本文選題：Anti-miR-21 + 內(nèi)皮型一氧化氮合酶��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:前期研究發(fā)現(xiàn),miR-21反義寡核苷酸(AS-miR-21)能顯著抑制AP1和eNOS蛋白表達,轉(zhuǎn)錄因子AP1在AS-miR-21對eNOS的表達調(diào)節(jié)中起重要作用。進一步研究anti-miR-21對AngⅡ刺激下內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因表達調(diào)節(jié)的分子機制及其對體外血管形成的影響。1研究anti-miR-21對AngⅡ刺激下內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因表達調(diào)節(jié)的分子機制;2探討anti-miR-21抑制AngⅡ刺激下內(nèi)皮細胞增殖、遷移的機制及其對體外血管形成的影響;3闡明內(nèi)皮細胞增殖、遷移和血管形成的分子機制,深入探討anti-miR-21在心血管系統(tǒng)發(fā)育和心血管疾病中的作用。方法:1檢測anti-miR-21對AngⅡ刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞eNOS和Ap1表達的影響構(gòu)建anti-miR-21高表達質(zhì)粒,通過X-treme GENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑將anti-miR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)內(nèi),根據(jù)實驗?zāi)康膶UVECs分為3組:對照組、AngⅡ組和anti-miR-21+AngⅡ組。采用硝酸還原酶法檢測細胞上清液的NO濃度;RT-PCR法分別檢測eNOS和AP1 mRNA表達水平、免疫組化和免疫印跡實驗(Western blotting)分別檢測eNOS和AP1蛋白表達情況。2檢測anti-miR-21對AngⅡ刺激下人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖、遷移和血管形成的影響構(gòu)建anti-miR-21高表達質(zhì)粒,通過X-treme GENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑將anti-miR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)內(nèi),根據(jù)實驗?zāi)康膶UVECs分為3組:對照組、AngⅡ組和anti-miR-21+AngⅡ組。觀測HUVECs的增殖(四甲基偶氮唑鹽,MTT法)、遷移(細胞劃痕實驗)、凋亡(流式細胞術(shù))和血管形成(人工基底膜,Matrigel法)等生物學(xué)行為的改變。3檢測anti-miR-21對AngⅡ刺激下人臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖、遷移和血管形成的分子機制構(gòu)建anti-miR-21高表達質(zhì)粒,通過X-treme GENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑將anti-miR-21質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)內(nèi),根據(jù)實驗?zāi)康膶UVECs分為3組:對照組、AngⅡ組和anti-miR-21+AngⅡ組。采用PCR法檢測經(jīng)AngⅡ刺激后miR-21的表達情況;采用免疫印跡實驗分別檢測CD31和VEGFR2蛋白表達情況。結(jié)果:1與對照組比較,AngⅡ組HUVECs的AP1與eNOS mRNA和蛋白表達均增加(P0.05),而轉(zhuǎn)染anti-miR-21對其mRNA和蛋白表達都起到抑制作用(P0.05)。2與對照組比較,AngⅡ組細胞增殖明顯上升(P0.05),遷移數(shù)目上升(P0.05),凋亡率下降(P0.05),形成管腔能力增強,而轉(zhuǎn)染anti-miR-21均可對上述生物學(xué)行為起到抑制作用。3與對照組比較,Ang II刺激6h組和刺激24h組的miR-21 mRNA表達量均升高(P0.01),但隨著刺激時間的增長,miR-21 mRNA表達量有所下降(P0.01);AngⅡ組HUVECs的CD31與VEGFR2蛋白表達均增加(P0.05),而轉(zhuǎn)染anti-miR-21對其蛋白表達都起到抑制作用(P0.05)。結(jié)論:1 Anti-miR-21明顯抑制AngⅡ刺激下HUVECs eNOS的表達;轉(zhuǎn)錄因子AP1的參與可能是這一調(diào)節(jié)過程的重要分子機制之一。2 Anti-miR-21明顯抑制AngⅡ刺激下HUVECs的增殖、遷移、凋亡和血管形成能力,并且與其調(diào)控eNOS的表達有關(guān)。3 miR-21可能作為一個重要因子參與Ang II對內(nèi)皮細胞血管生成的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Objective: Previous studies have found that miR-21 antisense oligonucleotides (AS-miR-21) can significantly inhibit the expression of AP1 and eNOS proteins. The transcription factor AP1 plays an important role in the regulation of AS-miR-21 on the expression of eNOS. The molecular mechanism of anti-miR-21 on the regulation of endothelial nitric oxide synthase gene expression under Ang II stimulation and its angiogenesis in vitro are further studied. The effect of.1 on the molecular mechanism of anti-miR-21 regulating the expression of endothelial nitric oxide synthase gene expression under Ang II stimulation; 2 to explore the mechanism of anti-miR-21 inhibition of proliferation and migration of endothelial cells under Ang II stimulated by Ang II and its effect on the angiogenesis in vitro; 3 to elucidate the molecular mechanism of endothelial cell proliferation, migration and angiogenesis, and to explore anti-mi in depth. The role of R-21 in cardiovascular system development and cardiovascular disease. Methods: 1 detect the effect of anti-miR-21 on the expression of eNOS and Ap1 in