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自主神經(jīng)遞質(zhì)在乳鼠心房肌細(xì)胞Ca-L和KAch通道表達(dá)中的作用

發(fā)布時(shí)間:2018-06-28 04:13

  本文選題:自主神經(jīng)系統(tǒng) + 離子通道; 參考:《遵義醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文


【摘要】:目的:探討不同濃度的自主神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(NE)和乙酰膽堿(Ach))對(duì)乳鼠心房肌細(xì)胞L型鈣離子通道(Ca-L)和乙酰膽堿敏感性鉀通道(KAch)相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響。方法:1天齡SD乳鼠,消化分離獲得心房肌細(xì)胞,培養(yǎng)24h后干預(yù)分組。分為低藥物濃度組、高藥物濃度組。兩藥物濃度組分別按如下方案各自分成5亞組。(1)低濃度組:(1)對(duì)照組:不予干預(yù),培養(yǎng)24h。(2)NE組:NE 0.1μmol/L干預(yù)24h。(3)Ach組:Ach 0.1μmol/L干預(yù)24h。(4)NE+Ach組:NE 0.1μmol/L+Ach0.1μmol/L干預(yù)24h;(5)NE+Meto(美托洛爾)組:NE 0.1μmol/L+Meto 0.1μmol/L干預(yù)24h。(2)高濃度組:(1)對(duì)照組:不予干預(yù),培養(yǎng)72h。(2)NE組:NE 10μmol/L干預(yù)72h。(3)Ach組:Ach 10μmol/L干預(yù)72h。(4)NE+Ach組:NE 10μmol/L+Ach10μmol/L干預(yù)72h。(5)NE+Meto組:NE 10μmol/L+Meto 10μmol/L干預(yù)72h。實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR、免疫印跡(WB)檢測(cè)各組Cav1.2、Cav1.3、Kir3.1、Kir3.4 m RNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)低濃度組:給予NE刺激24h后Cav1.2、Cav1.3 m RNA及蛋白表達(dá)上調(diào),Kir3.1、Kir3.4 m RNA及蛋白表達(dá)下調(diào);Ach刺激24h后Cav1.2、Cav1.3m RNA及蛋白表達(dá)下調(diào),Kir3.1、Kir3.4 m RNA及蛋白表達(dá)上調(diào);NE+Ach組與NE組比較,Cav1.2、Cav1.3 m RNA及蛋白表達(dá)下調(diào),Kir3.1、Kir3.4 m RNA及蛋白表達(dá)上調(diào);NE+Ach組與Ach組比較,Kir3.4 m RNA及蛋白表達(dá)下調(diào);NE+Meto組與NE組比較,Meto干預(yù)后Cav1.2、Cav1.3 m RNA及蛋白表達(dá)下調(diào),Kir3.1、Kir3.4 m RNA及蛋白表達(dá)上調(diào)。(2)高濃度組中:NE、Ach刺激72h后Cav1.2、Cav1.3、Kir3.1、Kir3.4 m RNA及蛋白均表達(dá)下調(diào);NE+Ach組分別與NE組、Ach組比較,Kir3.1、Kir3.4蛋白表達(dá)均下調(diào);NE+Meto組與NE組比較,Cav1.2、Cav1.3 m RNA及蛋白均表達(dá)上調(diào),Kir3.1、Kir3.4蛋白表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:(1)低濃度NE促進(jìn)培養(yǎng)乳鼠心房肌細(xì)胞Cav1.2、Cav1.3基因和蛋白表達(dá),抑制Kir3.1、Kir3.4表達(dá);迷走神經(jīng)則與之相反。Meto干預(yù)可抑制NE上述效應(yīng)。(2)高濃度NE、Ach抑制Ca-Lh和KAch通道Cav1、2、Cav1.3及Kir3.1、Kir3.4 m RNA和蛋白表達(dá)。Meto干預(yù)可部分抑制上述效應(yīng)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of different concentrations of autonomic neurotransmitter norepinephrine (NE) and acetylcholine (Ach) on the expression of genes and proteins related to L-type calcium channel (Ca-L) and acetylcholine sensitive potassium channel (KAch) in neonatal rat atrial myocytes. Methods Atrial myocytes were isolated from 1 day old Sprague-Dawley rats and cultured for 24 hours. They were divided into low drug concentration group and high drug concentration group. The two drug concentration groups were divided into 5 subgroups according to the following scheme: (1) low concentration group: (1) control group: no intervention, (2) NE group: NE 0.1 渭 mol / L intervention 24 h. (3) Ach group: Ach 0.1 渭 mol / L intervention 24 h. (4) NE Ach group: NE 0.1 渭 mol / L Ach0.1 渭 mol / L for 24 h; (5) NE Meto 0.1 渭 mol / L Meto 0.1 渭 mol / L for 24 h. (2) High concentration group: (1) control group: no intervention. (2) NE group: 10 渭 mol / L 1: 10 渭 mol / L for 72 h; (3) Ach group: 10 渭 mol / L for 72 h; (4) NE group 10 渭 mol / L Ach10 渭 mol / L for 72 h; (5) NE group 10 渭 mol / L Meto 10 渭 mol / L for 72 h; (2) NE group 10 渭 mol / L Meto 10 渭 mol / L for 72 h; (2) NE group 10 渭 mol / L Ach10 渭 mol / L for 72 h; (5) NE group 10 渭 mol / L Meto 10 渭 mol / L for 72 h. Real-time fluorescence quantitative reverse transcription (PCR) and Western blotting (WB) were used to detect the expression of Cav1.2Cav1.3Cav1.3Cav1.1Kir3.4 mRNA and protein. Results: (1) in the low concentration group, the mRNA and protein expression of Cav1.2Cav1.3 mRNA and protein up-regulated Kir3.1 and Kir3.4 mRNA and protein expression after 24 hours of NE stimulation. After 24 hours of stimulation by Ach, the mRNA and protein expression of Cav1.2Cav1.3m and protein down-regulated Kir3.1Cav1.4mRNA and protein expression in NE Ach group were lower than those in NE group, compared with NE group, the expression of Cav1.2Cav1.3 mRNA in NE group was higher than that in NE group. The expression of Kir3.4 m RNA and protein in NE Ach group was lower than that in Ach group. The expression of Kir3.4 m RNA and protein in NE Meto group was significantly lower than that in NE group. (2) the expression of Kir3.1 ~ Kir3.4 m RNA and protein in NE Meto group was significantly higher than that in NE group. (2) the expression of Kir3.1 ~ Kir3.4 m mRNA and protein in NE Meto group was significantly higher than that in NE group. (2) the expression of Kir3.1 ~ Kir3.4 m mRNA and protein in NE Meto group was significantly higher than that in NE group. The expression of Cav1.2Cav1.3Cav1.3Cav3.1and Kir3.4m mRNA and protein were down-regulated in NE Ach group and NE group, respectively. The expression of Kir3.1 Kir3.4 protein was down-regulated in NE Meto group compared with NE Meto group and NE group. Both mRNA and protein expression of Cav1.2Cav1.3 m mRNA and protein were up-regulated and down-regulated in NE Ach group and NE group respectively. Conclusion: (1) low concentration of NE promotes the expression of Cav1.2Cav1.3 gene and protein in cultured rat atrial myocytes, and inhibits the expression of Kir3.1 and Kir3.4; (2) High concentration of NE-Ach inhibited Ca-Lh and KAch channel Cav1.3 and Kir3.1 Kir3.4 mRNA and protein expression. Meto partially inhibited these effects.
【學(xué)位授予單位】:遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類(lèi)號(hào)】:R541.75

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本文編號(hào):2076683

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