【摘要】：第一部分：FGF-2及其下游信號(hào)通路在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病中的作用目的：肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary Arterial Hypertension, PAH)是一種多因素參與的進(jìn)展性疾病,其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。成纖維生長(zhǎng)因子-2(Fibroblast growth factor-2,FGF-2)是一種促細(xì)胞分裂的肝素結(jié)合蛋白,它與其受體FGFR-1結(jié)合后,可誘導(dǎo)多種細(xì)胞的增殖與分化。本研究旨在探討FGF-2及其下游信號(hào)通路在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病中的表達(dá)變化,以便進(jìn)一步探索肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病機(jī)制。方法：腹腔注射野百合堿(Monocrotaline, MCT)建立大鼠肺動(dòng)脈高壓模型,在MCT注射后0周、1周、2周、3周和4周后通過(guò)右心導(dǎo)管檢查測(cè)量肺血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),用HE及VG染色分析肺小動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)變化。同時(shí)通過(guò)免疫組化和Western blot技術(shù)測(cè)定大鼠肺組織中FGF-2信號(hào)通路及其下游增殖、凋亡信號(hào)的表達(dá)變化。此外,我們收集66例特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(IPAH)患者的血漿,通過(guò)ELISA方法檢測(cè)IPAH患者血漿中FGF-2和BMP-2的表達(dá)水平。結(jié)果：MCT注射后大鼠肺動(dòng)脈壓力明顯增高,肺血管病理學(xué)分析顯示中膜平滑肌增厚和血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。IPAH患者和肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中FGF-2和FGFR-1表達(dá)均較正常對(duì)照組明顯升高；免疫組化顯示FGF-2主要表達(dá)于肺泡間質(zhì)和肺小動(dòng)脈外膜；而FGFR-1主要表達(dá)于肺小動(dòng)脈內(nèi)膜。肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中ERK1/2活性增高,而Akt活性降低,同時(shí)反映平滑肌增殖的指標(biāo)PCNA和a-SMA表達(dá)升高,凋亡蛋白Bax和活性Caspase-3的表達(dá)也顯著升高。我們同時(shí)還發(fā)現(xiàn)骨形成蛋白Ⅱ型受體(Bone morphogenetic protein type Ⅱ receptor, BMPR-Ⅱ)及其下游p-Smadl/5/8表達(dá)明顯降低,而它的配體BMP-2的表達(dá)增高。此外,特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者血漿中FGF-2和BMP-2的濃度較正常對(duì)照組顯著升高,但與心功能分級(jí)、六分鐘步行距離、血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)及血漿N末端B型利鈉肽原等臨床指標(biāo)沒(méi)有相關(guān)性。結(jié)論：肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織FGF-2和FGFR-1表達(dá)明顯上調(diào),同時(shí)其下游信號(hào)通路ERK1/2明顯活化,并且伴隨著內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和平滑肌細(xì)胞增殖。第二部分：PD173074干預(yù)野百合堿誘導(dǎo)大(?)肺動(dòng)脈高壓的實(shí)驗(yàn)研究目的：肺動(dòng)脈高壓(Pulmonary Arterial Hypertension,PAH)是一種以內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞增殖為主要特征的進(jìn)展性疾病,預(yù)后極差，，研究表明FGF-2/FGFR-1及其下游信號(hào)通路在PAH形成過(guò)程中起著重要的作用。PD173074是一類合成的高選擇性FGFR-1抑制劑,它可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。本研究旨在探討PD173074對(duì)野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓的防治作用及對(duì)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響。方法：27只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為3組(n=9)：正常對(duì)照組、溶劑對(duì)照組和PD173074組。PD173074組于MCT注射后第14天開始每天腹腔注射20mg/kg的PD173074,持續(xù)兩周,溶劑對(duì)照組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)注射等量的溶劑。