發(fā)布時(shí)間：2019-04-02 16:06

【摘要】：目的:體外誘導(dǎo)人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cell,iPS)分化為心臟起搏細(xì)胞,體內(nèi)解剖精確定位獲得兔竇房結(jié)組織,進(jìn)而直接獲得心臟起搏細(xì)胞。方法:體外Cellapy法高效誘導(dǎo)人iPS細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞和心臟起搏細(xì)胞,肉眼觀察心臟起搏細(xì)胞形態(tài)及起搏頻率,免疫熒光檢測(cè)人iPS源性心臟起搏細(xì)胞中特異性標(biāo)志物HCN4陽(yáng)性比例。體內(nèi)解剖精確定位獲得兔心臟起搏細(xì)胞后,應(yīng)用qRT-PCR及免疫印跡法檢測(cè)兔心臟起搏細(xì)胞HCN4mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:運(yùn)用Cellapy方法成功將人iPS細(xì)胞誘導(dǎo)分化為具有自發(fā)跳動(dòng)特性的心臟起搏細(xì)胞,顯微攝像記錄顯示心臟起搏細(xì)胞搏動(dòng)頻率為(70.60±2.71)次/min,且細(xì)胞形態(tài)以梭型為主;免疫熒光顯示人iPS源性心臟起搏細(xì)胞中HCN4蛋白陽(yáng)性細(xì)胞占(9.42±1.57)%。同時(shí),qRT-PCR及Western blot結(jié)果顯示兔竇房結(jié)組織中心臟起搏細(xì)胞HCN4表達(dá)明顯高于心房肌和心室肌(P0.01)。結(jié)論:體外Cellapy誘導(dǎo)法和動(dòng)物體內(nèi)解剖精確定位是獲得心臟起搏細(xì)胞的兩種有效方法。這為研究病態(tài)竇房結(jié)綜合征的發(fā)病機(jī)制提供了可靠的細(xì)胞來(lái)源,同時(shí)為病態(tài)竇房結(jié)綜合征的治療提供了移植細(xì)胞。
[Abstract]:Aim: to induce human induced pluripotent stem cells (induced pluripotent stem cell,iPS) to differentiate into cardiac pacing cells in vitro. To obtain rabbit sinoatrial node tissue by anatomical localization in vivo, and then to obtain cardiac pacing cells directly. Methods: human iPS cells were induced to differentiate into cardiomyocytes and cardiac pacing cells by Cellapy method in vitro. The morphology and frequency of pacemaker cells were observed by naked eyes. The HCN4 positive ratio of specific markers in human iPS-derived cardiac pacing cells was detected by immunofluorescence. The expression of HCN4mRNA and protein in rabbit cardiac pacing cells were detected by qRT-PCR and Western blot after the rabbit cardiac pacing cells were accurately located in vivo. Results: human iPS cells were successfully induced to differentiate into pacemaker cells by Cellapy method. The pacemaker frequency of pacemaker cells was (70.60 鹵2.71) beats / min, and the morphology of pacemaker cells was spindle type. Immunofluorescence showed (9.42 鹵1.57)% of HCN4 protein positive cells in human iPS-derived cardiac pacing cells. At the same time, the results of qRT-PCR and Western blot showed that the expression of HCN4 in pacemaker cells of rabbit sinoatrial node was significantly higher than that of atrial muscle and ventricular muscle (P0.01). Conclusion: Cellapy induction in vitro and anatomical localization in vivo are two effective methods for obtaining cardiac pacing cells. This provides a reliable source of cells for the study of pathogenesis of sick sinus syndrome, and provides transplantation cells for the treatment of sick sinus syndrome.
【作者單位】： 云南省第一人民醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No:81260038,81360039) 云南省心律失常診治研究中心研究基金項(xiàng)目(No:2014NS260,2014NS259)
【分類號(hào)】：R541.7

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