【摘要】：原發(fā)免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)是以血小板減少為特征的自身免疫性疾病,在出血性疾病中約占1/3。主要病因為骨髓巨核細(xì)胞異常使血小板生成減少或者患者體內(nèi)產(chǎn)生專門針對血小板的自身抗體破壞血小板過多所致。近些年,作為一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,NK細(xì)胞在自身免疫性疾病中的研究越來越多。有研究發(fā)現(xiàn)[1]系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血中NK細(xì)胞數(shù)量減少、殺傷活性降低,且合并血小板減少和關(guān)節(jié)炎的患者NK細(xì)胞數(shù)量的減少更加顯著,認(rèn)為NK細(xì)胞在本病發(fā)生中主要起保護(hù)性作用。此外RA[2]、Graves病[3]中也有同樣的發(fā)現(xiàn)。在ITP中NK細(xì)胞相關(guān)的研究尚少,而且研究多數(shù)集中于用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測NK細(xì)胞的數(shù)量變化,本研究通過不同的檢測方式檢測不同疾病狀態(tài)ITP患者及健康對照者外周血中NK細(xì)胞數(shù)量、亞群、殺傷功能及其分泌細(xì)胞因子的變化,進(jìn)一步探討在ITP發(fā)病機(jī)制中NK細(xì)胞的作用。第一部分免疫性血小板減少癥患者NK細(xì)胞數(shù)量、亞群及殺傷功能的研究目的:探討免疫性血小板減少癥(ITP)患者外周血NK細(xì)胞數(shù)量、亞群和殺傷功能的研究。方法:選取2015年9月至2016年4月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院血液科住院的初診免疫性血小板減少癥(ITP)患者34例,完全緩解ITP患者32例及健康志愿者30名。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血NK細(xì)胞及其亞群比例,激活性受體NKp44及抑制性受體NKG2A,胞質(zhì)蛋白穿孔素及顆粒酶β的表達(dá)水平,并將其與ITP患者的免疫狀態(tài)及血小板計數(shù)水平做相關(guān)性分析。結(jié)果:(1)NK細(xì)胞及其亞群占外周血淋巴細(xì)胞比例:NK細(xì)胞:初診組(10.99±4.89)%及完全緩解組(9.73±6.75)%顯著低于對照組(14.67±7.24)%(P=0.023、0.003),初診患者中治療有效組(11.71±5.5)%顯著高于難治組(7.97±3.07)%(P=0.045);Bright亞群:初診組(0.48±0.23)%及完全緩解組(0.41±0.33)%顯著低于對照組(0.64±0.32)%(P=0.037、0.002);Dim亞群:初診組(10.16±5.02)%及完全緩解組(8.07±5.74)%顯著低于對照組(14.16±7.19)%(P=0.009、0.007);(2)各亞群占NK細(xì)胞的比例:Bright亞群:初診組(6.48±4.33)%顯著高于對照組(4.21±2.70)%(P=0.020),Dim亞群:初診組(93.51±4.33)%顯著低于對照組(95.79±2.70)(P=0.020)(3)激活性受體NKp44:初診組0.28(0.95)%顯著低于完全緩解組0.61(2.05)%及對照組0.92(0.90)%(P=0.047、0.048);抑制性受體NKG2A:初診組(42.34±23.86)%顯著高于對照組(29.25±12.83)%(P=0.009),CD16:初診組(93.51±4.33)%顯著低于對照組(95.79±2.70)%(P=0.020);(4)穿孔素:初診組87.52(25.29)%顯著低于對照組91.55(8.29)%(P=0.025),顆粒酶β三組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.560,0.426,0.179)。(5)NK細(xì)胞與外周血殺傷T細(xì)胞(CD3+CD8+)呈負(fù)相關(guān)(n=41,r=-0.387,P=0.012),與B1細(xì)胞(CD5+CD19+)呈負(fù)相關(guān)(n=66,r=-0.273,P=0.028),與外周血輔助殺傷細(xì)胞比值(CD3+CD4+/CD3+CD8+)呈正相關(guān)(n=41,r=0.358,P=0.028),與外周血血小板計數(shù)呈正相關(guān)(n=66,r=0.314,P=0.011)。結(jié)論:ITP患者可能因其外周血NK細(xì)胞數(shù)量減少,發(fā)育障礙、功能降低,對自身反應(yīng)性T、B細(xì)胞的抑制不足導(dǎo)致疾病的發(fā)生。第二部分原發(fā)免疫性血小板減少癥患者NK細(xì)胞相關(guān)免疫負(fù)調(diào)控的研究目的:探討原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)患者外周血中NK細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10、TGF-β的變化。方法:以22例初診ITP患者(初診組)、20例治療后完全緩解ITP患者(完全緩解組)為研究對象,20名健康志愿者為對照組。采用ELISA法檢測三組受試者血清IFN-γ及IL-10的水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測NK細(xì)胞(CD3-CD56+)及其Bright亞群(CD3-CD56bright CD16-)、Dim亞群(CD3-CD56dim CD16+)的水平;采用免疫磁珠法分離NK細(xì)胞,實時熒光定量PCR檢測IFN-γ、IL-10、TGF-β基因m RNA的表達(dá),并將以上測得結(jié)果做相關(guān)性分析。結(jié)果:(1)初診組ITP患者血清IFN-γ濃度[(653.0±221.6)ng/L]高于完全緩解組[(484.4±219.5)ng/L]和對照組[(390.9±253.5)ng/L](P值分別為0.022、0.001),血清IL-10濃度低于對照組[(52.09±26.66)ng/L對(79.44±38.43)ng/L,P=0.007]。(2)初診組、完全緩解組患者外周血NK細(xì)胞比例[(9.53±3.93)%、(9.03±3.78)%]均顯著低于對照組[(13.72±7.42)%](P值分別為0.013、0.007),初診患者外周血Bright亞群占NK細(xì)胞的比例高于對照組[(6.85±4.43)%對(4.05±2.81)%,P=0.032],而初診組外周血Dim亞群占NK細(xì)胞的比例低于對照組[(93.14±4.43)%對(95.94±2.81)%,P=0.032]。(3)初診組、完全緩解組及對照組NK細(xì)胞IFN-γ基因m RNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),初診組NK細(xì)胞IL-10、TGF-β基因m RNA表達(dá)高于對照組(1.82±1.32對1.02±1.03,P=0.023;2.80±2.31對1.46±1.37,P=0.028)。外周血Bright細(xì)胞占NK細(xì)胞的比例與NK細(xì)胞IL-10及TGF-β基因m RNA表達(dá)成正相關(guān)(r分別為0.424、0.432,P值均0.05)。結(jié)論:NK細(xì)胞可能通過加強(qiáng)分泌免疫負(fù)調(diào)控因子來代償其數(shù)量的不足,在疾病中起保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R558.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2439549