發(fā)布時間：2018-11-12 14:06

【摘要】：高血壓是一種常見的慢性病,其病理較為復(fù)雜。研究發(fā)現(xiàn),血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC 3.4.15.1)及氨肽酶對血壓調(diào)節(jié)有重要作用。ACE是一種膜結(jié)合的羧基外肽酶,主要存在于哺乳動物的肺部,作用為將血管緊張素I(AngI)轉(zhuǎn)換為血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ),并將緩激肽降解為無活性的片段,從而引起血管收縮,導(dǎo)致血壓升高。而氨肽酶B(aminopeptidase B,APB,EC 3.4.11.6)可調(diào)控AngⅡI與AngIV之間的轉(zhuǎn)化及緩激肽的生成,是降低血壓的關(guān)鍵酶。APB與ACE共同維持著動物血壓的穩(wěn)定,因此,對這兩種酶的性質(zhì)研究有望為高血壓的食源性防控提供重要參考。本研究利用氯化鈉鹽析及柱層析結(jié)合的方法,從豬肺中制備了ACE并實現(xiàn)了其分離純化。結(jié)果顯示,低成本制備的工具酶ACE效用良好,在凍藏條件下酶活力穩(wěn)定,能維持一年以上。純化的ACE的分子質(zhì)量約為180 ku,雙向電泳顯示其pI約為5.7。肽質(zhì)量指紋圖譜鑒定得到二級質(zhì)譜肽段17個,共293個氨基酸殘基,與野豬ACE序列一致性為100%。酶學(xué)性質(zhì)分析發(fā)現(xiàn)ACE不耐熱,最佳反應(yīng)溫度為40°C,最適pH為8。同時,從豬肉中純化得到APB,分子質(zhì)量約為100 ku;肽質(zhì)量指紋圖譜鑒定獲得17個肽段共計243個氨基酸殘基,與豬的嘌呤敏感性氨肽酶的序列相似性為100%。酶學(xué)性質(zhì)分析表明,APB最易從N端分解堿性氨基酸殘基,動力學(xué)研究獲得其Km和kcat值分別為1.5μmol/L和47.9s-1,kcat/Km為31.9 L/(μmol·s)-1。ACE及APB的制備與純化以及性質(zhì)研究為降血壓活性物質(zhì)的篩選奠定了重要基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上,以鮑魚為原料,采用復(fù)合蛋白酶酶解鮑魚肌肉,經(jīng)一步酶解制備了鮑魚多肽,以制備的ACE為工具酶,測定其對ACE的抑制率為72%。響應(yīng)面法優(yōu)化得到其制備最佳工藝參數(shù)為反應(yīng)pH 7.0,反應(yīng)溫度50°C,加酶量0.3%,酶解時間1.7 h。超濾后得到的分子量3 ku的鮑魚多肽,具有良好的熱穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性,且耐腸胃消化。通過2個不同劑量(100、200 mg/kg body weight)的鮑魚多肽短期灌胃給藥于自發(fā)性高血壓大鼠,高劑量組效果可持續(xù)至8 h,血壓值下降了42.56±3.20 mmHg并伴隨著血漿中胰島素調(diào)控氨肽酶(insulin-regulated aminopeptidase,IRAP,EC 3.4.11.3)活性的顯著升高及APB、氨肽酶N(aminopeptidase N,APN,EC 3.4.11.2)活性的小幅度降低。而后利用Sephadex-G15凝膠過濾與反相高效液相色譜ZORBAX-C18柱對鮑魚多肽作進一步純化,獲得了耐消化IC50值為70.5μg/mL的抑制肽IACG。具有良好降壓效果的鮑魚ACE抑制肽的分離及效用探究,不僅豐富了皺紋盤鮑的營養(yǎng)保健基礎(chǔ)研究,且可幫助闡明ACE抑制肽的降壓機理。
[Abstract]:Hypertension is a common chronic disease, its pathology is more complicated. It has been found that angiotensin converting enzyme (angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC 3.4.15.1) and aminopeptidase play an important role in regulating blood pressure. ACE is a membrane-bound carboxyl exopeptidase, which mainly exists in mammalian lungs. Angiotensin I (AngI) was converted into angiotensin 鈪，

本文編號：2327330