本文選題：細胞外超氧化物岐化酶 + 同型半胱氨酸��； 參考：《中國動脈硬化雜志》2017年01期

【摘要】：目的探討細胞外超氧化物岐化酶(EC-SOD)在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬細胞氧化應激中的作用及機制。方法將THP-1單核細胞用佛波酯刺激48 h后演變成巨噬細胞,用0、50、100、200、500μmol/L Hcy作用細胞72 h,并加設葉酸+維生素B12(Vit B12)干預組(100μmol/L Hcy+30μmol/L葉酸+30μmol/L Vit B12)。微板法檢測氧化應激指標(H_2O_2、O_2~-、OH-)的變化;實時熒光定量PCR檢測巨噬細胞中EC-SOD的mRNA表達水平;Western blot檢測巨噬細胞中EC-SOD的蛋白表達水平;EC-SOD測定試劑盒檢測EC-SOD活性。分別構建EC-SOD重組質粒和干擾質粒轉染細胞,檢測EC-SOD的mRNA及蛋白的表達水平以及超氧陰離子的表達。結果與對照組相比,100、200、500μmol/L Hcy組H_2O_2、OH-活性顯著增高(P0.01),EC-SOD mRNA和蛋白表達明顯降低(P0.01)。與對照組相比,100、200、500μmol/L Hcy組EC-SOD活性分別下降了13.92%、8.62%、10.32%(P0.05,P0.01)。與100μmol/L Hcy組相比,葉酸+Vit B12干預組EC-SOD mRNA的表達升高了47%。分別轉染EC-SOD重組質粒和干擾質粒后,與100μmol/L Hcy組相比,EC-SOD重組組O_2~-含量降低了63.89%,干擾片段-596組O_2~-含量則增加了33.59%(P0.05,P0.01)。結論 EC-SOD參與了Hcy導致的單核細胞源性巨噬細胞的氧化應激。在抑制Hcy誘導動脈粥樣硬化的過程中,EC-SOD可能發(fā)揮著重要的作用。
[Abstract]:Objective to investigate the role and mechanism of extracellular superoxide dismutase (EC-SOD) in oxidative stress of macrophages induced by homocysteine (Hcy). Methods THP-1 mononuclear cells were stimulated with phorbol ester for 48 h and then developed into macrophages. The cells were treated with 0,50100200500 渭 mol / L Hcy for 72 h and treated with Vitamin B12 folate (100 渭 mol / L Hcy 30 渭 mol / L folic acid 30 渭 mol / L vit B12) for 72 h. The expression level of EC-SOD mRNA in macrophages was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and the protein expression level of EC-SOD in macrophages was detected by Western blot. The activity of EC-SOD in macrophages was detected by EC-SOD assay kit. EC-SOD recombinant plasmids and interference plasmids were constructed respectively to detect the expression level of EC-SOD mRNA and protein and the expression of superoxide anion. Results compared with the control group, the activity of H _ 2O _ 2 O _ (-)-increased significantly (P0.01) and the expression of EC-SOD mRNA and protein decreased significantly (P0.01) in the 100200 渭 mol / L Hcy group. Compared with the control group, the EC-SOD activity in the 100200500 渭 mol / L Hcy group decreased by 13.92% (P0.05P0.01), and 8.62 渭 mol / L Hcy group decreased the EC-SOD activity by 10.32% (P0.05P0.01), respectively. Compared with 100 渭 mol / L Hcy group, the expression of EC-SOD mRNA in Vit B12 intervention group increased 47%. After transfection of EC-SOD recombinant plasmid and interference plasmid, compared with 100 渭 mol / L Hcy group, the content of O _ 2O _ 2 in EC-SOD recombinant group decreased 63.89%, and the content of O _ 2O _ (2) in interference fragment -596 group increased 33.59% (P 0.05 ~ (0.05) P _ (0.01). Conclusion EC-SOD is involved in the oxidative stress of monocyte derived macrophages induced by Hcy. EC-SOD may play an important role in inhibiting atherosclerosis induced by Hcy.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;寧夏醫(yī)科大學藥學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(81360052、81560084、81460080) 2014年度校級優(yōu)勢學科群項目(XY201415)
【分類號】：R543.5

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本文編號：2061526