發(fā)布時(shí)間：2018-06-23 08:37

  本文選題：巨噬細(xì)胞 + 高磷酸鹽血癥��； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年12期

【摘要】：目的觀察高磷環(huán)境對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積的影響及其分子機(jī)制。方法將人單核細(xì)胞株(THP-1)源性巨噬細(xì)胞分為對(duì)照組(磷1.0mmol/L)、高磷處理組(磷3.0mmol/L)、磷甲酸鈉(PFA)處理組(磷1.0mmol/L加PFA 1.0mmol/L)以及高磷聯(lián)合PFA處理組(磷3.0mmol/L加PFA 1.0mmol/L),按不同要求分別處理各組細(xì)胞。培養(yǎng)24h后,油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)中性脂質(zhì)的分布,酶催化比色法定量測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的膽固醇含量,qPCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCoAR)、低密度脂蛋白受體(LDLR)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)mRNA的表達(dá),蛋白質(zhì)印跡法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)SCAP、LDLR、HMGCoAR及核內(nèi)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(N-SREBP2)的蛋白水平,激光共聚焦法檢測(cè)SCAP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基體的移位情況。結(jié)果與對(duì)照組相比,高磷處理組巨噬細(xì)胞內(nèi)中性脂質(zhì)明顯聚集,細(xì)胞內(nèi)總膽固醇與膽固醇酯的含量增加(P0.05),LDLR、HMGCoAR mRNA與蛋白的表達(dá)增高(P0.05,P0.01),細(xì)胞核內(nèi)N-SREBP2的蛋白表達(dá)水平增加(P0.05),SCAP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)向高爾基體的移位增加;PFA處理(高磷聯(lián)合PFA處理組)可阻斷高磷引起的上述作用(P0.05,P0.01)。高磷處理組巨噬細(xì)胞內(nèi)SCAP的蛋白水平相比對(duì)照組增高(P0.05),PFA處理能抑制高磷導(dǎo)致的SCAP蛋白水平增高,但SCAP mRNA的表達(dá)在各組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論高磷環(huán)境下,鈉磷轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)磷離子進(jìn)入巨噬細(xì)胞內(nèi),通過基因轉(zhuǎn)錄后機(jī)制增加SCAP的蛋白水平,誘導(dǎo)其功能失調(diào)并促使其異常轉(zhuǎn)運(yùn)SREBP2至高爾基體裂解釋放NSREBP2,后者轉(zhuǎn)位入核促進(jìn)HMGCoAR和LDLR的表達(dá),促使細(xì)胞內(nèi)源性膽固醇合成和外源性LDL經(jīng)LDLR攝入的增加,最終導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇異常蓄積。
[Abstract]:Objective to observe the effect of high phosphorus on cholesterol accumulation in macrophages and its molecular mechanism. Methods Human monocyte (THP-1) macrophages were divided into control group (P 1.0 mmol / L), high phosphorus treatment group (P 3.0 mmol / L), sodium phosphate formate group (P 1.0 mmol / L + PFA 1.0 mmol / L) and high phosphorus combined PFA group (P 3.0 mmol / L plus PFA 1.0 mmol / L). After 24 hours of culture, the distribution of neutral lipid in cells was observed by oil red O staining. The expression of HMGCoAR, low density lipoprotein receptor (LDLR) and steroid regulatory element binding protein lytic activator (SCAP) mRNA was detected by enzyme catalytic colorimetry and qPCR. The protein levels of SCAP LDLRN HMGCoAR and N-SREBP2 (N-SREBP2) were measured by Western blot. The translocation of SCAP from endoplasmic reticulum to Golgi body was detected by confocal laser. Results compared with the control group, the neutrophil lipid accumulation in the high phosphorus treatment group was significantly higher than that in the control group. The content of total cholesterol and cholesterol ester increased (P0.05) and the expression of HMGCoAR mRNA and protein increased (P0.05 + P0.01), and the protein expression level of N-SREBP2 increased (P0.05). The shift of SCAP from endoplasmic reticulum to Golgi body increased (PFA treatment group). The above effects induced by high phosphorus can be blocked (P0.05, P0.01). The protein level of SCAP in macrophages of high phosphorus treatment group was higher than that of control group (P0.05). PFA treatment could inhibit the increase of SCAP protein level induced by high phosphorus, but the expression of SCAP mRNA had no significant difference among the groups (P0.05). Conclusion in high phosphorous environment, sodium phosphate transporter mediates phosphorous ion into macrophages and increases the protein level of SCAP through gene posttranscriptional mechanism. It induced dysfunction and caused abnormal transport of SREBP2 to Golgi apparatus to release NSREBP2.The latter translocated into nucleus promoted the expression of HMGCoAR and LDLR, promoted intracellular cholesterol synthesis and increased the uptake of exogenous LDL through LDLR. Eventually lead to abnormal accumulation of cholesterol in cells.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科;重慶代謝性疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎臟內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(81500341)~~
【分類號(hào)】：R543.5

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本文編號(hào)：2056530