本文選題：低氧誘導的肺動脈高壓模型 + 復氧后肺動脈高壓逆轉(zhuǎn)模型��； 參考：《河南科技大學》2015年碩士論文

【摘要】：背景:低氧性肺動脈高壓的肺血管重構(gòu)和右心重構(gòu)在復氧后可發(fā)生顯著的逆轉(zhuǎn),但其機制不明。DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的重要機制。在外界刺激下,細胞的DNA甲基化可發(fā)生動態(tài)改變,調(diào)控基因表達,參與各種病理生理過程。DNA甲基化主要受DNA甲基轉(zhuǎn)移酶家族(DNMTs)的調(diào)控,已有研究指出DNMTs在血管性疾病及腫瘤中均發(fā)揮重要作用,但其在肺動脈高壓中的研究甚少。目的:本研究旨在構(gòu)建低氧誘導的肺動脈高壓大鼠模型和復氧后肺動脈高壓逆轉(zhuǎn)模型,并探討DNA甲基轉(zhuǎn)移酶家族蛋白在肺動脈高壓肺血管重構(gòu)和右心重構(gòu)及其逆轉(zhuǎn)后的表達變化和潛在作用。方法:將大鼠置于低壓氧艙內(nèi),持續(xù)飼養(yǎng)3周,構(gòu)建低氧性肺動脈高壓大鼠模型。低氧模型構(gòu)建成功后,將大鼠轉(zhuǎn)入正常外界環(huán)境,持續(xù)飼養(yǎng)6周,構(gòu)建低氧后復氧的肺動脈高壓逆轉(zhuǎn)大鼠模型。在缺氧和復氧的連續(xù)時間點上,利用超聲心動圖、右心導管檢查和組織病理學檢查來鑒定其表型。利用Western blot、免疫組化等方法檢測正常對照組、低氧3周組和復氧3周組大鼠肺組織和右心組織中Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b和Dnmt3L蛋白的表達情況。結(jié)果:1.持續(xù)低氧構(gòu)建的肺動脈高壓大鼠模型的鑒定。持續(xù)低氧處理后,大鼠肺動脈加速時間(PAAT)逐漸下降。低氧3周組大鼠的PAAT(n=8,14.4±1.8ms)降至正常對照組(n=6,33.4±3.7ms)的43%(P0.001)。持續(xù)低氧處理后,大鼠右心室游離壁厚度(RVWT)、肺動脈平均壓(mPAP)、右心室收縮壓(RVSP)和右心室肥厚指數(shù)(RV/LV+S)均逐漸升高,低氧3周組大鼠的RVWT(n=8,1.04±0.26mm)升高至正常對照組(n=6,0.70±0.14mm)的1.5倍(P0.01)。低氧3周組大鼠的mPAP(n=8,31.68±5.67mmHg)升至正常對照組(n=6,14.63±2.39mmHg)的2.2倍(P0.001),低氧3周組大鼠的RVSP(n=8,47.86±5.54mmHg)升至正常對照組(n=6,23.33±1.90mmHg)的2.1倍(P0.001)。RV/LV+S在低氧3周組(n=8,0.412±0.08)大鼠中升高至正常對照組(n=6,0.225±0.021)的1.8倍(P0.05)。病理染色顯示,在低氧3周組大鼠出現(xiàn)明顯肺動脈重塑和右心重構(gòu)。低氧3周組大鼠的肺小動脈血管壁厚度百分比(WT%)(n=3,0.42±0.02%)為正常對照組(n=3,0.23±0.04%)的1.8倍(P0.05),低氧3周組大鼠的肺小動脈血管壁面積百分比(wa%)(n=3,0.72±0.08%)為正常對照組(n=3,0.49±0.11%)的1.5倍(p0.05)。2.低氧后復氧的肺動脈高壓逆轉(zhuǎn)大鼠模型的鑒定低氧后復氧處理的大鼠paat逐漸升高。復氧6周組大鼠的paat(n=8,23.2±3.7ms)升高至低氧3周組(n=8,14.4±1.8ms)的1.6倍(p0.001),但復氧6周組大鼠的paat仍低于正常對照組(n=6,33.4±3.7ms)水平(p0.001)。而低氧后復氧處理的大鼠的rvwt、mpap、rvsp和rv/lv+s逐漸下降。