本文選題：Idl + E2-2��； 參考：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：[研究背景與研究目的]當(dāng)前冠心病、高血壓等慢性疾病發(fā)病率逐年升高,已經(jīng)成為威脅人們健康、影響社會(huì)發(fā)展的重要元兇之一。血管性疾病的基本病理改變是多種原因造成內(nèi)皮細(xì)胞損害、凋亡導(dǎo)致正常血管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和功能受損,進(jìn)而啟動(dòng)一系列血管的病變包括血管狹窄、血栓形成。因此,如何實(shí)現(xiàn)損傷血管的再內(nèi)皮化,恢復(fù)血管的正常功能和結(jié)構(gòu)是血管損傷性疾病的研究熱點(diǎn)。在此前的研究中人們發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞可以通過(guò)增殖、遷移并合成和分泌多種生物活性物質(zhì)修復(fù)受損的血管內(nèi)膜。但由于內(nèi)皮細(xì)胞為處于分化終末期的細(xì)胞,且病損部位的內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力有限,不足以完成受損內(nèi)皮的修復(fù),因此,研究者把關(guān)注點(diǎn)逐漸投向了內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,即血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)。在缺血缺氧、細(xì)胞因子刺激、藥物作用、血管損傷等狀況下,EPCs可以從骨髓、脾臟處動(dòng)員,“歸巢”至受損血管部位并增殖、分化成為內(nèi)皮細(xì)胞,還可以通過(guò)旁分泌等方式修復(fù)血管內(nèi)膜。但是,EPCs如何增殖、遷移到靶血管實(shí)現(xiàn)再內(nèi)皮化,其中的調(diào)控機(jī)制以及何種因子在起作用尚不十分明確。本課題組前期研究表明分化抑制因子1(Id-1)及轉(zhuǎn)錄因子E2-2在血管內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖過(guò)程中起重要作用,但二者是否存在相互作用,及其對(duì)EPCs的影響效應(yīng)不甚清楚。本課題擬探討Id-1和E2-2相互作用對(duì)EPCs增殖的影響,并研究可能的調(diào)控機(jī)制。[方法]1.在課題組前期研究的基礎(chǔ)上通過(guò)密度梯度離心法分離、培養(yǎng)EPCs并使用細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫熒光及流式細(xì)胞儀對(duì)EPCs進(jìn)行鑒定；2.購(gòu)買(mǎi)慢病毒載體,通過(guò)PCR、酶切、測(cè)序進(jìn)行鑒定并進(jìn)行病毒的包裝及滴度檢測(cè)；3.在EPCs細(xì)胞模型中,采用免疫共沉淀檢測(cè)Id-1及E2-2是否存在相互作用,并過(guò)表達(dá)及干擾Id-1及E2-2,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測(cè)PI3K及Akt表達(dá)水平。[結(jié)果]1.小鼠骨髓源性單個(gè)核細(xì)胞可定向分化為EPCs,且EPCs同時(shí)具有干細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的雙重特性；2.購(gòu)買(mǎi)的Idl和E2-2過(guò)表達(dá)和干擾慢病毒載體構(gòu)建成功,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；3.Id-1和E2-2之間存在相互作用,Id-1對(duì)PI3K/Akt起促進(jìn)作用,而E2-2則發(fā)揮抑制效應(yīng),二者協(xié)同調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路,進(jìn)而影響EPCs的增殖。[結(jié)論]研究結(jié)果顯示,Id-1和E2-2之間存在相互作用,并且兩者通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細(xì)胞EPCs的增殖。
[Abstract]:Background and objective: the incidence of coronary heart disease, hypertension and other chronic diseases has been increasing year by year, which has become one of the important culprits threatening people's health and affecting social development. The basic pathological changes of vascular diseases are caused by various causes of endothelial cell damage, apoptosis leading to normal intravascular membrane structure and function damage, and then start a series of vascular lesions, including vascular stenosis, thrombosis. Therefore, how to re-endothelialize the injured vessels and restore the normal function and structure of the vessels is a hot topic in the research of vascular injury diseases. In previous studies, it has been found that vascular endothelial cells can repair damaged vascular intima by proliferation, migration, synthesis and secretion of a variety of bioactive substances. But because the endothelial cells are at the end stage of differentiation, and the endothelial cells in the diseased site have limited proliferative ability, they are not enough to complete the repair of the damaged endothelial cells, so the researchers have gradually focused on the progenitor cells of the endothelial cells. That is Endothelial progenitor cells. Under the condition of ischemia and hypoxia, cytokine stimulation, drug action, vascular injury and so on, EPCs can be mobilized from bone marrow and spleen, "homing" to the injured vessel, proliferating and differentiating into endothelial cells. The vascular intima can also be repaired by paracrine. However, it is not clear how EPCs proliferate and migrate to target vessels for re-endothelialization. Our previous studies have shown that differentiation inhibitor 1- Id-1) and transcription factor E2-2 play an important role in the proliferation of vascular endothelial cells and endothelial progenitor cells, but whether there is interaction between them and their effects on EPCs is not clear. The purpose of this study was to investigate the effects of Id-1 and E2-2 interactions on the proliferation of EPCs and the possible regulatory mechanisms. [methods] 1. EPCs were isolated by density gradient centrifugation and identified by cell morphology, immunofluorescence and flow cytometry. The lentivirus vector was purchased and identified by PCR, enzyme digestion and sequencing, and the virus was packaged and titer detected. In EPCs cell model, immunoprecipitation was used to detect the interaction between Id-1 and E2-2, and overexpression and interference of Id-1 and E2-2. The expression of PI3K and Akt were detected by CCK-8 RT-PCR and Western blotting. [result] 1. Mouse bone marrow-derived mononuclear cells can differentiate into EPCs, and EPCs have the dual characteristics of stem cells and endothelial cells. The over expression of Idl and E2-2 and the construction of interfering lentivirus vectors were successfully constructed, which could be used to further study the interaction between Id-1 and E2-2. Id-1 promoted PI3K / Akt, while E2-2 played an inhibitory role. They coordinated the regulation of PI3K / Akt signaling pathway. And then affect the proliferation of EPCs. [conclusion] the results show that there is interaction between Id-1 and E2-2, and both of them regulate the proliferation of EPCs through PI3K / Akt signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊晨,楊仁池,韓忠朝;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2002年05期

