本文選題：蛋白酶體 + β5i　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年博士論文

【摘要】：研究背景：動(dòng)脈粥樣硬化性腹主動(dòng)脈瘤(AAA)是老齡化社會(huì)的常見病,動(dòng)脈瘤破裂后,死亡率高,是60歲以上人群死亡的主要原因之一。炎癥反應(yīng)是其主要發(fā)病機(jī)制之一,其中T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、分化作用重要,但具體調(diào)控機(jī)制尚待明確。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,可通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)組織炎癥反應(yīng),但蛋白酶體是否通過(guò)激活NF-κB促進(jìn)AAA形成尚無(wú)報(bào)導(dǎo)。免疫蛋白酶體對(duì)T細(xì)胞分化、炎性因子分泌等過(guò)程具有重要調(diào)節(jié)作用,以p5i亞單位作用為主,但p5i是否參與AAA形成,目前尚無(wú)報(bào)導(dǎo)。目的：明確蛋白酶體及其免疫亞單位β5i在AAA形成中的作用及調(diào)節(jié)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法：收集AAA患者及正常人腹主動(dòng)脈組織,同時(shí)通過(guò)對(duì)雄性ApoE-/-小鼠皮下埋植血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)緩釋泵(1,000 ng/min/kg)復(fù)制AAA動(dòng)物模型。試劑盒測(cè)定蛋白酶體糜蛋白酶活性。采用免疫染色、Western Blot方法分析β5i在腹主動(dòng)脈組織中表達(dá)水平。通過(guò)低劑量硼替佐米(Bortezomib, BTZ) (50μg/kg, i.p,每3日1次)部分抑制蛋白酶體活性,實(shí)驗(yàn)分為4組：假手術(shù)組(Sham),假手術(shù)給藥組(BTZ),Ang Ⅱ灌注組(Ang Ⅱ),血管緊張素Ⅱ灌注+給藥組(Ang Ⅱ+BTZ)。進(jìn)一步采用PR-957(又稱ONX 0914,10mg/kg, s.c,隔日1次)抑制p5i活性,實(shí)驗(yàn)分為4組：假手術(shù)組(Sham),假手術(shù)給藥組(PR-957), Ang Ⅱ灌注組(AngⅡ), Ang Ⅱ灌注+給藥組(Ang Ⅱ+PR-957)。大體取材計(jì)算腹主動(dòng)脈平均直徑、發(fā)生率、動(dòng)脈瘤分型。通過(guò)HE染色、Masson染色和Gomori's醛品紅法染色觀察各組小鼠炎癥反應(yīng)和血管重塑情況。通過(guò)免疫染色、流式細(xì)胞分析技術(shù)明確炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況(包括巨噬細(xì)胞和CD3+T細(xì)胞)；通過(guò)免疫染色、qPCR分析明確各組小鼠動(dòng)脈壁內(nèi)炎癥細(xì)胞亞型分泌細(xì)胞因子變化；通過(guò)免疫熒光染色a-SMA,并與末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法(TUNEL)共染色確定主動(dòng)脈壁內(nèi)血管平滑細(xì)胞(VSMC)凋亡情況；通過(guò)Western Blot等檢測(cè)組織中炎癥反應(yīng)及相關(guān)信號(hào)通路變化；通過(guò)明膠酶譜法檢測(cè)主動(dòng)脈組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的活性變化。結(jié)果：1、低劑量BTZ可有效抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠AAA的發(fā)生發(fā)展；2、BTZ可減輕腹主動(dòng)脈組織炎癥反應(yīng),減少組織中CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)目；3、BTZ可減少Ang Ⅱ誘導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路激活及下游ICAM-1的表達(dá)；4、人及ApoE-/-小鼠AAA組織中免疫亞單位β5i表達(dá)及活性均增加；5、PR-957可有效抑制ApoE-/-小鼠組織中β5i的表達(dá),并降低Ang Ⅱ誘導(dǎo)ApoE-/-小鼠AAA的發(fā)生率及嚴(yán)重程度；6、PR-957可有效抑制Ang Ⅱ誘導(dǎo)的ApoE-/-小鼠腹主動(dòng)脈炎癥反應(yīng)及血管重塑；7、PR-957可減少組織中CD3+T淋巴細(xì)胞的數(shù)目,并抑制其向輔助型T淋巴細(xì)胞(Helper T cell, Th)和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Cytotoxic T cell, Tc)細(xì)胞分化；8、p5i高表達(dá)可通過(guò)促進(jìn)主動(dòng)脈壁輔助型T淋巴細(xì)胞17 (Helper T cell 17, Th17)細(xì)胞分化,同時(shí)抑制調(diào)節(jié)型細(xì)胞(Regular T cell, Treg)細(xì)胞分化,促進(jìn)AAA形成：9、PR-957可抑制組織VSMC凋亡,同時(shí)抑制組織MMPs活化。結(jié)論：本研究表明蛋白酶體激活通過(guò)活化NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)炎癥細(xì)胞在血管壁的黏附聚集促進(jìn)AAA形成。進(jìn)一步研究表明免疫蛋白酶體亞單位β5i的活化促進(jìn)AAA形成,主要通過(guò)調(diào)節(jié)組織內(nèi)特定炎性細(xì)胞分化。通過(guò)本研究,初步明確了固有蛋白酶體及p5i參與AAA發(fā)生的病理生理機(jī)制,為藥物治療AAA提供新的參考靶點(diǎn)。
[Abstract]:Background: atherosclerotic abdominal aortic aneurysm (AAA) is a common disease in the aging society. After aneurysm rupture, the mortality is high, and it is one of the main causes of death in people over 60 years of age. The inflammatory reaction is one of the main mechanisms of the disease. The infiltration of T lymphocytes is important, but the specific regulation mechanism remains to be clear. Ubiquitin egg is still to be defined. The white enzyme body system (UPS) plays an important role in regulating the inflammatory response. It can stimulate the inflammatory response by activating the NF- kappa B signaling pathway, but it is not reported that the proteasome promotes the formation of AAA by activating NF- kappa B. The immune proteasome has an important regulatory effect on the differentiation of T cells and the secretion of inflammatory factors, and the action of p5i subunit is the role of the proteasome. Main, but there is no report on whether p5i participates in the formation of AAA. Objective: to clarify the role and regulation mechanism of proteasome and its immune subunit beta 5I in the formation of AAA. Experimental methods: