發(fā)布時(shí)間：2019-01-24 08:33

【摘要】：目的:研究干細(xì)胞定向分化為內(nèi)皮細(xì)胞的效率,并與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)比較。方法:用兩步法誘導(dǎo)干細(xì)胞HUES9分化為內(nèi)皮細(xì)胞,前3 d在N2B27培養(yǎng)基中加入骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(25 ng/m L)和肝糖原合成激酶3β受體的選擇性抑制劑CHIR99021(10μmol/L)使細(xì)胞分化到中胚層狀態(tài),第4天開始用VEGF165(200 ng/m L)和Forskolin(2μmol/L)將細(xì)胞誘導(dǎo)為內(nèi)皮細(xì)胞。觀察分化第6天細(xì)胞形態(tài),并與HUVECs比較。用CD144作為內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)志物,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分化效率及分化后細(xì)胞的身份。比較兩種內(nèi)皮細(xì)胞遷移和成管能力。結(jié)果:分化后的內(nèi)皮細(xì)胞與HUVECs在顯微鏡下形態(tài)一致。分化細(xì)胞表面標(biāo)志物陽性率達(dá)到73.4%,重新培養(yǎng)后的內(nèi)皮細(xì)胞表面CD144陽性率達(dá)到86.6%,HUVECs為94.4%。分化后的內(nèi)皮細(xì)胞與HUVECs均具有良好的遷移和成管能力,但分化后的內(nèi)皮細(xì)胞能力不如HUVECs強(qiáng)。運(yùn)用SB431542后,能夠提高分化后內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和成管能力。結(jié)論:此兩步法將干細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞有較高的分化效率,可作為理想的分化方法。
[Abstract]:Aim: to study the efficiency of stem cell differentiation into endothelial cells and compare it with human umbilical vein endothelial cell (human umbilical vein endothelial cells,HUVECs). Methods: stem cell HUES9 was induced to differentiate into endothelial cells by two-step method. In the first 3 days, bone morphogenetic protein 4 (25 ng/m L) and CHIR99021 (10 渭 mol/L), a selective inhibitor of hepatic glycogen synthesis kinase 3 尾 receptor, were added to N2B27 medium to differentiate the cells into mesoderm state. On the 4th day, VEGF165 (200 ng/m L) and Forskolin (2 渭 mol/L) were used to induce endothelial cells. Cell morphology was observed on the 6th day of differentiation and compared with HUVECs. CD144 was used as the surface marker of endothelial cells. Flow cytometry was used to detect the differentiation efficiency and the identity of differentiated cells. The migration and tubular ability of two kinds of endothelial cells were compared. Results: the morphology of differentiated endothelial cells was identical to that of HUVECs under microscope. The positive rate of CD144 on the surface of differentiated cells was 73.4%, and the positive rate of CD144 on the surface of cultured endothelial cells was 86.6%. The positive rate of HUVECs was 94.4%. The differentiated endothelial cells and HUVECs had good migration and tube-forming ability, but the differentiated endothelial cells were not as strong as HUVECs. Application of SB431542 can improve the migration and tubular formation of differentiated endothelial cells. Conclusion: the two-step method has higher differentiation efficiency and can be used as an ideal method to differentiate stem cells into endothelial cells.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院心內(nèi)科;湖南省人民醫(yī)院老年病科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81570334)~~
【分類號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：2414305