣品穩(wěn)定性。征集600名體檢志愿者,記錄年齡、性別、身高、體重和血壓等基本信息,用所建LC-MS/MS方法測(cè)定血清各代謝物,同時(shí)測(cè)定血糖、血脂、超敏C反應(yīng)蛋白(high sensitivity C-reactive protein, hsCRP)和血肌酐(creatinine,Crea)等CVD傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素,超聲檢測(cè)cIMT和頸動(dòng)脈斑塊,分析各代謝物與CVD傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素、DM、cIMT和頸動(dòng)脈斑塊的關(guān)系。結(jié)果： 液相色譜分離采用HILIC色譜柱,流動(dòng)相為75%乙,腈(0.5%甲酸,7.5mM甲酸銨,PH=3.0),柱溫20℃,流速0.25ml/min,進(jìn)樣4μl。在API 4000質(zhì)譜,電噴霧離子源(electrospray ionization,ESI)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reaction monitor, MRM)模式下,所有代謝物在5.5分鐘內(nèi)有效分離。方法的相對(duì)回收率在86.07%-107.58%。平均批內(nèi)不精密度在5%以內(nèi),總不精密度大多在10%以內(nèi)。血清樣品各代謝物濃度在-80℃存儲(chǔ)6個(gè)月后沒(méi)有顯著變化。各代謝物的水平與CVD危險(xiǎn)因素的偏相關(guān)分析顯示,校正年齡、性別和體重指數(shù)(body mass index, BMI)后,BCAAs.苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)、色氨酸(tryptophan,Trp)和Glu與甘油三酯(triglyceride,TG)顯著正相關(guān)(P0.001),與高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和載脂蛋白AI(apolipoprotein AI,ApoAI)顯著負(fù)相關(guān)(P0.01);Gln/Glu與TG和載脂蛋白B(apolipoprotein B,ApoB)顯著負(fù)相關(guān)(P0.001),與HDL-C和ApoAI顯著正相關(guān)(P0.001)；飽和LPC(16:0 LPC和18：0 LPC)與TG、總膽固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和ApoB顯著正相關(guān)(P0.001),不飽和LPC(18:1 LPC和18：2 LPC)與HDL-C和ApoAI顯著正相關(guān)(P0.001)。通過(guò)方差分析和Logistic回歸分析,各代謝物與BMI的關(guān)系顯示,BCAAs、AAAs、Glu、C0、丙酰肉毒堿(propionyl-L-carnitine,C3)和戊酰肉毒堿(valeryl-L-carnitine,C5)與BMI顯著正相關(guān)(P0.001);Gln、 18:1 LPC、18:2 LPC與BMI顯著負(fù)相關(guān)(P0.001);與糖尿病的關(guān)系顯示,BCAAs、 Phe、Glu、乙酰肉毒堿(acetylcarnitine,C2)和C5水平在糖尿病組顯著高于非糖尿病組(P0.05),Gln/Glu在糖尿病組顯著低于非糖尿病組(P0.001)；與cIMT和頸動(dòng)脈斑塊的關(guān)系顯示,頸動(dòng)脈內(nèi)中膜增厚組BCAAs(P0.001)和C5(P0.01)水平顯著高于正常組；斑塊組大多數(shù)AcyCN水平顯著高于無(wú)斑塊組(P0.05),C0和AcyCN類代謝物水平是頸動(dòng)脈斑塊產(chǎn)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=1.897,P0.05)。結(jié)論：本研究建立了LC-MS/MS測(cè)定血清氨基酸、LPC、C0和AcyCN類等25種代謝物的方法,所建方法簡(jiǎn)便、快捷、可靠,可作為CVD組學(xué)研究和臨床流行病研究的有效工具。用所建方法測(cè)定600例體檢志愿者,發(fā)現(xiàn)各代謝物與多種CVD傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素、DM、cIMT和頸動(dòng)脈斑塊等相關(guān),可能是潛在的CVD危險(xiǎn)預(yù)示指標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：2460596