發(fā)布時(shí)間：2018-05-30 14:01

  本文選題：Anti-miR-21 + 內(nèi)皮型一氧化氮合酶��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:前期研究發(fā)現(xiàn),miR-21反義寡核苷酸(AS-miR-21)能顯著抑制AP1和eNOS蛋白表達(dá),轉(zhuǎn)錄因子AP1在AS-miR-21對(duì)eNOS的表達(dá)調(diào)節(jié)中起重要作用。進(jìn)一步研究anti-miR-21對(duì)AngⅡ刺激下內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因表達(dá)調(diào)節(jié)的分子機(jī)制及其對(duì)體外血管形成的影響。1研究anti-miR-21對(duì)AngⅡ刺激下內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因表達(dá)調(diào)節(jié)的分子機(jī)制;2探討anti-miR-21抑制AngⅡ刺激下內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移的機(jī)制及其對(duì)體外血管形成的影響;3闡明內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成的分子機(jī)制,深入探討anti-miR-21在心血管系統(tǒng)發(fā)育和心血管疾病中的作用。方法:1檢測(cè)anti-miR-21對(duì)AngⅡ刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS和Ap1表達(dá)的影響構(gòu)建anti-miR-21高表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)X-treme GENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑將anti-miR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)內(nèi),根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶UVECs分為3組:對(duì)照組、AngⅡ組和anti-miR-21+AngⅡ組。采用硝酸還原酶法檢測(cè)細(xì)胞上清液的NO濃度;RT-PCR法分別檢測(cè)eNOS和AP1 mRNA表達(dá)水平、免疫組化和免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)分別檢測(cè)eNOS和AP1蛋白表達(dá)情況。2檢測(cè)anti-miR-21對(duì)AngⅡ刺激下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成的影響構(gòu)建anti-miR-21高表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)X-treme GENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑將anti-miR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)內(nèi),根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶UVECs分為3組:對(duì)照組、AngⅡ組和anti-miR-21+AngⅡ組。觀測(cè)HUVECs的增殖(四甲基偶氮唑鹽,MTT法)、遷移(細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn))、凋亡(流式細(xì)胞術(shù))和血管形成(人工基底膜,Matrigel法)等生物學(xué)行為的改變。3檢測(cè)anti-miR-21對(duì)AngⅡ刺激下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成的分子機(jī)制構(gòu)建anti-miR-21高表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)X-treme GENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑將anti-miR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)內(nèi),根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶UVECs分為3組:對(duì)照組、AngⅡ組和anti-miR-21+AngⅡ組。采用PCR法檢測(cè)經(jīng)AngⅡ刺激后miR-21的表達(dá)情況;采用免疫印跡實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)CD31和VEGFR2蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1與對(duì)照組比較,AngⅡ組HUVECs的AP1與eNOS mRNA和蛋白表達(dá)均增加(P0.05),而轉(zhuǎn)染anti-miR-21對(duì)其mRNA和蛋白表達(dá)都起到抑制作用(P0.05)。2與對(duì)照組比較,AngⅡ組細(xì)胞增殖明顯上升(P0.05),遷移數(shù)目上升(P0.05),凋亡率下降(P0.05),形成管腔能力增強(qiáng),而轉(zhuǎn)染anti-miR-21均可對(duì)上述生物學(xué)行為起到抑制作用。3與對(duì)照組比較,Ang II刺激6h組和刺激24h組的miR-21 mRNA表達(dá)量均升高(P0.01),但隨著刺激時(shí)間的增長(zhǎng),miR-21 mRNA表達(dá)量有所下降(P0.01);AngⅡ組HUVECs的CD31與VEGFR2蛋白表達(dá)均增加(P0.05),而轉(zhuǎn)染anti-miR-21對(duì)其蛋白表達(dá)都起到抑制作用(P0.05)。結(jié)論:1 Anti-miR-21明顯抑制AngⅡ刺激下HUVECs eNOS的表達(dá);轉(zhuǎn)錄因子AP1的參與可能是這一調(diào)節(jié)過(guò)程的重要分子機(jī)制之一。2 Anti-miR-21明顯抑制AngⅡ刺激下HUVECs的增殖、遷移、凋亡和血管形成能力,并且與其調(diào)控eNOS的表達(dá)有關(guān)。3 miR-21可能作為一個(gè)重要因子參與Ang II對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Objective: Previous studies have found that miR-21 antisense oligonucleotides (AS-miR-21) can significantly inhibit the expression of AP1 and eNOS proteins. The transcription factor AP1 plays an important role in the regulation of AS-miR-21 on the expression of eNOS. The molecular mechanism of anti-miR-21 on the regulation of endothelial nitric oxide synthase gene expression under Ang II stimulation and its angiogenesis in vitro are further studied. The effect of.1 on the molecular mechanism of anti-miR-21 regulating the expression of endothelial nitric oxide synthase gene expression under Ang II stimulation; 2 to explore the mechanism of anti-miR-21 inhibition of proliferation and migration of endothelial cells under Ang II