【摘要】：目的:觀察雙聯(lián)抗血小板療法(double antiplatelet therapy,DAPT)治療過(guò)程中的血小板聚集率,采用重組尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)亞型體外研究替格瑞洛對(duì)UGT酶的抑制情況,推測(cè)替格瑞洛與阿司匹林潛在的藥物相互作用,對(duì)替格瑞洛出血發(fā)生率增加的原因進(jìn)行初步探索。方法:1.選取2015年6月-2016年2月在天津市人民醫(yī)院心血管內(nèi)科行冠狀動(dòng)脈介入治療(percutaneous coronary intervention,PCI),術(shù)后規(guī)律服用雙聯(lián)抗血小板藥物治療的患者55例,根據(jù)服用P2Y12受體抑制劑的不同分為替格瑞洛組和氯吡格雷組,比較兩組患者的光比濁(light transmission aggregometry,LTA)法檢測(cè)的血小板聚集率。2.選擇參與藥物代謝的常見(jiàn)UGT酶亞型,即UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15和UGT2B17,以4-甲基傘形酮(4-methyl umbeliferone,4-MU)為非特異性底物,體外建立葡萄糖醛酸結(jié)合反應(yīng)的孵育體系,替格瑞洛作為抑制劑加入到孵育體系中共同孵育。以7-OH香豆素為內(nèi)標(biāo),采用超高效液相色譜(ultra performance liquid chromatography,UPLC)檢測(cè)4-MU的葡萄糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸(4-methylumbelliferone-β-D-glucuronide,4-MUG)。首先,進(jìn)行抑制程度的初步測(cè)定,按照以前的研究選擇酶濃度、底物濃度及反應(yīng)時(shí)間,測(cè)定有抑制劑和無(wú)抑制劑時(shí)的4-MUG生成量,并計(jì)算殘余率及抑制率。然后,選取多個(gè)濃度的抑制劑進(jìn)行反應(yīng),觀察替格瑞洛對(duì)UGT酶的抑制程度與替格瑞洛濃度的關(guān)系,計(jì)算半抑制濃度(half inhibition concentration,IC50)值。根據(jù)IC50值選取四個(gè)抑制劑濃度及空白對(duì)照,并選取四個(gè)4-MU濃度進(jìn)行反應(yīng),通過(guò)雙倒數(shù)作圖法,獲得抑制類型,采用雙倒數(shù)作圖的斜率對(duì)替格瑞洛濃度進(jìn)行第二次作圖,計(jì)算出抑制動(dòng)力學(xué)參數(shù)(inhibition kinetic parameters,Ki)。根據(jù)替格瑞洛體內(nèi)濃度[I]與Ki的比值推測(cè)在體內(nèi)替格瑞洛抑制UGT酶及發(fā)生藥物相互作用的可能性。最后,通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行分子對(duì)接,解釋替格瑞洛抑制UGT酶的機(jī)制。結(jié)果:1.替格瑞洛組的花生四烯酸(arachidonic acid,AA)誘導(dǎo)血小板聚集率及二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)誘導(dǎo)的血小板聚集率均比氯吡格雷組低(均P0.05)。2.100μM的替格瑞洛對(duì)UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15和UGT2B17的抑制率分別為74.98%、84.01%、100%、84.66%、100%、98.03%、93.58%、100%、100%、99.99%、99.32%。3.替格瑞洛對(duì)UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15及UGT2B17的IC50值分別為:0.043、8.256、12.86、2.472、39.34、0.2994、6.942、36.55、2.118、12.30及34.40μM。4.替格瑞洛對(duì)UGT1A1、1A3、1A9為競(jìng)爭(zhēng)性抑制,對(duì)UGT1A6、1A7、1A10、2B4、2B7、2B15為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。5.替格瑞洛對(duì)UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A9、1A10、2B4、2B7、2B15的Ki值分別為:2.05、4.05、1.59、40.32、0.0208、8.63、8.08、2.05及4.80μM。6.根據(jù)服用180mg替格瑞洛時(shí),體內(nèi)最高血藥濃度為2.34μM,計(jì)算UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A9、1A10、2B4、2B7、2B15的[I]/Ki分別為:1.14、0.58、1.47、0.058、112.5、0.27、0.29、1.14、0.48。[I]/Ki0.1的為UGT1A7,意義為低度可能性抑制;0.1[I]/Ki1的為UGT1A3、1A10、2B4、2B15,意義為中度可能性抑制;[I]/Ki1的為UGT1A1、1A6、1A9、2B7,意義為高度可能性抑制。7.分子對(duì)接顯示4-MU及替格瑞洛與UGT1A1的結(jié)合自由能分別為-5.68及-9.45 kcal/mol,4-MU及替格瑞洛與UGT1A3的結(jié)合自由能分別為-5.65及-8.63kcal/mol,4-MU及替格瑞洛與UGT1A6的結(jié)合自由能分別為-5.92及-7.41kcal/mol,4-MU及替格瑞洛與UGT1A7的結(jié)合自由能分別為-6.04及-8.36kcal/mol,4-MU及替格瑞洛與UGT1A9的結(jié)合自由能分別為-6.40及-7.54kcal/mol。結(jié)論:1.與氯吡格雷聯(lián)合阿司匹林相比,替格瑞洛聯(lián)合阿司匹林的AA和ADP誘導(dǎo)血小板聚集率均較低。2.替格瑞洛可以抑制UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A8、1A9、1A10、2B4、2B7、2B15及2B17的活性,對(duì)UGT1A1、1A3、1A9為競(jìng)爭(zhēng)性抑制,對(duì)UGT1A6、1A7、1A10、2B4、2B7、2B15為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。3.替格瑞洛在體內(nèi)對(duì)UGT1A1、1A6、1A9、2B7為高度可能性抑制,對(duì)UGT1A3、1A10、2B4、2B15為中度可能性抑制,對(duì)UGT1A7為低度可能性抑制。4.替格瑞洛對(duì)UGT酶活性的抑制,推測(cè)替格瑞洛可能會(huì)抑制阿司匹林代謝產(chǎn)物水楊酸的代謝。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 Ruo-Xi Gu;Xiao-Zeng Wang;Jing Li;Jie Deng;Xing-Xing Li;Jiao Wang;;Effects of omeprazole or pantoprazole on platelet function in non-ST-segment elevation acute coronary syndrome patients receiving clopidogrel[J];Military Medical Research;2017年02期

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本文編號(hào)：2270827