【摘要】：第一部分MicroRNA-21通過調(diào)節(jié)TGF-β-Smad3信號促進血管緊張素Ⅱ所致胸主動脈瘤形成的作用及其機制研究目的：驗證在胸主動脈瘤中microRNA-21在病變中的變化規(guī)律,探究干預microRNA-21在胸主動脈瘤中的作用。方法：使用血管緊張素Ⅱ灌注Smad3+/-雜合子小鼠建立胸主動脈瘤模型,RT-PCR和原位雜交方法檢測形成胸主動脈瘤組織中的microRNA-21表達的時空變化。同時檢測臨床患者中microRNA-21表達量及部位的變化。之后引入miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠進行胸主動脈瘤模型復制,小鼠B超觀察其血管擴張、動脈瘤形成等病變特點。組織學檢測病變局部的病理特點,并檢測TGF-β相關下游信號通路的活化情況。體外培養(yǎng)平滑肌,驗證其對TGF-β的反應性。結果：在Sm-d3+/-雜合子小鼠中灌注血管緊張素Ⅱ,能夠誘導雜合子小鼠發(fā)生胸主動脈瘤。并且通過RT-PCR.原位雜交方法發(fā)現(xiàn),microRNA-21升高主要表達于血管中層平滑肌內(nèi)。與臨床標本檢測的microRNA-21表達部位相符。在對microRNA-21進行敲除后,雙敲小鼠產(chǎn)生了明顯的胸主動脈瘤。并且該動脈瘤的發(fā)生快于Smad3+/-雜合子小鼠,升主動脈擴張明顯,夾層發(fā)生早,破裂死亡率高。在HE、EVG切片中發(fā)現(xiàn),血管直徑擴張,血管中層平滑肌增厚,彈力纖維在病變局部降解。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn),在雙敲小鼠中,血管平滑肌中pSMAD2水平明顯下降。體外實驗也發(fā)現(xiàn),雙敲小鼠的原代平滑肌,對TGF-β的反應性明顯降低,其下游靶蛋白表達同樣減低。結論：在胸主動脈瘤中,microRNA-21在血管中層平滑肌中明顯升高,下調(diào)microRNA-21能加重胸主動脈瘤的發(fā)生。其機制可能與平滑肌細胞中TGF-β通路受到抑制有關。第二部分SMAD7調(diào)控TGF-β信號通路與動脈瘤發(fā)生的作用及其機制研究目的：了解miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠胸主動脈瘤的發(fā)病機制,通過干預Smad7緩解胸主動脈瘤發(fā)病。方法：對miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠動脈瘤組織進行免疫組化、RT-PCR檢測,探究平滑肌表型轉換相關的收縮分子αSMA.SM22.SM-MHC,炎癥因子CCL2, CXCL12,IL-6等了解血管平滑肌在動脈瘤發(fā)生時的表型轉換程度。并在體外和體內(nèi)利用病毒轉染Smad7抑制序列解除microRNA-21敲除對SMAD通路的抑制作用,從而抑制胸主動脈瘤形成。結果：miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠的胸主動脈瘤中,平滑肌細胞因為過分抑制的TGF-β通路導致發(fā)生表型轉換。其表現(xiàn)為收縮分子aSMA、SM22、SM-MHC下調(diào)和炎癥相關分子CCL2,CXCL12,IL-6上調(diào)。同時,上調(diào)的炎癥分子誘導炎性細胞向病變局部趨化。當使用si Smad7慢病毒進行轉染后,TGF-β信號活化水平提高,血管平滑肌表現(xiàn)轉換得到抑制,胸主動脈瘤病變得到改善。結論：miR-21-/-:Smad3+/-雙敲小鼠動脈瘤形成中,TGF-β信號降低介導的血管平滑肌表型轉換是其致病的主要因素。使用慢病毒干預SMAD7蛋白表達能夠抑制血管平滑肌表型轉換,緩解雙敲小鼠胸主動脈瘤發(fā)生。
[Abstract]:Part one: MicroRNA-21 promotes the formation of thoracic aortic aneurysm induced by angiotensin 鈪，

本文編號：2459437