本文選題：糖基化終末產物 + 胰高血糖素樣肽-1�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：背景全球2型糖尿病人群日益增多,已成為世界范圍性的健康問題和經濟負擔。糖尿病對人類的危害主要在于各種并發(fā)癥帶來的傷殘,而以大血管和微血管病變?yōu)橹鞯穆圆l(fā)癥帶來的危害最大。在糖尿病血管病變發(fā)展過程中,糖基化終末產物(advanced glycation end products, AGEs)的加速形成及其在血管組織中的大量聚集發(fā)揮著重要作用. AGEs不僅通過與蛋白質發(fā)生交聯,改變蛋白質結構和功能,影響脂質代謝并修飾核酸直接影響細胞和組織的功能,而且也可與組織細胞表面AGEs的特異性受體結合,激動細胞內信號轉導通路,導致血管疾病發(fā)生、發(fā)展。血管內皮細胞是血管腔面的一層半選擇性通透屏障,血液和組織中物質交換必須通過血管內皮細胞層選擇性的進行,因此維持其形態(tài)完整和功能正常至關重要。AGEs蓄積、氧化應激、炎癥反應等因素導致的血管內皮細胞損傷是糖尿病大血管病變的始動環(huán)節(jié),隨之而來的是血管內皮屏障功能受損,表現為內皮細胞收縮性增加和細胞間連接結構破壞,內皮通透性增加,其中細胞收縮主要和肌球蛋白輕鏈(myosin light chain, MLC)磷酸化介導的細胞骨架重排密切相關。胰高血糖素樣肽-1(glucagon like peptide-1, GLP-1)是腸道L細胞分泌的一種多肽類激素,除調節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)外,在心血管系統(tǒng)中發(fā)揮著潛在的生物學功能。研究報道GLP-1可以通過抑制氧化應激、炎癥反應等從而對血管內皮舒張功能發(fā)揮保護作用,然而GLP-1對糖尿病血管內皮屏障功能是否產生影響,機制如何,目前少見報道。目的在整體水平研究GLP-1對2型糖尿病大鼠胸主動脈內膜通透性的影響,以及動脈壁MLC及上游RAGE/Rho/ROCK信號通路是否為GLP-1作用靶點。在細胞水平探明GLP-1對AGEs孵育的血管內皮細胞骨架結構的影響及其與MLC磷酸化相關的分子機制。方法1.采用高脂飲食結合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射復制2型糖尿病大鼠模型,給予西格列汀(10mg/kg/d和30mg/kg/d)干預12周。酶法、放免法和Elisa法檢測血清學指標,電鏡和HE染色進行主動脈形態(tài)學觀察,離體動脈環(huán)實驗檢測動脈內皮舒張功能,大分子熒光染料滲透法檢測動脈內膜通透性,免疫組織化學法和Western blot法檢測GLP-1R、RAGE、ROCK、MYPT、MLCK和MLC蛋白的表達和磷酸化水平變化。2.體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC),采用GLP-1、GLP-1受體拮抗劑Exendin(9-39)、RAGE阻斷性抗體Anti-RAGE IgG、腺苷酸環(huán)化酶激活劑Forskolin、cAMP抑制劑SQ22536、PKA抑制劑H89、 Rho/ROCK激動劑LPA和抑制劑Fasudil分別或組合干預,采用熒光染色激光共聚焦觀察肌動蛋白(F-actin)分布變化,通過G--LA試劑盒檢測RhoA活性,Western blot法和免疫熒光法檢測GLP-1R, RAGE、PKA、ROCK、MYPT和MLC蛋白的表達和磷酸化水平變化以探討GLP-1是否通過GLP-1受體途徑激動cAMP/PKA信號通路從而抑制Rho/ROCK介導的MLC磷酸化,從而對內皮細胞骨架排列產生影響。結果：1.成功復制2型糖尿病大鼠模型,模型鼠血清空腹血糖、血脂、胰島素抵抗水平、內皮素顯著增加,體重、血漿GLP-1和血清一氧化氮水平顯著降低,不同劑量西格列汀干預12周后空腹血糖、胰島素抵抗水平和內皮素水平不同程度降低,體重、血漿GLP-1和血清一氧化氮水平不同程度提高,但血脂無顯著變化。2.2型糖尿病大鼠胸主動脈內皮舒張功能顯著減退,內皮細胞間間隙和內膜通透性顯著增加,而大劑量西格列汀干預12周后主動脈內皮舒張功能顯著提高,內皮細胞間間隙和內膜通透性不同程度的減小。3.2型糖尿病大鼠主動脈GLP-1R表達水平顯著下降,而RAGE、ROCK、MLCK表達和MYPT、MLC磷酸化水平及RhoA活性顯著上調。不同劑量西格列汀干預12周后不同程度的上調GLP-1R表達水平,并下調RAGE、ROCK、MLCK表達和MYPT、 MLC磷酸化水平及RhoA活性。4.正常內皮細胞骨架F-actin主要分布在細胞周邊、胞膜內側,呈網狀分布,靠近細胞連接處呈細絲狀排列,線條完整連續(xù),細胞中央應力纖維不明顯。給予200mg／1的AGEs刺激HUVECs單層24h,細胞骨架F-actin外周致密帶邊緣變的粗糙不整、排列較紊亂,細胞邊界己難以辨認,F-actin重組,從細胞周邊向細胞中心轉移并成平行束樣堆積、增厚,細胞中央應力纖維形成。Anti-RAGE IgG、Forskolin、Fasudil、 GLP-1能不同程度的恢復F-actin分布,而GLP-1的作用可被Exendin (9-39)、SQ22536、H89和LPA顯著減弱。5. AGEs顯著上調HUVECs的RAGE、ROCK、MLCK表達和MYPT、MLC磷酸化水平及RhoA活性,下調GLP-1R表達。6. Anti-RAGE IgG可下調AGEs刺激的HUVECs的RAGE、ROCK表達和MYPT、MLC磷酸化水平及RhoA活性,上調GLP-1R表達水平。7. Forskolin可下調AGEs刺激的HUVECs的RAGE、ROCK表達和MYPT、MLC磷酸化水平及RhoA活性。8. Fasudil可下調AGEs刺激的HUVECs的MYPT、MLC磷酸化水平及RhoA活性。