本文選題：miR-4787-5p + miR-4306��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景及目的急性主動(dòng)脈夾層(Acute Aortic Dissection,AAD)是一種急性發(fā)作、進(jìn)展快速、死亡率及致殘率較高的危重心血管急癥。據(jù)研究報(bào)道,AAD發(fā)病率約3.5例/(10萬人年),約50%死于48h內(nèi),院內(nèi)死亡率約20%-30%,10年死亡率可達(dá)37%-53%。隨著醫(yī)療技術(shù)水平的提高,AAD的死亡率已明顯下降,但與冠心病等其它心血管疾病相比,我國AAD的整體治療水平仍不高,AAD的誤診率、漏診率、死亡率依然較高。因此,進(jìn)一步了解AAD的發(fā)病過程,對指導(dǎo)研究AAD的早期診斷、及時(shí)有效的治療及并發(fā)癥的預(yù)防具有重要意義。目前國內(nèi)外關(guān)于AAD的發(fā)病機(jī)制研究甚多,但是其分子發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。微小RNA(micro RNA,miRNA)是一類內(nèi)源性、非編碼、小的RNA分子,長約18-22個(gè)核苷酸,具有超強(qiáng)的穩(wěn)定性,通過與靶基因的3’端非編碼區(qū)(3’-untranslated region,3’UTR)結(jié)合調(diào)控其轉(zhuǎn)錄水平、翻譯水平,然后參與細(xì)胞增殖、分化及凋亡等相關(guān)的生物學(xué)功能的調(diào)控。有研究顯示,miRNA可以廣泛且穩(wěn)定的在外周血漿或血清中存在,并能通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(Fluorescence quantitative Reverse Transcription-polymerase Chain Reacto,q RTPCR)的方法檢測出來。miRNA表達(dá)水平可以隨著疾病的病理生理變化而發(fā)生改變,因而廣泛參與調(diào)控各種疾病的發(fā)病過程,已有研究發(fā)現(xiàn)miRNA在AD的發(fā)病過程中起著主要作用。為進(jìn)一步探究miRNA在AAD中的表達(dá)情況,本實(shí)驗(yàn)室前期已經(jīng)通過Agilengt miRNA芯片技術(shù)進(jìn)行分析miRNA的表達(dá)譜,初步篩選出在AAD患者和正常人的外周血漿中差異表達(dá)的微小RNA,且選出2個(gè)表達(dá)差異明顯的miRNA,即miR-4787-5p和miR-4306。本實(shí)驗(yàn)室先前的研究結(jié)果為miRNA-4787-5p在AAD與健康對照組血漿中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而miR-4306無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這與miRNAs芯片結(jié)果不一致。為了能更精確的驗(yàn)證差異表達(dá)miRNAs在AAD的表達(dá)水平,減小實(shí)驗(yàn)誤差,本次研究將通過采用熒光定量RT-PCR方法擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證血漿中的miR-4787-5p和miR-4306在AAD患者與健康對照組表達(dá)水平的差異性。并且,本研究還將初步探索miR-4787-5p和miR-4306在AAD中的靶基因,進(jìn)而初步探討其在AAD發(fā)病機(jī)制中的作用。研究方法本實(shí)驗(yàn)分為兩組:急性主動(dòng)脈夾層患者組(AAD組)和健康對照組(Control組)。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),與所有入組者簽署知情同意書。分別收集2015年1月~2017年1月就診于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院并且確診為AAD的患者和年齡、性別配比相同的健康對照組的外周靜脈血血漿,詳細(xì)記錄入組者的基本臨床資料,包括入院時(shí)的血壓及24小時(shí)之內(nèi)的D-二聚體、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、腦鈉肽(brain natriuretic peptide,BNP)、白細(xì)胞(white blood cell,WBC)、紅細(xì)胞(red blood cell,RBC)、血紅蛋白(hemoglobin,Hb)、血小板(platelet,PLT)及心臟彩超測得的升主動(dòng)脈寬度等。首先,將兩組的基本臨床資料進(jìn)行獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn),選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)與是否發(fā)生AAD進(jìn)行相關(guān)性分析。然后,采用q RT-PCR的方法擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證AAD組與對照組血漿中的miR-4787-5p和miR-4306表達(dá)水平的差異,并且應(yīng)用受試者工作曲線(receiver operating characteristic,ROC)計(jì)算曲線下面積(area under the receiver operating characteristic curve,AUC)以表明miR-4787-5p和miR-4306對AAD早期診斷的敏感性和特異性。最后,通過生物信息學(xué)軟件分析推測得到miR-4787-5p和miR-4306的靶基因,并且應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)的方法驗(yàn)證靶基因的準(zhǔn)確性。結(jié)果1.按排除標(biāo)準(zhǔn)共收集AAD患者102例,其中男性81例,女性21例,年齡28~78歲,平均52.3±10.4歲;對照組58例,男性48例,女性10例,年齡30~77歲,平均年齡53.3±11.6歲。