復氧3周組(n=8)大鼠的rvwt降至0.65±0.05mm,與正常對照組(n=6,0.70±0.14ms)之間無差異(p0.05)。復氧6周組大鼠的mpap(n=8,19.25±3.54mmhg)與正常對照組(n=6,14.63±2.39mmhg)之間無差異,但仍高于正常對照組(n=6,23.33±1.90mmhg)(p0.001)。復氧3周組(n=8)大鼠的rv/lv+s下降至0.248±0.070,與正常對照組(n=6,0.225±0.021)和復氧6周組(n=8,0.253±0.034)之間均無差異。病理染色也提示復氧3周后右心重構(gòu)完全逆轉(zhuǎn),而大鼠肺血管重塑并未完全逆轉(zhuǎn)。相對于低氧3周組大鼠的wt%,復氧3周組(n=3,0.32±0.05%)大鼠的wt%下降了24%(p0.05),但復氧3周組大鼠的wt%仍高于正常對照組(p0.05)。復氧3周組(n=3)大鼠的wa%(0.54±0.08%)下降至低氧3周組的75%(p0.05),但與正常對照組(n=3,0.49±0.11%)之間并無差異(p0.05)。3.dnmts在正常對照組、低氧3周組和復氧3周組肺組織的表達情況dnmt1和dnmt3a蛋白在3組大鼠肺組織中的表達無差異。dnmt3b蛋白在低氧3周組大鼠和復氧3周組大鼠肺組織的表達量均是正常對照組的3倍(p0.05),而在低氧3周組大鼠和復氧3周組大鼠肺組織的表達無差異(p0.05)。dnmt3l蛋白在低氧3周組大鼠肺組織中的表達水平下降至正常對照組的59%(p0.05),復氧3周組大鼠肺組織中dnmt3l蛋白表達水平是低氧3周組的3倍(p0.05),與正常對照組相比無差異(p0.05)。肺組織的免疫組化結(jié)果顯示,dnmt3b蛋白主要表達于肌化的肺血管和支氣管平滑肌。dnmt3b蛋白在低氧3周組大鼠肺組織中表達明顯升高,而在復氧3周組大鼠肺組織中表達下降。4.dnmts在正常對照組、低氧3周和復氧3周組右心組織的表達情況dnmt1和dnmt3l在3組大鼠右心組織的表達無差異。dnmt3a蛋白在低氧3周組大鼠右心組織的表達水平與正常對照組之間無差異(p0.05),而復氧3周組大鼠右心組織中dnmt3a蛋白的表達量較低氧3周組下降40%(p0.05)。dnmt3b蛋白在低氧3周組大鼠右心組織的表達是正常對照組的1.88倍(P0.001),復氧3周組大鼠右心組織的表達量較低氧3周組下降41%(P0.01),與正常對照組無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.連續(xù)低氧3周大鼠的肺動脈平均壓和右心室肥厚指數(shù)均升高2倍,提示低氧誘導的肺動脈高壓模型構(gòu)建成功;2.復氧3周后大鼠的肺血管重塑和右心重構(gòu)均發(fā)生了部分或完全逆轉(zhuǎn);3.DNMTs家族中Dnmt3b在低氧誘導的肺血管重塑和右心重構(gòu)中均顯著升高,提示Dnmt3b可能在肺血管重塑和右心重構(gòu)中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:The expression of Dnmt1 , Dnmt3a , Dnmt3b and Dnmt3L in rats with hypoxic pulmonary hypertension was studied by Western blot and immunohistochemistry .
【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R544.1

【共引文獻】

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1 劉瀚e，

本文編號：2018550