9.GLP-1顯著下調AGEs刺激的HUVECs的RAGE、ROCK表達和MYPT、MLC磷酸化水平及RhoA活性,上調GLP-1R表達和PKA磷酸化水平,而GLP-1上述作用可被Exendin (9-39)、SQ22536、H89和LPA顯著減弱。結論：1.2型糖尿病大鼠胸主動脈內膜通透性明顯增加,AGEs刺激的內皮細胞骨架結構重排�？赡苡捎谛罘e的AGEs通過其受體(RAGE)途徑激活內皮細胞Rho/ROCK信號通路從而促進MYPT磷酸化,導致MLC磷酸化水平提高,內皮細胞收縮,細胞間隙增大。2.提高活性GLP-1水平,激動GLP-1R可以緩解2型糖尿病大鼠胸主動脈內膜和AGEs刺激的內皮細胞單層高通透性,可能由于GLP-1抑制內皮細胞RAGE表達,下調內皮細胞Rho/ROCK信號通路從而抑制MYPT磷酸化和MLCK表達,導致MLC磷酸化水平降低。3.GLP-1改善糖尿病狀態(tài)下血管內皮細胞骨架結構重排的機制可能為：GLP-1通過激動其受體(GLP-1R),激動cAMP/PKA信號通路,抑制RAGE表達,從而下調Rho/ROCK信號通路,最終抑制MYPT和MLC磷酸化水平,使內皮細胞向心性收縮力減小。
[Abstract]:Background Global Type 2 diabetes mellitus is increasing and has become a worldwide health problem and economic burden . The harm caused by diabetes lies mainly in the disability caused by various complications , and the greatest harm caused by chronic complications such as large blood vessels and microvessels . In the course of development of diabetic vascular disease , the accelerated formation of advanced advanced end products ( AGE ) and its accumulation in vascular tissue play an important role . Objective To study the effects of GLP - 1 on vascular endothelial cell membrane permeability in diabetic rats . The effects of GLP - 1 on endothelium - relaxing function of aorta were observed in rats with type 2 diabetes mellitus . Anti - RAGE IgG , Forskolin , Fasudil , GLP - 1 could restore the F - actin distribution in different degrees , while GLP - 1 could be significantly attenuated by Ex4 ( 9 - 39 ) , SQ22536 , H89 , and lpa . The expression of RAGE , ROCK , MLCK , MYPT , MLC phosphorylation and RhoA activity were significantly increased and the expression of GLP - 1R was downregulated . Anti - RAGE IgG could down - regulate the RAGE , ROCK expression and MYPT , MLC phosphorylation level and RhoA activity , and up - regulate the expression level of GLP - 1R . Forskolin can downregulate the RAGE , ROCK expression and MYPT , MLC phosphorylation level and RhoA activity of cultured vascular endothelial cells . Conclusion : 1 . The expression of RAGE , ROCK and the activity of MYPT , MLC phosphorylation , and the activity of RhoA can decrease the level of phosphorylation of MYPT , regulate the level of phosphorylation of MCP - 1R , and increase the level of phosphorylation of MLCK . Conclusion : It is suggested that GLP - 1 can inhibit the expression of endothelial cell RAGE , regulate the phosphorylation of the endothelial cells , and increase the level of phosphorylation of MLCK . Therefore , it is possible to decrease the level of phosphorylation of the endothelial cells .
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R54

