【摘要】：第一部分MicroRNA-21通過調(diào)節(jié)TGF-β-Smad3信號促進(jìn)血管緊張素Ⅱ所致胸主動(dòng)脈瘤形成的作用及其機(jī)制研究目的：驗(yàn)證在胸主動(dòng)脈瘤中microRNA-21在病變中的變化規(guī)律,探究干預(yù)microRNA-21在胸主動(dòng)脈瘤中的作用。方法：使用血管緊張素Ⅱ灌注Smad3+/-雜合子小鼠建立胸主動(dòng)脈瘤模型,RT-PCR和原位雜交方法檢測形成胸主動(dòng)脈瘤組織中的microRNA-21表達(dá)的時(shí)空變化。同時(shí)檢測臨床患者中microRNA-21表達(dá)量及部位的變化。之后引入miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠進(jìn)行胸主動(dòng)脈瘤模型復(fù)制,小鼠B超觀察其血管擴(kuò)張、動(dòng)脈瘤形成等病變特點(diǎn)。組織學(xué)檢測病變局部的病理特點(diǎn),并檢測TGF-β相關(guān)下游信號通路的活化情況。體外培養(yǎng)平滑肌,驗(yàn)證其對TGF-β的反應(yīng)性。結(jié)果：在Sm-d3+/-雜合子小鼠中灌注血管緊張素Ⅱ,能夠誘導(dǎo)雜合子小鼠發(fā)生胸主動(dòng)脈瘤。并且通過RT-PCR.原位雜交方法發(fā)現(xiàn),microRNA-21升高主要表達(dá)于血管中層平滑肌內(nèi)。與臨床標(biāo)本檢測的microRNA-21表達(dá)部位相符。在對microRNA-21進(jìn)行敲除后,雙敲小鼠產(chǎn)生了明顯的胸主動(dòng)脈瘤。并且該動(dòng)脈瘤的發(fā)生快于Smad3+/-雜合子小鼠,升主動(dòng)脈擴(kuò)張明顯,夾層發(fā)生早,破裂死亡率高。在HE、EVG切片中發(fā)現(xiàn),血管直徑擴(kuò)張,血管中層平滑肌增厚,彈力纖維在病變局部降解。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),在雙敲小鼠中,血管平滑肌中pSMAD2水平明顯下降。體外實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn),雙敲小鼠的原代平滑肌,對TGF-β的反應(yīng)性明顯降低,其下游靶蛋白表達(dá)同樣減低。結(jié)論：在胸主動(dòng)脈瘤中,microRNA-21在血管中層平滑肌中明顯升高,下調(diào)microRNA-21能加重胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)生。其機(jī)制可能與平滑肌細(xì)胞中TGF-β通路受到抑制有關(guān)。第二部分SMAD7調(diào)控TGF-β信號通路與動(dòng)脈瘤發(fā)生的作用及其機(jī)制研究目的：了解miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制,通過干預(yù)Smad7緩解胸主動(dòng)脈瘤發(fā)病。方法：對miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠動(dòng)脈瘤組織進(jìn)行免疫組化、RT-PCR檢測,探究平滑肌表型轉(zhuǎn)換相關(guān)的收縮分子αSMA.SM22.SM-MHC,炎癥因子CCL2, CXCL12,IL-6等了解血管平滑肌在動(dòng)脈瘤發(fā)生時(shí)的表型轉(zhuǎn)換程度。并在體外和體內(nèi)利用病毒轉(zhuǎn)染Smad7抑制序列解除microRNA-21敲除對SMAD通路的抑制作用,從而抑制胸主動(dòng)脈瘤形成。結(jié)果：miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠的胸主動(dòng)脈瘤中,平滑肌細(xì)胞因?yàn)檫^分抑制的TGF-β通路導(dǎo)致發(fā)生表型轉(zhuǎn)換。其表現(xiàn)為收縮分子aSMA、SM22、SM-MHC下調(diào)和炎癥相關(guān)分子CCL2,CXCL12,IL-6上調(diào)。同時(shí),上調(diào)的炎癥分子誘導(dǎo)炎性細(xì)胞向病變局部趨化。當(dāng)使用si Smad7慢病毒進(jìn)行轉(zhuǎn)染后,TGF-β信號活化水平提高,血管平滑肌表現(xiàn)轉(zhuǎn)換得到抑制,胸主動(dòng)脈瘤病變得到改善。結(jié)論：miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠動(dòng)脈瘤形成中,TGF-β信號降低介導(dǎo)的血管平滑肌表型轉(zhuǎn)換是其致病的主要因素。使用慢病毒干預(yù)SMAD7蛋白表達(dá)能夠抑制血管平滑肌表型轉(zhuǎn)換,緩解雙敲小鼠胸主動(dòng)脈瘤發(fā)生。
[Abstract]:Part one: MicroRNA-21 promotes the formation of thoracic aortic aneurysm induced by angiotensin 鈪，

本文編號：2459437