所有大鼠第4周通過(guò)右心導(dǎo)管檢查測(cè)量肺動(dòng)脈血流動(dòng)力學(xué),用HE及VG染色分析肺小動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué),用免疫組化和Western blot技術(shù)測(cè)定肺組織中FGF-2/FGFR-1信號(hào)通路及其下游增殖、凋亡信號(hào)的表達(dá)。同時(shí)進(jìn)行原代培養(yǎng)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(Pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs),通過(guò)MTT及Western blot測(cè)定PD173074對(duì)FGF-2誘導(dǎo)的PASMCs增殖及下游ERK1/2和Akt活化的影響。結(jié)果：腹腔注射PD173074減輕MCT大鼠肺動(dòng)脈壓力和右心室肥厚指數(shù),病理學(xué)分析顯示肺小動(dòng)脈管腔面積增加,中膜肥厚程度明顯減輕。PD173074降低MCT大鼠肺組織中ERK1/2活性,增加p-Akt和Akt表達(dá),同時(shí)降低肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。我們還發(fā)現(xiàn),MCT注射后大鼠肺組織中BMPR-Ⅱ及其下游p-Smad1/5/8表達(dá)顯著降低,腹腔注射PD173074增加BMPR-Ⅱ和p-Smad1/5/8表達(dá)。此外,FGF-2可以通過(guò)活化下游ERK1/2和Akt通路,促進(jìn)大鼠PASMCs增殖；而PD173074抑制FGF-2誘導(dǎo)的大鼠PASMCs增殖,并且下調(diào)ERK1/2和Akt的活化。結(jié)論：PD173074通過(guò)降低ERK1/2和Akt的活化,抑制FGF-2誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖；腹腔注射PD173074減輕MCT大鼠肺動(dòng)脈高壓的形成和肺血管重構(gòu),同時(shí)上調(diào)肺組織中BMPR-Ⅱ的表達(dá)。因此,PD173074可能成為治療肺動(dòng)脈高壓的一個(gè)新的藥物。第三部分：血漿可溶性ST-2水平與特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者病情及預(yù)后關(guān)系的研究目的：近年來(lái),可溶性基質(zhì)裂解素(Soluble suppression of tumorigenicity 2, sST2)作為一種新的心血管病及炎癥的生物標(biāo)志物而受到較多的關(guān)注。研究表明,sST2與慢性心力衰竭患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。然而,sST2與肺動(dòng)脈高壓預(yù)后的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在探討sST2與特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓患者病情和預(yù)后的關(guān)系。方法：入選2012年1月至2013年5月在我院確診為特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(Idiopathic PAH, IP AH)的患者40例,24名健康志愿者作為正常對(duì)照。采集IPAH患者和健康志愿者的血漿,檢測(cè)sST2的表達(dá)水平。同時(shí)收集患者人口學(xué)特征、血流動(dòng)力學(xué)、超聲心動(dòng)圖指標(biāo)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)等基線數(shù)據(jù),并且進(jìn)行電話或門診隨訪。隨訪終點(diǎn)為臨床惡化。結(jié)果：IPAH患者血漿中可溶性ST-2濃度較正常對(duì)照組顯著升高(28.9+13.9 vs20.7±7.5 ng/mL, P=0.003)。Pearson相關(guān)性分析顯示,血漿sST2水平與IPAH患者心指數(shù)(r=-0.534,P=-0.000)和肺血管阻力(r=0.350,P=0.001)等指標(biāo)相關(guān),可以反映患者病情嚴(yán)重程度。平均隨訪時(shí)間為14±5月,12例患者出現(xiàn)臨床惡化事件。ROC曲線分析顯示血漿sST2水平可以預(yù)測(cè)IPAH患者臨床惡化事件發(fā)生,曲線下面積為0.789,其中以31.4ng/ml作為界值時(shí),靈敏度為83.3%,特異度為78.6%。Kaplan-Meier曲線顯示,sST231.4ng/ml的IPAH患者相比于sST231.4ng/ml的患者在隨訪期間發(fā)生更多的臨床惡化事件(log-rank P=0.008)。多因素Cox模型顯示,sST2是IPAH患者臨床惡化的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(風(fēng)險(xiǎn)比：6.067,95%可信區(qū)間：1.317-27.948,P=0.021)。結(jié)論：血漿sST2水平與肺動(dòng)脈高壓患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān),并且可以預(yù)測(cè)患者的臨床惡化。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R544.1


本文編號(hào)：2430366