【摘要】：目的心房顫動(dòng)(atrial fibrillation,AF)是臨床上最常見的快速型心律失常之一,心房顫動(dòng)的發(fā)生發(fā)展機(jī)制一直是國(guó)內(nèi)外心血管領(lǐng)域的研究重點(diǎn)、熱點(diǎn),已有研究證明心肌纖維化與micro RNAs之間存在一定的相關(guān)關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)旨在檢測(cè)micro RNA-21及其調(diào)控蛋白Smad 7在大鼠心房顫動(dòng)模型中的表達(dá)變化,micro RNA-21 mimics和micro RNA-21 inhibitors對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響,探究micro RNA-21在心房顫動(dòng)心肌纖維化過程中的分子機(jī)制。方法利用皮下注射異丙腎上腺素(ISO)制備大鼠心房顫動(dòng)心肌纖維化模型。隨機(jī)將60只SD雄性大鼠均分為空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,每組30只,其中實(shí)驗(yàn)組給予皮下注射ISO 5mg/kg·d、空白對(duì)照組給予等劑量生理鹽水皮下注射,連續(xù)注射14天后處死大鼠,取下心臟,分別獲取各組心肌組織標(biāo)本。用Lipofectamine?2000Reagent向大鼠心肌成纖維細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染micro RNA-21 mimics和inhibitors及其陰性對(duì)照,48~72 h后檢測(cè)各指標(biāo)。用HE和Masson染色法測(cè)算心肌組織中的心肌纖維化程度和膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF);q RT-PCR檢測(cè)各組micro RNA-21,TGF-β1和Smad 7的m RNA水平;Western blot法測(cè)定各組TGF-β1和Smad 7的表達(dá);MTT法檢測(cè)micro RNA-21 mimics和inhibitors對(duì)心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響。結(jié)果HE染色和Masson染色顯示實(shí)驗(yàn)組中大鼠心肌組織間質(zhì)中出現(xiàn)了明顯的膠原纖維增生,計(jì)算心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)較空白對(duì)照組明顯增加;相對(duì)于正常組,大鼠心房顫動(dòng)模型實(shí)驗(yàn)組心房組織中micro RNA-21和TGF-β1表達(dá)上調(diào),而Smad 7表達(dá)下降。轉(zhuǎn)染micro RNA-21 mimics的大鼠心肌成纖維細(xì)胞中,micro RNA-21高表達(dá),TGF-β1表達(dá)上升,Smad 7表達(dá)下降;轉(zhuǎn)染micro RNA-21mimics的心肌成纖維細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng);轉(zhuǎn)染micro RNA-21 inhibitors的大鼠心肌成纖維細(xì)胞中,得到完全相反的結(jié)果。結(jié)論皮下注射ISO能誘導(dǎo)大鼠心房顫動(dòng)并使大鼠心肌發(fā)生明顯的纖維化,心房組織中micro RNA-21的高表達(dá)可通過TGF-β1/Smad信號(hào)通路降低Smad 7的表達(dá),從而促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)生。micro RNA-21 mimics可明顯增強(qiáng)心肌成纖維細(xì)胞增殖活性,micro RNA-21 inhibitors則明顯抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖活性。進(jìn)而表明micro RNA-21是心房顫動(dòng)發(fā)生機(jī)制中的一個(gè)重要的分子信號(hào),micro RNA-21是心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的潛在靶向分子,有利于為干預(yù)和預(yù)防心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展提供新思路。
[Abstract]:Objective Atrial fibrillation (atrial fibrillation AF) is one of the most common tachyarrhythmias in clinic. Studies have shown that there is a correlation between myocardial fibrosis and micro RNAs. The purpose of this study was to investigate the expression of micro RNA-21 and its regulatory protein Smad 7 in rat atrial fibrillation model. The effects of micro RNA-21 mimics and micro RNA-21 inhibitors on the activation and proliferation of rat cardiac fibroblasts were investigated. To explore the molecular mechanism of micro RNA-21 in the process of atrial fibrillation myocardial fibrosis. Methods Myocardial fibrosis model of rat atrial fibrillation was established by subcutaneous injection of isoproterenol (ISO). Sixty Sprague-Dawley male rats were randomly divided into blank control group (n = 30) and experimental group (n = 30). The experimental group was subcutaneously injected with ISO 5mg/kg d, and the blank control group was subcutaneously injected with the same dose of normal saline. After 14 days of continuous injection, the rats were killed and the heart was removed. Myocardial tissue specimens were obtained from each group. After transient transfection of micro RNA-21 mimics and inhibitors into rat myocardial fibroblasts by Lipofectamine?2000Reagent for 4872 h, the indexes were detected. Myocardial fibrosis degree and collagen volume fraction (CVF) Q RT-PCR) in myocardial tissue were measured by HE and Masson staining. Micro RNA-21 TGF- 尾 1 and Smad 7 m RNA levels were detected by micro RNA-21 TGF- 尾 1 and Smad 7. The expression of TGF- 尾 1 and Smad 7 in each group was detected by Western blot. Effects of myofibroblasts on activation and proliferation. Results HE staining and Masson staining showed that collagen fiber proliferation appeared in the interstitial tissue of rats in the experimental group. The collagen volume fraction (CVF) of myocardial interstitial tissue in experimental group was significantly higher than that in control group, and was significantly higher than that in normal group. The expression of micro RNA-21 and TGF- 尾 1 was up-regulated and the expression of Smad 7 was decreased in atrial fibrillation group. The expression of TGF- 尾 1 in rat myocardial fibroblasts transfected with micro RNA-21 mimics was increased and the expression of TGF- 尾 1 was increased. The proliferation activity of myocardial fibroblasts transfected with micro RNA-21mimics was significantly increased. In rat myocardial fibroblasts transfected with micro RNA-21 inhibitors, the expression of TGF- 尾 1 was increased, and the expression of TGF- 尾 1 was increased in rat myocardial fibroblasts transfected with micro RNA-21 inhibitors. Get the opposite result. Conclusion subcutaneous injection of ISO can induce atrial fibrillation and induce myocardial fibrosis in rats. The high expression of micro RNA-21 in atrial tissue can reduce the expression of Smad 7 through TGF- 尾 1/Smad signaling pathway. Micro RNA-21 mimics can obviously enhance the proliferation of myocardial fibroblasts. Micro RNA-21 inhibitors can obviously inhibit the proliferation of myocardial fibroblasts. It is suggested that micro RNA-21 is an important molecular signal in the pathogenesis of atrial fibrillation. Micro RNA-21 is a potential target molecule for the activation and proliferation of cardiac fibroblasts, which is helpful to provide new ideas for intervention and prevention of the occurrence and development of myocardial fibrosis.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R54

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本文編號(hào)：2171663