stimulated by Ang II and its effect on the angiogenesis in vitro; 3 to elucidate the molecular mechanism of endothelial cell proliferation, migration and angiogenesis, and to explore anti-mi in depth. The role of R-21 in cardiovascular system development and cardiovascular disease. Methods: 1 detect the effect of anti-miR-21 on the expression of eNOS and Ap1 in human umbilical vein endothelial cells stimulated by Ang II, construct a anti-miR-21 high expression plasmid and transfect anti-miR-21 plasmid into human umbilical vein endothelial cells through X-treme GENE HP DNA transfection reagent. In elial cells, HUVECs), HUVECs was divided into 3 groups according to the purpose of the experiment: the control group, the Ang II group and the anti-miR-21+Ang II group. The concentration of NO in the cell supernatant was detected by the nitrate reductase method; RT-PCR method was used to detect the eNOS and AP1 mRNA expression level. Immunohistochemistry and immunoblotting were used to detect the expression of the protein and the expression of the protein respectively. .2 detected the effect of anti-miR-21 on the proliferation, migration and angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells stimulated by Ang II to construct anti-miR-21 high expression plasmid and transfect anti-miR-21 plasmids into human umbilical vein endothelial cells via X-treme GENE HP DNA transfection reagent (Human umbilical vein). ECs was divided into 3 groups: control group, Ang II group and group anti-miR-21+Ang II. Observation of HUVECs proliferation (four methyl azazolate, MTT method), migration (cell scratch test), apoptosis (flow cytometry) and vascular formation (artificial basal membrane, Matrigel) and other biological behavior changes.3 detection anti-miR-21 on Ang II stimulation of human umbilical vein endothelial cells proliferation, Anti-miR-21 high expression plasmid was constructed by molecular mechanism of migration and angiogenesis. The anti-miR-21 plasmid was transfected into human umbilical vein endothelial cells via X-treme GENE HP DNA transfection reagent (Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs). The experimental purposes were divided into 3 groups: control group, group II and group II. CR was used to detect the expression of miR-21 after Ang II stimulation, and the expression of CD31 and VEGFR2 protein was detected by immunoblotting. Results: 1 compared with the control group, the AP1 and eNOS mRNA and protein expression of HUVECs in the Ang II group increased (P0.05), and the transfection anti-miR-21 played an inhibitory effect on the expression of the protein and the protein in the control group. The proliferation of cells in Ang II group increased significantly (P0.05), the number of migration increased (P0.05), the rate of apoptosis decreased (P0.05), and the capacity of the lumen increased, while anti-miR-21 transfected with anti-miR-21 could inhibit the biological behavior of the above-mentioned biological behavior compared with the control group. Ang II stimulated the 6h group and the stimulus 24h group of miR-21 mRNA. The expression of miR-21 mRNA decreased (P0.01), the CD31 and VEGFR2 protein expression of HUVECs in group Ang II increased (P0.05), and the transfection of anti-miR-21 on its protein expression was inhibited (P0.05). Conclusion: 1 Anti-miR-21 obviously inhibited the expression of Ang II stimulated. .2 Anti-miR-21, one of the important molecular mechanisms of the process, obviously inhibits the proliferation, migration, apoptosis and angiogenesis of HUVECs stimulated by Ang II, and that.3 miR-21 may be an important factor involved in the regulation of Ang II on the angiogenesis of endothelial cells.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R54

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6 丁s，

本文編號(hào)：1955555