【摘要】：背景:動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是許多重要血管事件的病理基礎(chǔ)。當(dāng)前社會,人們的生活水平逐年升高,醫(yī)療衛(wèi)生保障也持續(xù)改善,使人口老齡化加劇,從而導(dǎo)致老年性疾病的發(fā)病率逐年上升,其中最引人注目的便是動脈粥樣硬化。目前,動脈粥樣硬化造成的心血管疾病已成為在全球發(fā)病率和死亡率中居于首位的疾病。因而對AS的發(fā)病機制及病理過程進行深入探討具有重大意義。動脈粥樣硬化的發(fā)病機制非常復(fù)雜,涉及多種因素。越來越多的證據(jù)證明,免疫炎癥反應(yīng)在動脈粥樣硬化的發(fā)生以及發(fā)展過程中有著不容忽視的重要作用。Toll樣受體(Toll like receptors,TLR)主要介導(dǎo)非特異性免疫反應(yīng)和炎性反應(yīng),其中的TLR4與人類動脈粥樣硬化的關(guān)系最為密切,而TLR4中的髓樣分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,My D88)依賴性途徑最為重要。微小RNA(micro RNA,miRNA)是一組長約為22個核苷酸的非編碼RNA,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化的作用,參與多種器官和組織生理和病理機制的發(fā)生,在心臟相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展中也有著調(diào)節(jié)作用。既往研究發(fā)現(xiàn),miR-155是一種已發(fā)現(xiàn)的有多功能的miRNA,多項研究表明miR-155表達增加能抑制Toll樣受體配體和細(xì)胞因子誘導(dǎo)蛋白水解酶類的生成,并影響多種炎癥因子的表達。其中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和炎癥因子白介素-10(Interleukin-10,IL-10)與動脈粥樣硬化性疾病有著密切的聯(lián)系。既往研究發(fā)現(xiàn),My D88是miR-155的靶基因,miR-155可通過抑制My D88的翻譯對其發(fā)揮調(diào)控作用。那么miR-155調(diào)控My D88的表達在動脈粥樣硬化過程中的存在怎樣的作用有待研究。目的:本研究旨在探討miR-155是否通過其靶基因MyD88調(diào)控AS中TLR4信號通路,通過對免疫炎癥調(diào)節(jié)起到抗動脈粥樣硬化作用。方法:一、建立載脂蛋白E基因敲除(ApoE gene knockout,ApoE~(-/-))小鼠AS模型,選取4-6周齡的雄性ApoE~(-/-)小鼠共10只,給予高脂飼料喂養(yǎng)20周,建立AS模型,選取10只正常飼料喂養(yǎng)的4-6周齡的雄性C57BL/6小鼠作為正常小鼠對照組。應(yīng)用HE染色法測定主動脈內(nèi)動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生發(fā)展情況,免疫組化測定動脈中動脈粥樣硬化斑塊中的My D88蛋白表達,酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血清白中IL-10、TGF-β1、MCP-1水平。二、體外培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞,給予低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)刺激構(gòu)建泡沫細(xì)胞模型。實驗分組:(1)miR-155 mimic組:轉(zhuǎn)染miR-155 mimic+ox-LDL;(2)miR-155 mimic陰性對照組:轉(zhuǎn)染miR-155 mimic陰性對照+ox-LDL;(3)miR-155inhibitor組:轉(zhuǎn)染miR-155 inhibitor+ox-LDL;(4)miR-155 inhibitor陰性對照組:轉(zhuǎn)染miR-155 inhibitor陰性對照+ox-LDL;(5)My D88 si RNA組:轉(zhuǎn)染My D88 si RNA+ox-LDL;(6)My D88 si RNA陰性對照組:轉(zhuǎn)染My D88si RNA+ox-LDL;應(yīng)用Real-time PCR法測定My D88的基因表達,Western blot法測定My D88的蛋白表達,酶聯(lián)免疫法檢測細(xì)胞上清液中炎癥因子IL-10、TGF-β1、MCP-1水平。結(jié)果:一、ApoE~(-/-)小鼠高脂飲食后,動脈血管HE染色顯示出現(xiàn)明顯的動脈粥樣硬化斑塊,免疫組化結(jié)果顯示動脈粥樣硬化斑塊中My D88顯色明顯,酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血清示動脈粥樣硬化小鼠組IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明顯高于對照組;正常對照組小鼠的動脈血管HE染色顯示未出現(xiàn)明顯的動脈粥樣硬化斑塊,免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示血管中My D88呈陰性。二、ox-LDL刺激巨噬細(xì)胞后,miR-155 mimic組較miR-155 mimic陰性對照組,My D88基因水平表達未見明顯變化;蛋白水平上,My D88表達明顯降低;細(xì)胞上清液IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明顯降低(P0.05)。miR-155 inhibitor組較miR-155 inhibitor陰性對照組,My D88基因水平表達未見明顯變化;My D88表達、細(xì)胞上清液IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明顯增高(P0.05);My D88 si RNA組較My D88組陰性對照組,My D88表達、細(xì)胞上清液IL-10、TGF-β1、MCP-1水平明顯降低(P0.05)。結(jié)論:1.MyD88和炎癥因子在動脈粥樣硬化模型小鼠中表達明顯增加;2.miR-155可抑制My D88蛋白的表達;3.提高miR-155可以降低炎癥因子IL-10、TGF-β1、MCP-1的釋放,反之則升高。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R543.5

【參考文獻】

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1 Huimin Yan;Bing Cui;Xiaowei Zhang;Xiaoming Fu;Jun Yan;Xiaoxing Wang;Xiaoxi Lv;Zhong Chen;Zhuowei Hu;;Antagonism of toll-like receptor 2 attenuates the formation and progression of abdominal aortic aneurysm[J];Acta Pharmaceutica Sinica B;2015年03期

2 尚菲;曾德意;楊慧;黃琳燕;劉捷;呂曉飛;關(guān)永源;周家國;;MicroRNA155通過下調(diào)清道夫受體表達抑制巨噬細(xì)胞泡沫化形成[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2012年02期

3 戴樹人;張曉剛;;動脈粥樣硬化形成與發(fā)展中的自身免疫反應(yīng)[J];心血管病學(xué)進展;2009年06期

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1 陳婷;microRNA-155調(diào)控oxLDL刺激樹突細(xì)胞參與動脈粥樣硬化免疫炎癥反應(yīng)的作用及機制[D];浙江大學(xué);2013年

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本文編號：2337446