【摘要】：高血壓是一種常見的慢性病,其病理較為復雜。研究發(fā)現,血管緊張素轉換酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC 3.4.15.1)及氨肽酶對血壓調節(jié)有重要作用。ACE是一種膜結合的羧基外肽酶,主要存在于哺乳動物的肺部,作用為將血管緊張素I(AngI)轉換為血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ),并將緩激肽降解為無活性的片段,從而引起血管收縮,導致血壓升高。而氨肽酶B(aminopeptidase B,APB,EC 3.4.11.6)可調控AngⅡI與AngIV之間的轉化及緩激肽的生成,是降低血壓的關鍵酶。APB與ACE共同維持著動物血壓的穩(wěn)定,因此,對這兩種酶的性質研究有望為高血壓的食源性防控提供重要參考。本研究利用氯化鈉鹽析及柱層析結合的方法,從豬肺中制備了ACE并實現了其分離純化。結果顯示,低成本制備的工具酶ACE效用良好,在凍藏條件下酶活力穩(wěn)定,能維持一年以上。純化的ACE的分子質量約為180 ku,雙向電泳顯示其pI約為5.7。肽質量指紋圖譜鑒定得到二級質譜肽段17個,共293個氨基酸殘基,與野豬ACE序列一致性為100%。酶學性質分析發(fā)現ACE不耐熱,最佳反應溫度為40°C,最適pH為8。同時,從豬肉中純化得到APB,分子質量約為100 ku;肽質量指紋圖譜鑒定獲得17個肽段共計243個氨基酸殘基,與豬的嘌呤敏感性氨肽酶的序列相似性為100%。酶學性質分析表明,APB最易從N端分解堿性氨基酸殘基,動力學研究獲得其Km和kcat值分別為1.5μmol/L和47.9s-1,kcat/Km為31.9 L/(μmol·s)-1。ACE及APB的制備與純化以及性質研究為降血壓活性物質的篩選奠定了重要基礎。在此基礎上,以鮑魚為原料,采用復合蛋白酶酶解鮑魚肌肉,經一步酶解制備了鮑魚多肽,以制備的ACE為工具酶,測定其對ACE的抑制率為72%。響應面法優(yōu)化得到其制備最佳工藝參數為反應pH 7.0,反應溫度50°C,加酶量0.3%,酶解時間1.7 h。超濾后得到的分子量3 ku的鮑魚多肽,具有良好的熱穩(wěn)定性及pH穩(wěn)定性,且耐腸胃消化。通過2個不同劑量(100、200 mg/kg body weight)的鮑魚多肽短期灌胃給藥于自發(fā)性高血壓大鼠,高劑量組效果可持續(xù)至8 h,血壓值下降了42.56±3.20 mmHg并伴隨著血漿中胰島素調控氨肽酶(insulin-regulated aminopeptidase,IRAP,EC 3.4.11.3)活性的顯著升高及APB、氨肽酶N(aminopeptidase N,APN,EC 3.4.11.2)活性的小幅度降低。而后利用Sephadex-G15凝膠過濾與反相高效液相色譜ZORBAX-C18柱對鮑魚多肽作進一步純化,獲得了耐消化IC50值為70.5μg/mL的抑制肽IACG。具有良好降壓效果的鮑魚ACE抑制肽的分離及效用探究,不僅豐富了皺紋盤鮑的營養(yǎng)保健基礎研究,且可幫助闡明ACE抑制肽的降壓機理。
[Abstract]:Hypertension is a common chronic disease, its pathology is more complicated. It has been found that angiotensin converting enzyme (angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC 3.4.15.1) and aminopeptidase play an important role in regulating blood pressure. ACE is a membrane-bound carboxyl exopeptidase, which mainly exists in mammalian lungs. Angiotensin I (AngI) was converted into angiotensin 鈪，

本文編號：2327330