【摘要】：目的:建立分泌抗ADAMTS13單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,制備針對ADAMTS13不同結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體。方法:利用真核表達(dá)的重組血漿金屬蛋白酶ADAMTS13截短型蛋白(ADAMTS13-T7)純品免疫BALB/c小鼠。用ELISA方法測定免疫小鼠與ADAMTS13-T7蛋白的抗血清效價。取小鼠脾臟,制成單細(xì)胞懸液與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞以10∶1的比例混合,進(jìn)行細(xì)胞的融合,并將雜交瘤細(xì)胞稀釋培養(yǎng)。2周后選生長良好的克隆孔檢測,陽性克隆孔擴(kuò)大培養(yǎng)并再次檢測。結(jié)果:獲得真核表達(dá)截短型血管性血友病因子裂解蛋白酶ADAMTS13-T7蛋白純品。利用真核表達(dá)的截短型ADAMTS13-T7蛋白免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA檢測免疫后抗血清效價約為1∶20 000。利用雜交瘤技術(shù)通過融合,獲得多株分泌抗重組ADAM TS13抗體的雜交瘤單克隆細(xì)胞株。將其中的30株轉(zhuǎn)入液氮中凍存,以備進(jìn)一步分選及功能研究。結(jié)論:融合獲得多株分泌抗重組ADAMTS13抗體的雜交瘤單克隆細(xì)胞株,為進(jìn)一步篩選出具有一定功能活性的單克隆抗體及研究ADAMTS13結(jié)構(gòu)和功能提供更多的有力工具。
[Abstract]:Aim: to establish hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies against ADAMTS13 and to prepare monoclonal antibodies against different domains of ADAMTS13. Methods: BALB/c mice were immunized with recombinant plasma metalloproteinase ADAMTS13 truncated protein (ADAMTS13-T7). The antiserum titers of immunized mice and ADAMTS13-T7 protein were determined by ELISA method. The spleen of mice was taken and the monocyte suspension was mixed with SP2/0 myeloma cells at 10:1 to fuse the cells. The hybridoma cells were diluted and cultured for 2 weeks. The positive clones were expanded and tested again. Results: eukaryotic expression of truncated von Willebrand factor lysase ADAMTS13-T7 protein was obtained. The antiserum titer of BALB/c female mice immunized with truncated ADAMTS13-T7 protein was about 1:20 000 by Elisa. A number of hybridoma monoclonal cell lines secreting anti-recombinant ADAM TS13 antibody were obtained by fusion with hybridoma technique. 30 of them were frozen in liquid nitrogen for further sorting and functional study. Conclusion: a number of hybridoma cell lines secreting anti-recombinant ADAMTS13 antibodies were obtained by fusion, which provide more powerful tools for further screening monoclonal antibodies with certain functional activities and for studying the structure and function of ADAMTS13.
【作者單位】： 蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液科;蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院江蘇省血液研究所衛(wèi)生部血栓與止血重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81500107) 江蘇省基礎(chǔ)研究計(jì)劃(自然科學(xué)基金)-青年基金項(xiàng)目(BK20140285)
【分類號】：R55

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本文編號：2153132