2 曲曉義,金惠銘;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞與缺血性心血管病的血管新生[J];中國(guó)病理生理雜志;2003年03期

3 嚴(yán)軼文;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞和血管新生的研究進(jìn)展[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2003年01期

4 李崇劍,高潤(rùn)霖;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞研究進(jìn)展[J];中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志;2004年06期

5 梅雀林,劉鵬程,李彥豪;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞在血管生物學(xué)中的作用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年25期

6 賈琴;常青;李自成;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究現(xiàn)狀與展望[J];廣東醫(yī)學(xué);2006年01期

7 馬占龍;滕皋軍;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究及其在介入治療中的應(yīng)用前景[J];中國(guó)介入影像與治療學(xué);2006年02期

8 徐燕;王國(guó)蓉;邱錄貴;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中華血液學(xué)雜志;2006年01期

9 肖麗;王貴學(xué);唐朝君;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中華心血管病雜志;2006年07期

10 陳圖剛;陳君柱;;成人血管內(nèi)皮祖細(xì)胞與血管新生[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2006年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊龍江;侯健;;血小板因子4和其片段對(duì)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的抑制作用[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

2 馬占龍;滕皋軍;麥筱莉;鄧剛;孫軍輝;張洪英;牛煥章;余輝;李國(guó)昭;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞局部移植防治血管內(nèi)膜損傷后頸動(dòng)脈局部粥樣硬化性狹窄形成的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2006年

3 程鋮;楊向軍;;兔骨髓源血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外培養(yǎng)與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第十次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2008年

4 苗雷英;劉超;孫宏晨;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞在牙周損傷中的作用及機(jī)制研究[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 李肖霞;宋一萌;朱振久;付成來(lái);李承紅;朱毅;;轉(zhuǎn)錄因子KLFs在血管內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖分化中的作用[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 楊瑞瑞;程焱;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員及對(duì)腦梗死治療的實(shí)驗(yàn)研究[A];第十一屆全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

7 程鋮;楊向軍;;辛伐他汀對(duì)炎癥損傷后血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第十次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2008年

8 呂海濤;孫凌;張建敏;曹磊;嚴(yán)文華;謝宇鋒;盛偉華;楊吉成;李紅霞;韓蓮花;楊向軍;;VEGF165基因修飾外周血血管內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)血管新生[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

9 李崇劍;高潤(rùn)霖;劉玉清;宋曉東;閆笑梅;孟亮;宋來(lái)鳳;阮英茆;陳紀(jì)林;楊躍進(jìn);秦學(xué)文;;小型豬外周血來(lái)源的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外培養(yǎng)與分化研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)第八次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2004年

10 馬占龍;滕皋軍;麥筱莉;孫軍輝;張洪英;鄧剛;余輝;李國(guó)昭;;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞防治血管內(nèi)皮損傷的MR研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前5條

1 孫建明;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞在肢體缺血時(shí)的血管新生作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

2 王海燕;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的基因修飾與體外三維培養(yǎng)的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

3 陳聰;磁化標(biāo)記成人外周血源性血管內(nèi)皮祖細(xì)胞在肺癌異種移植瘤的7.0T磁共振示蹤[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 陳圖剛;阿司匹林對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量與功能及其iNOS的影響[D];浙江大學(xué);2006年

5 王盛;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮祖細(xì)胞治療肢體缺血[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬陽(yáng);Id1和E2-2相互作用調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

2 李冉;AMD3100聯(lián)合G-CSF動(dòng)員糖尿病鼠骨髓EPCs的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

3 李鵬;中藥聯(lián)合血管內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療下肢動(dòng)脈硬化性閉塞癥的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

4 代明勝;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療動(dòng)脈硬化閉塞的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

5 張承韶;骨髓來(lái)源的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞移植治療下肢缺血的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2007年

6 程鋮;辛伐他汀對(duì)炎癥損傷后血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的干預(yù)研究[D];蘇州大學(xué);2007年

7 楊瑞瑞;血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員及其對(duì)腦梗死治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

8 彭瑜;氟伐他汀對(duì)體外血管內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化損傷保護(hù)作用的研究[D];蘭州大學(xué);2006年

9 于小濱;pcDNA3.0-hVEGF165的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外研究[D];蘇州大學(xué);2007年

10 孫寧;HGF基因轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)血管生成的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：2004832