【摘要】：目的:構(gòu)建并鑒定大鼠CD47 RNAi腺病毒載體,制備具有一定滴度含CD47 RNAi基因的重組腺病毒,為后期研究CD47 RNAi在慢性心力衰竭中的作用及其分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法:根據(jù)大鼠CD47基因序列,設(shè)計(jì)并合成3對CD47基因的特異性小干擾RNA(siRNA),合成互補(bǔ)的寡核苷酸鏈,構(gòu)建大鼠CD47 RNAi腺病毒載體,并對目的基因進(jìn)行鑒定。通過脂質(zhì)體2000介導(dǎo)CD47 RNAi腺病毒載體和包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染人HEK293細(xì)胞,以得到重組腺病毒,對其進(jìn)行擴(kuò)增、純化及滴度測定。結(jié)果:成功構(gòu)建了大鼠CD47 RNAi腺病毒載體。經(jīng)重組腺病毒擴(kuò)增與純化,測得最終獲得的重組腺病毒滴度為1×10~(11) PFU/ml。結(jié)論:成功構(gòu)建獲得了具有一定滴度含CD47 RNAi基因的重組腺病毒,為后期順利開展有關(guān)CD47 RNAi在大鼠慢性心力衰竭中的作用及分子機(jī)制研究提供了研究基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct and identify the adenovirus vector of rat CD47 RNAi and to prepare recombinant adenovirus containing CD47 RNAi gene titer in order to study the role of CD47 RNAi in chronic heart failure (CHF) and its molecular mechanism. Methods: according to the sequence of rat CD47 gene, three pairs of CD47 gene specific small interfering RNA (siRNA), were designed and synthesized to synthesize complementary oligonucleotide chains. The adenovirus vector of rat CD47 RNAi was constructed, and the target gene was identified. CD47 RNAi adenovirus vector and packaging plasmid were co-transfected into human HEK293 cells by liposome 2000 to obtain recombinant adenovirus. The recombinant adenovirus was amplified, purified and titer determined. Results: the adenovirus vector of rat CD47 RNAi was successfully constructed. After amplification and purification of recombinant adenovirus, the titer of recombinant adenovirus was 1 脳 10 ~ (11) PFU / ml. Conclusion: the recombinant adenovirus with certain titer of CD47 RNAi gene was successfully constructed, which provides a basis for the study of the role and molecular mechanism of CD47 RNAi in chronic heart failure in rats.
【作者單位】： 三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院心內(nèi)科三峽大學(xué)心血管病研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No:81470387)
【分類號(hào)】：R541.6

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本文編號(hào)：2150547