collecting AAA patients and normal human abdominal aorta tissue, and by subcutaneous implantation of angiotensin II (Ang II) sustained-release pump (1000 ng/min) to male ApoE-/- mice (1000 ng/min). /kg) replicate the AAA animal model. The activity of proteasome chymotrypsin was measured by the kit. The expression of beta 5I in the abdominal aorta was analyzed by immuno staining and Western Blot method. The activity of proteasome was suppressed by low dose boron (Bortezomib, BTZ) (50 u g/kg, i.p, 1 times every 3 days), and the experiment was divided into 4 groups: sham operation group (Sham). The sham operation group (BTZ), Ang II perfusion group (Ang II), angiotensin II perfusion + administration group (Ang II +BTZ). Further using PR-957 (also known as ONX 0914,10mg/kg, S.C, 1 times a day) to inhibit p5i activity, the experiment was divided into 4 groups: sham operation group (Sham), sham operation group (PR-957), perfusion group (II), perfusion II + administration group PR-957). The average diameter of the abdominal aorta, the incidence of the abdominal aorta, the aneurysm classification. The inflammatory reaction and vascular remodeling in each group were observed by HE staining, Masson staining and Gomori's aldehyde fuchsin staining. The inflammatory cell infiltration (including macrophages and CD3+T cells) was determined by immunization and flow cytometry. Through immunofluorescence staining, the changes of cytokines secreted by inflammatory cells in the arterial wall of the mice were determined by qPCR analysis. The apoptosis of vascular flat slide cells (VSMC) in the aortic wall was determined by immunofluorescence staining a-SMA and TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling assay); and Western Bl was used. OT and other changes in the inflammatory response and related signal pathways in the tissue. The changes in the activity of matrix metalloproteinase (MMPs) in the aorta were detected by gelatin zymography. Results: 1, low dose BTZ could effectively inhibit the development of AAA in ApoE-/- mice induced by Ang II; 2, BTZ can reduce the inflammatory reaction in the abdominal aorta and reduce the C in the tissue. The number of D3+T lymphocyte, 3, BTZ can reduce the activation of NF- kappa B signaling pathway induced by Ang II and the expression of downstream ICAM-1; 4, the expression and activity of the immune subunit beta 5I in human and ApoE-/- mice AAA tissues are increased, and 5, PR-957 can effectively inhibit the expression of beta 5I in ApoE-/- mouse tissues, and reduce the incidence of induced mice. 6, PR-957 can effectively inhibit the inflammatory response and vascular remodeling in the abdominal aorta of ApoE-/- mice induced by Ang II, and 7, PR-957 can reduce the number of CD3+T lymphocytes in the tissues, and inhibit the differentiation to the auxiliary T lymphocyte (Helper T cell, Th) and the cytotoxic T cells (Cytotoxic). By promoting the differentiation of T lymphocyte 17 (Helper T cell 17, Th17) cells and inhibiting the differentiation of regulatory cells (Regular T cell, Treg) cells and promoting the formation of AAA: 9, PR-957 can inhibit apoptosis of tissue VSMC, and inhibit tissue activation. Conclusion: the activation of proteasome activation by activation of the activated kappa activation signal The pathway promotes the adhesion and aggregation of inflammatory cells in the vascular wall to promote the formation of AAA. Further studies have shown that the activation of the immuno proteasome subunit beta 5I promotes the formation of AAA, mainly by regulating the differentiation of specific inflammatory cells in the tissue. Through this study, the pathophysiological mechanism of the inherent proteasome and p5i and AAA is preliminarily identified for the treatment of drugs. The treatment of AAA provides a new reference target.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R543.1

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本文編號(hào)：2023307