本文選題：Idl + E2-2　； 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：[研究背景與研究目的]當(dāng)前冠心病、高血壓等慢性疾病發(fā)病率逐年升高,已經(jīng)成為威脅人們健康、影響社會發(fā)展的重要元兇之一。血管性疾病的基本病理改變是多種原因造成內(nèi)皮細胞損害、凋亡導(dǎo)致正常血管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和功能受損,進而啟動一系列血管的病變包括血管狹窄、血栓形成。因此,如何實現(xiàn)損傷血管的再內(nèi)皮化,恢復(fù)血管的正常功能和結(jié)構(gòu)是血管損傷性疾病的研究熱點。在此前的研究中人們發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細胞可以通過增殖、遷移并合成和分泌多種生物活性物質(zhì)修復(fù)受損的血管內(nèi)膜。但由于內(nèi)皮細胞為處于分化終末期的細胞,且病損部位的內(nèi)皮細胞增殖能力有限,不足以完成受損內(nèi)皮的修復(fù),因此,研究者把關(guān)注點逐漸投向了內(nèi)皮細胞的前體細胞,即血管內(nèi)皮祖細胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)。在缺血缺氧、細胞因子刺激、藥物作用、血管損傷等狀況下,EPCs可以從骨髓、脾臟處動員,“歸巢”至受損血管部位并增殖、分化成為內(nèi)皮細胞,還可以通過旁分泌等方式修復(fù)血管內(nèi)膜。但是,EPCs如何增殖、遷移到靶血管實現(xiàn)再內(nèi)皮化,其中的調(diào)控機制以及何種因子在起作用尚不十分明確。本課題組前期研究表明分化抑制因子1(Id-1)及轉(zhuǎn)錄因子E2-2在血管內(nèi)皮細胞及內(nèi)皮祖細胞增殖過程中起重要作用,但二者是否存在相互作用,及其對EPCs的影響效應(yīng)不甚清楚。本課題擬探討Id-1和E2-2相互作用對EPCs增殖的影響,并研究可能的調(diào)控機制。[方法]1.在課題組前期研究的基礎(chǔ)上通過密度梯度離心法分離、培養(yǎng)EPCs并使用細胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光及流式細胞儀對EPCs進行鑒定；2.購買慢病毒載體,通過PCR、酶切、測序進行鑒定并進行病毒的包裝及滴度檢測；3.在EPCs細胞模型中,采用免疫共沉淀檢測Id-1及E2-2是否存在相互作用,并過表達及干擾Id-1及E2-2,采用CCK-8法檢測細胞增殖情況,RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測PI3K及Akt表達水平。[結(jié)果]1.小鼠骨髓源性單個核細胞可定向分化為EPCs,且EPCs同時具有干細胞與內(nèi)皮細胞的雙重特性；2.購買的Idl和E2-2過表達和干擾慢病毒載體構(gòu)建成功,可用于后續(xù)實驗；3.Id-1和E2-2之間存在相互作用,Id-1對PI3K/Akt起促進作用,而E2-2則發(fā)揮抑制效應(yīng),二者協(xié)同調(diào)控PI3K/Akt信號通路,進而影響EPCs的增殖。[結(jié)論]研究結(jié)果顯示,Id-1和E2-2之間存在相互作用,并且兩者通過PI3K/Akt信號通路調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細胞EPCs的增殖。
[Abstract]:Background and objective: the incidence of coronary heart disease, hypertension and other chronic diseases has been increasing year by year, which has become one of the important culprits threatening people's health and affecting social development. The basic pathological changes of vascular diseases are caused by various causes of endothelial cell damage, apoptosis leading to normal intravascular membrane structure and function damage, and then start a series of vascular lesions, including vascular stenosis, thrombosis. Therefore, how to re-endothelialize the injured vessels and restore the normal function and structure of the vessels is a hot topic in the research of vascular injury diseases. In previous studies, it has been found that vascular endothelial cells can repair damaged vascular intima by proliferation, migration, synthesis and secretion of a variety of bioactive substances. But because the endothelial cells are at the end stage of differentiation, and the endothelial cells in the diseased site have limited proliferative ability, they are not enough to complete the repair of the damaged endothelial cells, so the researchers have gradually focused on the progenitor cells of the endothelial cells. That is Endothelial progenitor cells. Under the condition of ischemia and hypoxia, cytokine stimulation, drug action, vascular injury and so on, EPCs can be mobilized from bone marrow and spleen, "homing" to the injured vessel, proliferating and differentiating into endothelial cells. The vascular intima can also be repaired by paracrine. However, it is not clear how EPCs proliferate and migrate to target vessels for re-endothelialization. Our previous studies have shown that differentiation inhibitor 1- Id-1) and transcription factor E2-2 play an important role in the proliferation of vascular endothelial cells and endothelial progenitor cells, but whether there is interaction between them and their effects on EPCs is not clear. The purpose of this study was to investigate the effects of Id-1 and E2-2 interactions on the proliferation of EPCs and the possible regulatory mechanisms. [methods] 1. EPCs were isolated by density gradient centrifugation and identified by cell morphology, immunofluorescence and flow cytometry. The lentivirus vector was purchased and identified by PCR, enzyme digestion and sequencing, and the virus was packaged and titer detected. In EPCs cell model, immunoprecipitation was used to detect the interaction between Id-1 and E2-2, and overexpression and interference of Id-1 and E2-2. The expression of PI3K and Akt were detected by CCK-8 RT-PCR and Western blotting. [result] 1. Mouse bone marrow-derived mononuclear cells can differentiate into EPCs, and EPCs have the dual characteristics of stem cells and endothelial cells. The over expression of Idl and E2-2 and the construction of interfering lentivirus vectors were successfully constructed, which could be used to further study the interaction between Id-1 and E2-2. Id-1 promoted PI3K / Akt, while E2-2 played an inhibitory role. They coordinated the regulation of PI3K / Akt signaling pathway. And then affect the proliferation of EPCs. [conclusion] the results show that there is interaction between Id-1 and E2-2, and both of them regulate the proliferation of EPCs through PI3K / Akt signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54

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本文編號：2004832