【摘要】：病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是臨床常見的心血管系統(tǒng)疾病。其中B3型柯薩奇病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)在病毒性心肌炎的發(fā)病中扮演著重要角色。最新臨床報(bào)道證實(shí):男性發(fā)生心肌纖維炎癥損傷的幾率顯著高于女性,表明病毒性心肌炎有顯著的性別差異。然而,對(duì)病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異機(jī)制尚不完全清楚。因此,在細(xì)胞和分子水平上闡明病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異的分子機(jī)制,具有重要的理論和應(yīng)用意義。以CVB3感染小鼠建立的心肌炎動(dòng)物模型,很好的模擬了臨床上病毒性心肌炎過(guò)程。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果表明,在病毒性心肌炎小鼠模型中,雄性小鼠的發(fā)病程度顯著高于雌性小鼠,且雄性小鼠心臟微環(huán)境中IFN-γ的表達(dá)是雌小鼠的5倍,并且在感染早期主要由NK細(xì)胞表達(dá)。NK細(xì)胞是VMC感染早期最主要的炎性浸潤(rùn)細(xì)胞,可直接作用于病毒感染的心肌細(xì)胞,并通過(guò)分泌IFN-γ等細(xì)胞因子,進(jìn)一步擴(kuò)大炎性反應(yīng)。為了驗(yàn)證NK細(xì)胞在病毒性心肌炎中的關(guān)鍵作用,我們通過(guò)腹腔注射NK細(xì)胞中和抗體anti-ASGM1干預(yù)小鼠心肌炎模型,發(fā)現(xiàn)中和抗體清除NK細(xì)胞后雄性小鼠心臟浸潤(rùn)的IFN-γ的表達(dá)顯著減少,心肌炎性病狀減輕。同時(shí)我們動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)到雌雄小鼠感染CVB3后心臟浸潤(rùn)的NK細(xì)胞其數(shù)量百分比沒有顯著性別差異,但是雄性小鼠心臟浸潤(rùn)的NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的水平要顯著高于雌性小鼠。進(jìn)一步我們給雄性心肌炎小鼠注射雌激素進(jìn)行干預(yù),結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射雌激素后,雄性小鼠心臟微環(huán)境中IFN-γ的表達(dá)水平顯著下調(diào),提示我們雌激素可能影響了心肌炎小鼠心臟浸潤(rùn)NK細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)。因此,本課題主要探討病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中雌激素如何調(diào)控小鼠心臟微環(huán)境中NK細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)。為了探究雌激素在病毒性心肌炎中的重要作用,我們首先考慮到自然發(fā)育過(guò)程中,性發(fā)育不成熟的小鼠和性發(fā)育成熟雌雄小鼠在感染CVB3后是否有不同的發(fā)病狀態(tài)。我們?cè)跇?gòu)建雄性小鼠半數(shù)致死劑量的心肌炎模型過(guò)程中發(fā)現(xiàn),性發(fā)育不成熟(2周齡)小鼠感染CVB3后沒有顯著的性別差異,而性發(fā)育成熟(6周齡)小鼠感染CVB3后具有顯著的性別差異,雄性小鼠的發(fā)病程度顯著高于雌性小鼠,并且雄性小鼠心臟浸潤(rùn)的NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ程度顯著高于雌性小鼠。我們通過(guò)去勢(shì)手術(shù)摘除雌性小鼠的卵巢,發(fā)現(xiàn)去勢(shì)組雌性小鼠心臟炎癥明顯加重,心臟浸潤(rùn)的NK細(xì)胞分泌的IFN-γ較對(duì)照組顯著上調(diào)。以上結(jié)果驗(yàn)證了雌激素在調(diào)控小鼠心臟浸潤(rùn)的NK細(xì)胞分泌IFN-γ過(guò)程中的重要作用。我們進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探究雌激素對(duì)NK細(xì)胞分泌IFN-γ的調(diào)控。我們用雌激素和CVB3處理磁珠分選得到的NK細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn),CVB3的刺激可上調(diào)NK細(xì)胞IFN-γ的分泌,而雌激素可抑制這一現(xiàn)象。并且我們發(fā)現(xiàn),CVB3不能直接感染NK細(xì)胞,但是CVB3刺激可上調(diào)NK細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)。為了探究CVB3是否直接活化NK細(xì)胞,我們?cè)隗w外模擬了兩種感染過(guò)程:1)CVB3感染心肌細(xì)胞后,與純化的NK細(xì)胞共培養(yǎng),2)CVB3直接刺激NK細(xì)胞,有趣的是,上述實(shí)驗(yàn)均能上調(diào)NK細(xì)胞IFN-γ的表達(dá)。已有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,雌激素可通過(guò)調(diào)控活化的淋巴細(xì)胞中T-bet的表達(dá)來(lái)影響IFN-γ的分泌。后續(xù)實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn),雌激素的刺激能夠在蛋白水平下調(diào)CVB3刺激后NK細(xì)胞分泌IFN-γ信號(hào)通路中T-bet的表達(dá)。我們由此猜測(cè):雌激素可通過(guò)下調(diào)NK細(xì)胞T-bet表達(dá)來(lái)抑制IFN-γ的分泌�；贜K細(xì)胞在病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中的重要作用,在本研究中我們利用不同性別BALB/c小鼠對(duì)CVB3感染后病毒性心肌炎嚴(yán)重程度的差異,著重研究雌激素對(duì)NK細(xì)胞表達(dá)IFN-γ的調(diào)控在病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中的作用,為闡明病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異提供新的分子調(diào)控機(jī)制,同時(shí)為病毒性心肌炎的防治提供可能的靶點(diǎn)
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.21

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本文編號(hào)：2342342