【摘要】：目的:自噬在糖尿病心肌病損傷中的作用至今不詳。本實驗采用高糖高脂誘導(dǎo)H9c2心肌細胞,建立糖尿病心肌病心肌肥大模型,觀察高糖高脂對細胞損傷包括細胞凋亡的影響;探究自噬在高糖高脂誘導(dǎo)心肌細胞肥大中對H9c2心肌細胞凋亡的影響。方法:實驗分三部分:(1)采用隨機數(shù)表法將體外培養(yǎng)的H9c2心肌細胞隨機分組:對照組、不同濃度高糖高脂(250μM、500μM、1 000μM)分別干預(yù)H9c2心肌細胞不同時間組(12 h、24 h、36 h、48 h),進行HE染色,通過測量心肌細胞表面積的方法觀察高糖高脂對H9c2心肌細胞肥大的影響;RT-PCR法檢測心肌肥大標記基因ANP和α-SKA表達水平;(2)采用隨機數(shù)表法將H9c2心肌細胞進行分組(同第一部分),運用乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測方法評估細胞損傷程度;運用流式細胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)檢測細胞活性和凋亡率;(3)結(jié)合以上實驗結(jié)果,采用隨機數(shù)表法將體外培養(yǎng)的H9c2心肌細胞隨機分組:對照組、500μM高糖高脂干預(yù)H9c2心肌細胞36 h組(HGHL組)、自噬抑制劑氯喹預(yù)處理高糖高脂干預(yù)組(CQ+HGHL組),應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測自噬標志蛋白LC3 Ⅱ和細胞凋亡標志蛋白cleaved csapase-3表達水平,觀察自噬在糖尿病心肌病心肌細胞肥大中對細胞凋亡的影響;應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測對照組以及高糖高脂干預(yù)組(500μM組)自噬指標LC3 Ⅱ以及自噬信號通路p62/SQSTM1(p62)、Beclin-1、溶酶體相關(guān)膜蛋白LAMP1、LAMP2蛋白表達水平,探究自噬流在高糖高脂對心肌細胞凋亡中的影響。結(jié)果:1.高糖高脂處理可顯著誘導(dǎo)H9c2心肌細胞肥大,呈濃度和時間依賴性。與對照組相比,HGHL(500μM)處理36 h時細胞表面積顯著增加(P0.05),同時心肌肥大標記基因ANP、α-SKA表達顯著增加(P0.01)。2.高糖高脂處理可損傷心肌細胞,導(dǎo)致細胞損傷程度、細胞凋亡率均明顯增加,呈濃度和時間依賴性,HGHL(500μM)干預(yù)36 h時細胞凋亡率約50%(P0.05)。3.自噬流在高糖高脂誘導(dǎo)心肌細胞凋亡中發(fā)揮重要作用,與對照組相比,高糖高脂干預(yù)組(HGHL組)cleaved csapase-3蛋白表達水平增加(P0.05),而使用自噬抑制劑氯喹預(yù)處理心肌細胞1 h后,與對照組及高糖高脂組(HGHL組)相比,氯喹預(yù)處理組(CQ+HGHL組)細胞凋亡率顯著增加(P0.05);自噬流水平在高糖高脂干預(yù)下發(fā)生顯著變化,與對照組相比,高糖高脂干預(yù)組(500μM組)LC3 Ⅱ蛋白表達顯著增加(P0.01),Beclin-1、LAMP1、LAMP2蛋白表達顯著下降(P0.05),而p62蛋白水平顯著升高(P0.01)。結(jié)論:1.高糖高脂誘導(dǎo)H9c2心肌細胞肥大具有一定時間及濃度依賴性,提示高糖高脂在誘導(dǎo)糖尿病性心肌病心肌損傷及發(fā)病和疾病進展過程中扮演不容忽視的角色;2.高糖高脂通過誘導(dǎo)H9c2心肌細胞凋亡進而促進心肌細胞損傷,提示高糖高脂對心肌損傷的影響與心肌凋亡有關(guān);3.高糖高脂通過抑制H9c2心肌細胞自噬流,進而導(dǎo)致心肌細胞自噬體異常堆積,促進心肌細胞凋亡,提示在糖尿病心肌病發(fā)病過程中凋亡與自噬流障礙導(dǎo)致的自噬體異常堆積相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R542.2

【參考文獻】

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本文編號：2304172