兩組人群年齡、性別、吸煙史、飲酒史、高血脂病史差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),兩組人群的高血壓病史、入院時(shí)血壓是否升高、升主動(dòng)脈寬度、D-二聚體、CRP、BNP、WBC、RBC、Hb、PLT的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.將AAD組和對照組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的指標(biāo)與是否發(fā)生AAD進(jìn)行雙變量相關(guān)性分析,結(jié)果顯示:紅細(xì)胞和血紅蛋白與AAD呈弱負(fù)相關(guān)關(guān)系,P0.05,相關(guān)系數(shù)為0.286、0.291;血小板與AAD呈一般負(fù)相關(guān)關(guān)系,P0.05,相關(guān)系數(shù)為0.411;高血壓與AAD呈一般正相關(guān)關(guān)系,P0.05,相關(guān)系數(shù)為0.383;入院時(shí)血壓升高、腦鈉肽與AAD呈顯著正相關(guān)關(guān)系,P0.05,相關(guān)系數(shù)為0.614、0.644;升主動(dòng)脈寬度、白細(xì)胞、D-二聚體、C反應(yīng)蛋白與AAD呈高度正相關(guān)關(guān)系,P0.05,相關(guān)系數(shù)分別為0.761、0.772、0.820、0.832。3.通過q RT-PCR擴(kuò)大樣本量進(jìn)行實(shí)驗(yàn),其結(jié)果為:AAD患者血漿中的miR-4787-5p和miR-4306的相對表達(dá)量均明顯高于健康對照組,分別為0.646±0.442 vs 0.189±0.116、0.780±0.323 vs 0.006±0.009,均P=0.0000.010.05,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且均與本實(shí)驗(yàn)室前期的基因芯片檢測分析結(jié)果一致。應(yīng)用ROC曲線進(jìn)行分析,結(jié)果顯示miR-4787-5p對AAD檢測的敏感度78%,特異度為80%,AUC為0.834(95%CI,0.769-0.900),P=0.0000.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-4306對AAD檢測的敏感度為86%,特異度為88%,AUC為0.921(95%CI,0.876-0.966),P=0.0000.05,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.應(yīng)用生物信息學(xué)分析預(yù)測結(jié)果為:PKD1、TGF-β1的3’UTR區(qū)分別包含miR-4787-5p和miR-4306的作用靶點(diǎn),可能是miR-4787-5p和miR-4306在AAD中的靶基因。5.雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果為:共轉(zhuǎn)染miR-4787-5p agomir和含有PKD1野生型3’UTR區(qū)的重組載體組及共轉(zhuǎn)染miR-4306 agomir和含有TGF-β1野生型3’UTR區(qū)的重組載體組的細(xì)胞的熒光素酶活性出現(xiàn)明顯下調(diào)(P均0.05)。提示miR-4787-5p和miR-4306分別與PKD1 3’UTR區(qū)及TGF-β1 3’UTR區(qū)存在相互作用,且這種相互作用使得miR-4787-5p和miR-4306可分別負(fù)向調(diào)控PKD1和TGF-β1的表達(dá)。因此,研究證實(shí)PKD1、TGF-β1分別為miR-4787-5p和miR-4306在AAD中的靶基因。結(jié)論miR-4787-5p和miR-4306不僅對AAD具有一定的早期診斷價(jià)值,而且還可能是參與調(diào)控AAD發(fā)病機(jī)制的因素之一。
[Abstract]:The research background and the purpose of acute aortic dissection are acute attack , rapid progress , death rate and high disability rate . According to the study , the mortality rate is about 20 % -30 % , and the mortality rate is 37 % -53 % . The research shows that miRNA can be widely and stably in peripheral blood plasma or serum . In order to verify the difference of miR - 4787 - 5p and miR - 4306 in plasma of healthy control group , the difference of miR - 4787 - 5p and miR - 4306 in plasma of healthy control group was further verified by using quantitative RT - PCR . The results showed that the relative expression of miR - 4787 - 5p and miR - 4306 was significantly higher than that of healthy control group ( P0.05 ) . The results showed that miR - 4787 - 5p and miR - 4306 respectively contained the target genes of miR - 4787 - 5p and miR - 4306 . The results showed that miR - 4787 - 5p and miR - 4306 respectively contained the target genes of miR - 4787 - 5p and miR - 4306 .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R543.1
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本文編號：2034880