【摘要】：目的:在熒光探針的基礎(chǔ)上建立一種簡(jiǎn)易的方法來(lái)檢測(cè)血液中的硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)。方法:將熒光探針包被到96孔板上,冷藏待用。用飽和硫酸銨沉淀血漿或血清中的蛋白,離心后所得的上清液分別加到含包被探針和不含包被探針的微孔中,37℃避光孵育2 h,然后使用分光光度計(jì)(波長(zhǎng)λEx/λEm340/445 nm)讀取微孔的熒光值,計(jì)算包被有探針和相應(yīng)無(wú)探針微孔的熒光差值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度計(jì)算出血液中H2S的濃度。結(jié)果:靈敏度和特異性測(cè)試表明,此方法檢測(cè)靈敏度下限可以達(dá)到0.3μmol/L,血液中其他成分甚至其他含硫活性成分和含硫氨基酸等對(duì)此方法影響甚微。應(yīng)用此方法檢測(cè)188名健康成年志愿者的血清H2S濃度[(12.1±3.5)μmol/L,95%CI:4.6~19.8μmol/L],所得結(jié)果呈正態(tài)分布(單樣本K-S檢驗(yàn),P0.1)。對(duì)30名高血壓患者和22名相匹配的健康志愿者血清H2S濃度檢測(cè)表明,前者H2S濃度低于后者[(3.52±1.49)μmol/L vs.(10.23±2.76)μmol/L],差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(配對(duì)樣本t檢驗(yàn),t=9.937,P0.001)。檢測(cè)雄性Wistar大鼠血清[(19.66±2.32)μmol/L]和血漿[(18.67±2.07)μmol/L]以及動(dòng)脈血[(19.34±0.51)μmol/L]和靜脈血[(18.99±0.50)μmol/L]中的H2S濃度,結(jié)果表明雄性Wistar大鼠血清和血漿以及動(dòng)脈血和靜脈血兩者差異都沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(重復(fù)測(cè)量的方差分析,P=0.38)。樣品的重復(fù)性檢測(cè)穩(wěn)定性較好(兩因素方差分析,P0.05)。結(jié)論:此方法對(duì)檢測(cè)血液中的H2S具有簡(jiǎn)單、高靈敏度、特異性和可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),出結(jié)果快,可適用于大樣本的高通量檢測(cè),滿足實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)研究及臨床一次性大樣本H2S濃度檢測(cè)的需求。
[Abstract]:Objective: to establish a simple method for the detection of hydrogen sulfide H2S in blood on the basis of fluorescence probe. Methods: the fluorescent probe was coated on 96 hole plate and stored in cold storage. Precipitation of proteins in plasma or serum with saturated ammonium sulfate, After centrifugation, the supernatant was added to the micropore containing and without the coated probe for 2 h at 37 鈩，

本文編號(hào)：2163129