【摘要】：背景:心血管疾病是目前影響人類健康最重大的慢性疾病,據(jù)統(tǒng)計,全球近50%的人死于心血管疾病及其嚴重并發(fā)癥,我國心血管疾病患者人數(shù)已超過2.9億,心血管疾病已超越癌癥成為影響人類健康的第一大死因。年齡、高血壓、高血脂、糖尿病、吸煙被認為是AS形成的傳統(tǒng)的5大危險因素,然在因冠心病死亡的患者中,約半數(shù)的人不能歸咎于傳統(tǒng)的危險因素,這提示更多發(fā)病機制的存在。20世紀80年代Sullivan首次提出鐵與心血管疾病的關系,30多年來關于鐵超載與心血管疾病的關系的研究從未間斷,目前鐵超載與動脈粥樣硬化關系仍然飽受爭議,但是大量實驗和流行病學證據(jù)支持鐵過量與動脈粥樣硬化病變程度呈正相關。鐵作為催化劑,通過Fenton及Haber Weiss反應產(chǎn)生大量活性氧,體內(nèi)活性氧過過表達可造成生物大分子氧化損傷以細胞內(nèi)的氧化還原環(huán)境的改變,從而影響氧化還原敏感的細胞信號轉(zhuǎn)導途徑和轉(zhuǎn)錄因子,最終導致動脈粥樣硬化產(chǎn)生。目的及意義:實驗通過建立鐵超載模型,測定鐵超載時沙鼠體內(nèi)ROS表達及腹主動脈粥樣硬化病變情況,評估鐵超載致氧化應激表達與動脈粥樣硬化的關系,為臨床上預防和治療動脈粥樣硬化提供新的視角。方法:選取健康不同月齡雌雄性長爪沙鼠30只(6月齡10只、30月齡20只),按照月齡不同平均分為3組:低齡對照組—6月齡沙鼠10只;高齡對照組—30月齡沙鼠10只;實驗組,也稱鐵負荷組(高齡+鐵負荷10w)—30月齡沙鼠10只。實驗組沙鼠規(guī)律給予皮下注射右旋糖酐鐵10周,劑量為100mg/kg,頻率為5天/次。沙鼠稱重,全麻下腹主動脈取血,處死大鼠后取心臟及腹主動脈組織(長約3-5cm),稱取心臟重量,全血經(jīng)高速離心后取上清液,所有樣本均需超低溫保存(-80℃)。實驗中測定了血清鐵含量、總鐵結(jié)合力的值,并通過心肌普魯士藍染色證實鐵在沙鼠組織中的沉積,鐵超載模型的建立;通過測定了組織中MDA含量、SOD活性及沙鼠腹主動脈血管超氧陰離子水平,驗證鐵超載時氧化應激表達;通過沙鼠腹主動脈組織油紅“O”脂肪染色及鈣鹽沉積測定,評估不同組沙鼠腹主動脈粥樣硬化病變程度。結(jié)果:1、實驗組沙鼠的SI及TIBC較高齡對照組分別升高了358%、110%,較低齡對照組分別升高了374%、126%,P0.01,差別有統(tǒng)計學意義;高齡對照組與低齡對照組比較,SI及TIBC質(zhì)量濃度間無明顯差異,P0.05,差別無統(tǒng)計學意義。2、三組沙鼠心肌組織中MDA及SOD測定結(jié)果示:高齡對照組與低齡對照組比較MDA含量升高了28.06%,SOD活性下降了17.44%,而實驗組與高齡對照組比較,MDA含量升高了90.45%,SOD活性下降了41.25%,P0.05,差異均有統(tǒng)計學意義3、沙鼠心肌組織Prussian染色顯示慢性鐵超載組沙鼠心肌細胞質(zhì)中可見大量被染成深藍色的鐵沉積顆粒,而對照組無明顯鐵沉積顆粒。分析結(jié)果顯示:實驗組沙鼠心肌細胞間質(zhì)中鐵沉積面積與對照組比增加了4100%,P0.01,差異有統(tǒng)計學意義。4、氧化熒光探針HE可測定沙鼠腹主動脈氧化應激表達情況,結(jié)果表現(xiàn)為不同強度的紅色熒光,熒光強度與超氧陰離子O2 表達呈正相關。結(jié)果顯示:高齡組沙鼠動脈紅色熒光的積分光密度較低齡組增強,說明高齡組沙鼠動脈組織中超氧陰離子O2 表達水平增加;而鐵負荷組動脈組熒光積分光密度最強,超氧陰離子O2 表達水平最高。兩組差異明顯,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5、三組沙鼠腹主動脈經(jīng)“油紅0染色”后動脈壁染色結(jié)果顯示如下,結(jié)果顯示低齡組被染色組織面積小、顏色淺,不明顯;高齡組較低齡組染色面積增大,顏色加深;而鐵負荷組被染色面積最大,顏色最深。利用Image-pro plus 6.0軟件進行分析及經(jīng)統(tǒng)計分析后顯示不同組沙鼠被深染組織陽性面積率差異顯著,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。6、Von Koss鈣鹽染色結(jié)果示三組沙鼠動脈管壁均有不同程度被染成棕黑色的鈣鹽沉積顆粒,高齡組鈣鹽沉積較低齡組增加,而實驗組較高齡組鈣沉積更明顯。分析結(jié)果顯示:高齡對照組鈣含量較低齡對照組增加了71.7%,而實驗組與高齡對照組比較鈣鹽沉積含量增加了105%,差異顯著,有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結(jié)論:1、鐵負荷增加時,過量的鐵可在沙鼠組織內(nèi)大量鐵沉積。2、鐵超載時,過量的鐵使沙鼠體內(nèi)氧化應激增加,ROS表達增加。3、年齡是動脈粥樣硬化斑塊形成的危險因素,而鐵負荷增加能使小鼠腹主動脈粥樣硬化病變程度進一步加重。4、慢性鐵超載致動脈粥樣硬化病變程度加重機制可能與鐵超載致氧化應激表達增加密切相關。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R54

【參考文獻】

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1 張楚;詹宇紅;;高鐵蛋白血癥與早期糖脂代謝異常的關系[J];醫(yī)學研究雜志;2008年02期

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本文編號：2254795