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 管昌益;肖子杰;;對血管內皮細胞有保護作用的中藥篩選[J];中醫(yī)藥通報;2002年01期

2 李峻;許玲;魏品康;;消痰散結方對體外腫瘤誘導的血管內皮細胞生長的影響[J];中國中西醫(yī)結合雜志;2002年S1期

3 高笑舸,崔桅;中藥對血管內皮細胞保護作用的研究概況[J];天津藥學;2003年02期

4 呂鶴,劉冉,張巍,袁云;血管內皮細胞病變與中樞神經系統(tǒng)疾病[J];中風與神經疾病雜志;2005年02期

5 吳少科;曾榮;郭偉韜;;血管內皮細胞在骨形成及修復中的作用及機制[J];廣東醫(yī)學院學報;2008年06期

6 陳彥平;眭承志;;激素對血管內皮細胞的作用的影響的研究進展[J];中國醫(yī)藥導刊;2008年08期

7 王麗萍;祝光禮;;中醫(yī)藥對血管內皮細胞保護作用的研究進展[J];現代中西醫(yī)結合雜志;2008年12期

8 宋立群;周延萌;馬小茜;高允生;;中藥對血管內皮細胞保護作用的研究進展[J];醫(yī)藥導報;2009年06期

9 韓建科;;氧化低密度脂蛋白損傷血管內皮細胞研究進展[J];實用醫(yī)學雜志;2011年02期

10 曹梅;齊華林;李玉雯;陳春燕;桂莉;李偉;;瘦素在誘導血管內皮細胞纖溶酶原激活物抑制物-1表達中的作用[J];海南醫(yī)學;2011年24期

相關會議論文 前10條

1 王麗萍;祝光禮;;中醫(yī)藥對血管內皮細胞保護作用的研究進展[A];浙江省中西醫(yī)結合學會心血管病專業(yè)委員會第七次學術年會暨省級繼續(xù)教育學習班資料匯編[C];2007年

2 葉盛;張懷勤;林以諾;黃偉劍;張艷麗;邵小琳;;雷帕霉素對血管內皮細胞生物學功能的影響[A];第十三次全國心血管病學術會議論文集[C];2011年

3 楊宗城;;血管內皮細胞在燒傷早期臟器損害的發(fā)病中起關鍵作用[A];中華醫(yī)學會第六屆全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];2001年

4 鄭懷恩;李大元;王俊茹;Martin Hauer-Jensen;;他汀對血管內皮細胞放射防護作用的研究[A];全國非電離輻射與電離輻射生物效應及防護學術研討會論文匯編[C];2004年

5 李震;黃紅林;;有機磷對血管內皮細胞的損傷作用的實驗研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術年會論文摘要匯編[C];2013年

6 王楠;呂欣;范傳東;霍思維;張尚立;苗俊英;;二甲基亞砜對血管內皮細胞生長和凋亡的影響[A];中國細胞生物學學會第八屆會員代表大會暨學術大會論文摘要集[C];2003年

7 李震;黃紅林;;有機磷對血管內皮細胞的損傷作用的實驗研究[A];湖南省生理科學會2013年度學術年會論文摘要匯編[C];2013年

8 夏尊恩;李艷;汪明;;脫氫表雄酮抑制血管內皮細胞炎癥反應的初步探索[A];全國臨床免疫檢驗研討會暨第六屆全國臨床免疫學術會議論文匯編[C];2009年

9 徐軍;齊法蓮;陳英劍;胡成進;;金芪降糖片對糖尿病患者血管內皮細胞及其功能的影響[A];中華醫(yī)學會第八次全國檢驗醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會檢驗分會成立30周年慶典大會資料匯編[C];2009年

10 喬亮;陸樹良;高見佳宏;郭靜萍;優(yōu)美香;尾鄉(xiāng)賢;廖鎮(zhèn)江;史濟湘;;高糖對血管內皮細胞生物學行為的影響[A];全國燒傷早期處理專題研討會論文集[C];2002年

相關重要報紙文章 前6條

1 張超群；范曉莉;尼莫地平可保護血管內皮細胞[N];中國醫(yī)藥報;2005年

2 記者　劉云濤;保護血管內皮細胞 防治糖尿病并發(fā)癥[N];中國醫(yī)藥報;2006年

3 山東濰坊市益都中心醫(yī)院血液科主任醫(yī)師 崔釗;感染時血小板為何減少[N];健康報;2007年

4 董德伍;體外反搏研究進入新階段[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

5 萬同己;VC、VE對DM患者腎臟的保護作用[N];中國醫(yī)藥報;2003年

6 廖福龍;用生物力藥理學研究中藥是一新領域[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 咼恒娟;睡眠呼吸暫停模式間歇低氧對大鼠淋巴細胞凋亡及淋巴細胞與血管內皮細胞相互作用機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2014年

2 何霆;miR-542-3p抑制腫瘤新生血管的機制研究[D];清華大學;2015年

3 楊小梅;黑龍江立克次體感染早期Tim-3的免疫學作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2016年

4 劉s，

本文編號：2086705