human umbilical vein endothelial cells stimulated by Ang II, construct a anti-miR-21 high expression plasmid and transfect anti-miR-21 plasmid into human umbilical vein endothelial cells through X-treme GENE HP DNA transfection reagent. In elial cells, HUVECs), HUVECs was divided into 3 groups according to the purpose of the experiment: the control group, the Ang II group and the anti-miR-21+Ang II group. The concentration of NO in the cell supernatant was detected by the nitrate reductase method; RT-PCR method was used to detect the eNOS and AP1 mRNA expression level. Immunohistochemistry and immunoblotting were used to detect the expression of the protein and the expression of the protein respectively. .2 detected the effect of anti-miR-21 on the proliferation, migration and angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells stimulated by Ang II to construct anti-miR-21 high expression plasmid and transfect anti-miR-21 plasmids into human umbilical vein endothelial cells via X-treme GENE HP DNA transfection reagent (Human umbilical vein). ECs was divided into 3 groups: control group, Ang II group and group anti-miR-21+Ang II. Observation of HUVECs proliferation (four methyl azazolate, MTT method), migration (cell scratch test), apoptosis (flow cytometry) and vascular formation (artificial basal membrane, Matrigel) and other biological behavior changes.3 detection anti-miR-21 on Ang II stimulation of human umbilical vein endothelial cells proliferation, Anti-miR-21 high expression plasmid was constructed by molecular mechanism of migration and angiogenesis. The anti-miR-21 plasmid was transfected into human umbilical vein endothelial cells via X-treme GENE HP DNA transfection reagent (Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs). The experimental purposes were divided into 3 groups: control group, group II and group II. CR was used to detect the expression of miR-21 after Ang II stimulation, and the expression of CD31 and VEGFR2 protein was detected by immunoblotting. Results: 1 compared with the control group, the AP1 and eNOS mRNA and protein expression of HUVECs in the Ang II group increased (P0.05), and the transfection anti-miR-21 played an inhibitory effect on the expression of the protein and the protein in the control group. The proliferation of cells in Ang II group increased significantly (P0.05), the number of migration increased (P0.05), the rate of apoptosis decreased (P0.05), and the capacity of the lumen increased, while anti-miR-21 transfected with anti-miR-21 could inhibit the biological behavior of the above-mentioned biological behavior compared with the control group. Ang II stimulated the 6h group and the stimulus 24h group of miR-21 mRNA. The expression of miR-21 mRNA decreased (P0.01), the CD31 and VEGFR2 protein expression of HUVECs in group Ang II increased (P0.05), and the transfection of anti-miR-21 on its protein expression was inhibited (P0.05). Conclusion: 1 Anti-miR-21 obviously inhibited the expression of Ang II stimulated. .2 Anti-miR-21, one of the important molecular mechanisms of the process, obviously inhibits the proliferation, migration, apoptosis and angiogenesis of HUVECs stimulated by Ang II, and that.3 miR-21 may be an important factor involved in the regulation of Ang II on the angiogenesis of endothelial cells.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R54

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本文編號：1955555