【摘要】：蛋白酶體在腹主動(dòng)脈瘤發(fā)病中的作用及分子病理機(jī)制研究研究背景及目的：腹主動(dòng)脈瘤(AAA)是老齡化社會(huì)的常見(jiàn)病,并且隨著人群平均年齡日趨增加,AAA的發(fā)病率漸呈增高趨勢(shì)。AAA危害巨大,一旦破裂致大出血,則死亡率達(dá)60～80%,造成生命及財(cái)產(chǎn)的巨大損失。炎癥(淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)活化)、膠原及彈力纖維的破壞、平滑肌細(xì)胞(SMC)數(shù)量質(zhì)量、和動(dòng)脈壁新生血管的形成等均是AAA發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。但是調(diào)節(jié)動(dòng)脈壁炎癥及SMC功能的內(nèi)在分子機(jī)制仍不完全清楚。近年來(lái),許多研究提示,泛素蛋白酶體系統(tǒng),特別是蛋白酶體的活性變化在細(xì)胞炎癥因子的釋放及細(xì)胞凋亡等現(xiàn)象中起著關(guān)鍵作用。蛋白酶體是負(fù)責(zé)降解細(xì)胞內(nèi)靶蛋白的主要“構(gòu)件”,一種能夠水解多聚泛素化蛋白的功能復(fù)合體。蛋白酶體活性變化多能夠參與到調(diào)控炎癥反應(yīng)、影響SMC的凋亡等機(jī)制中。蛋白酶體活性的專門抑制劑硼替佐米(Bortezomib, BTZ)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體活性影響炎癥細(xì)胞及SMC的功能變化,但是蛋白酶體在調(diào)節(jié)AAA形成相關(guān)的病理機(jī)制的作用,尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,本研究擬在人及動(dòng)物模型的主動(dòng)脈組織中檢測(cè)動(dòng)脈壁內(nèi)蛋白酶體活性變化,通過(guò)BTZ抑制主動(dòng)脈內(nèi)蛋白酶體活性,探討蛋白酶體在AAA形成過(guò)程中參與炎癥及SMC表型變化的相關(guān)作用及分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法：(1)收集人AAA病變及對(duì)照動(dòng)脈組織；(2)通過(guò)對(duì)雄性缺陷小鼠(ApoE-/-)皮下埋植血管緊張素Ⅱ (AngⅡ)緩釋泵(1,000 ng/min/kg)的方法,復(fù)制動(dòng)物AAA模型；藥物處理則進(jìn)行腹腔注射BTZ (50μg/kg,每周2次),因此小鼠分成四組：Control, BTZ, AngⅡ, AngⅡ+BTZ。采用免疫染色、PCR分析的方法分析動(dòng)脈組織內(nèi)蛋白酶體各亞基表達(dá)水平(包括β1、β2、β5、βli、β2i、β5i),通過(guò)試劑盒測(cè)定蛋白酶體各蛋白酶活性(包括半胱天冬氨酸酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶3種酶活性)；通過(guò)測(cè)量血管超聲、鼠尾監(jiān)測(cè)血壓及大體解剖觀察各組小鼠體內(nèi)動(dòng)脈大體形態(tài)及血壓變化；通過(guò)HE染色、VVG染色和免疫組織化學(xué)染色法觀察各組小鼠組織結(jié)構(gòu)的變化和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(包括巨噬細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞)；通過(guò)PCR分析、免疫組織染色分析各組小鼠動(dòng)脈壁內(nèi)炎癥因子表達(dá)水平(包括TNF-α, IFN-γ,IL-4,IL-6和MCP-1)；通過(guò)免疫熒光染色aSMA與TUNEL或pCNA共染色確定主動(dòng)脈壁內(nèi)SMC的凋亡或增值狀態(tài),通過(guò)PCR分析、免疫組織染色和Westemblot方法分析各組小鼠動(dòng)脈壁內(nèi)SMC表型標(biāo)識(shí)物表達(dá)水平及心肌素(myocardin)明確調(diào)控SMC表型的分子機(jī)制。結(jié)果：1.人AAA標(biāo)本中蛋白酶體亞基表達(dá)水平及活性均增加；2.Ang II刺激誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠建立成功誘導(dǎo)建立AAA動(dòng)物模型,檢測(cè)動(dòng)脈內(nèi)蛋白酶體表達(dá)及活性情況,隨著疾病進(jìn)展,蛋白酶體亞基表達(dá)水平及活性均增；3.BTZ抑制蛋白酶體活性后顯著抑制AngⅡ誘導(dǎo)的小鼠AAA形成(發(fā)生率及直徑)；4.蛋白酶體抑制后抑制AngⅡ誘導(dǎo)的①動(dòng)脈壁內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)及活性；②血管重塑及彈力纖維降解；③血管壁內(nèi)炎癥；5.蛋白酶體抑制后抑制AngⅡ誘導(dǎo)的血管壁內(nèi)SMC增殖但并不影響其凋亡；6.蛋白酶體抑制后逆轉(zhuǎn)AngⅡ誘導(dǎo)動(dòng)脈壁內(nèi)SMC表型轉(zhuǎn)化。結(jié)論：我們證明了蛋白酶體的活化在促進(jìn)體內(nèi)AAA形成了關(guān)鍵的作用。其發(fā)揮作用與血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),MMP活性增加,及SMC表型轉(zhuǎn)化相關(guān)。低劑量的蛋白酶體抑制劑BTZ有效抑制這些改變。這些發(fā)現(xiàn),明確了蛋白酶體參與AAA發(fā)生的病理生理學(xué)機(jī)制,也使得BTZ是可用于治療AAA形成一個(gè)新的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background and purpose of the research and research on the role and molecular pathological mechanism in the pathogenesis of abdominal aortic aneurysm (AAA): abdominal aortic aneurysm (AAA) is a common disease in aging society, and the incidence of AAA is increasing as the average age of the population increases. The AAA hazard is huge, and the death rate can reach 60-80%, resulting in great loss of life and property, once the major bleeding is broken. The destruction of inflammation (infiltration and activation of lymphocytes and macrophages), the destruction of collagen and elastic fibers, the mass of smooth muscle cells (SMC), and the formation of neovascularization in arterial wall are the key links of AAA. However, the intrinsic molecular mechanism of arterial wall inflammation and SMC function is still unclear. In recent years, many studies have suggested that the activity of ubiquitin-proteolysis system, especially the proteasomes, plays a key role in the release of cell inflammatory factors and apoptosis. Proteasomes are the main 鈥淐omponent鈥，

本文編號(hào)：2259428