本文選題：Micro-RNA + DNA甲基化�。� 參考：《浙江大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究理由：致心律失常性心肌病特征性的心肌細胞脂肪化改變的病理機制尚不明確研究目的：研究Micro-RNA (miRNA)在致心律失常性心肌病(AC)發(fā)病機制中的作用研究方法與結(jié)果：對HL-1及Pkp2敲低HL-1心肌細胞(HL-1 Pkp2-shRNA)進行了含有750個miRNA的芯片篩查,發(fā)現(xiàn)了59個顯著性差異表達的miRNA.其中miRNA-184 (miR-184)是在tHL_1Pkp2-shRNA中較對照組細胞表達下降最顯著的一個miRNA.同時,miR-184在AC小鼠模型的心臟組織及心肌細胞中均較正常小鼠顯著降低。miR-184在非成熟心肌細胞及心臟CD44+間充質(zhì)祖細胞中表達最高,并且其表達量隨心臟的發(fā)育逐漸降低。染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)實驗表明,在AC模型中被抑制的E2F信號通路通過E2F1與miR-184 5’基因區(qū)域結(jié)合而調(diào)控miR-184的表達。通過對E2F1激動劑CCND1的過表達或?qū)2F1抑制劑RB1的抑制,均能增加miR-184的表達。另一方面,ChIP實驗發(fā)現(xiàn)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1 (DNMT1)在HL-1 Pkp2-shRNA心肌細胞中與miR-184啟動子區(qū)域大量結(jié)合,導(dǎo)致CpG位點過度甲基化,從而使miR-184表達受到沉默。去甲基化藥物5-Aza-2'-Deoxycytidine (5-Aza-D)的使用以及轉(zhuǎn)染針對Dnmtl的shRNA以抑制Dnmtl的表達均能增加miR-184的表達。在將miR-184的預(yù)測靶基因與HL-1和HL-1 Pkp2-ShRNA心肌細胞中差異表達的基因進行的配對研究顯示,差異表達的miR-184靶基因在細胞生長,分化及死亡過程中起到主要作用。其中,Agpatl及Agpat3這兩個脂肪代謝中的關(guān)鍵參與基因,被證明是miR-184的直接作用靶點。在HL-1及心臟CD44+細胞中進行的脂肪分化誘導(dǎo)實驗中,miR-184敲低組與對照組相比均能更顯著的誘導(dǎo)心肌細胞脂肪化。反之,miR-184過表達組與對照組相比則能夠抑制心肌細胞脂肪化。結(jié)論與創(chuàng)新：本文第一次在AC模型中進行microRNA芯片篩查,發(fā)現(xiàn)miR-184表達量在AC細胞及小鼠模型中均顯著下降,其下降機制包括E2F1通路的抑制及miR-184啟動子區(qū)域的過度甲基化。同時,本文第一次發(fā)現(xiàn)miR-184的降低能夠增加心肌細胞脂肪化從而參與了AC疾病的病理過程。
[Abstract]:Research reasons: the pathological mechanism of the characteristic fatty changes of cardiomyocytes in arrhythmia cardiomyopathy remains unclear objective: to study the role of Micro-RNA in the pathogenesis of arrhythmic cardiomyopathy Fruit: HL-1 and Pkp2 knockout HL-1 cardiomyocytes HL-1 Pkp2-shRNAs were screened with 750 miRNA microarrays. 59 differentially expressed miRNAs were found. The expression of miRNA in tHL_1Pkp2-shRNA was significantly decreased compared with that in control group. At the same time, the expression of miR-184 in heart tissue and cardiomyocytes of AC mouse model was significantly lower than that in normal mice. The expression of miR-184 was the highest in immature cardiomyocytes and cardiac CD44 mesenchymal progenitor cells, and its expression decreased gradually with the development of heart. Chromatin immunoprecipitation assay showed that the inhibited E2F signaling pathway regulated the expression of miR-184 through the binding of E2F1 to miR-184 5 'gene region in AC model. The expression of miR-184 was increased by overexpression of E2F1 agonist CCND1 or inhibition of E2F1 inhibitor RB1. On the other hand, we found that DNA methyltransferase 1 (DNMT1) binds to miR-184 promoter region in HL-1 Pkp2-shRNA cardiomyocytes, resulting in hypermethylation of CpG site and silencing of miR-184 expression. The use of demethylating drug 5-Aza-2'-Deoxycytidine 5-Aza-Dand the transfection of shRNA targeting Dnmtl to inhibit the expression of Dnmtl could increase the expression of miR-184. A pairing study of predicted target genes of miR-184 and differentially expressed genes in HL-1 and HL-1 Pkp2-ShRNA cardiomyocytes showed that differentially expressed miR-184 target genes played a major role in cell growth, differentiation and death. The two key genes involved in fat metabolism, such as Agpatl and Agpat3, have been proved to be the direct targets of miR-184. In the adipose differentiation induction experiment of HL-1 and cardiac CD44 cells, the myocytes in the low knockout group of miR-184 were significantly more likely to induce adipogenesis than those in the control group. On the contrary, the overexpression of miR-184 could inhibit the adipogenesis of cardiomyocytes compared with the control group. Conclusion and innovation: microRNA microarray screening was performed in AC model for the first time. It was found that the expression of miR-184 decreased significantly in both AC cells and mouse models. The mechanism of the decrease included the inhibition of E2F1 pathway and hypermethylation of miR-184 promoter region. At the same time, we found for the first time that the decrease of miR-184 could increase the adipogenesis of cardiac myocytes and participate in the pathological process of AC disease.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R541.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 聶亞東,高廣生,李晶;西維爾治療心肌病25例[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2000年05期

2 鄒玉寶;誠懇邀請參加大規(guī)模的心肌病合作研究[J];中華心血管病雜志;2001年09期

3 東陽,韓琳,趙素萍;彩色多普勒超聲心動圖診斷擴張性心肌病的六大要點[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2002年05期

4 惠汝太;心肌病合作通報[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2002年03期

5 惠汝太;心肌病合作通報[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2002年04期

6 惠汝太;心肌病合作通報[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2002年05期

7 狄柯坪 ,馬永鵬;定量分析恰加斯性心肌病犬心肌的損傷[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);2004年02期

8 徐成斌;評《代謝性心肌病》[J];中華心血管病雜志;2004年07期

9 張莉,嚴(yán)勤,周殷;以分支型室速為首發(fā)表現(xiàn)的心肌病1例[J];航空航天醫(yī)藥;2004年03期

10 林琳,高崇德,劉海英;多普勒超聲心動圖對擴張性心肌病的診斷價值[J];云南醫(yī)藥;2004年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 吳峗;姜蓉蓉;吳虹;;老年擴張性心肌病的觀察與護理體會[A];河南省心血管疾病護理新進展學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

2 郭航遠;沙振球;馬孝泉;;應(yīng)重視老年人心肌病的臨床研究[A];2006年浙江省心血管病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

3 吳峗;姜蓉蓉;吳虹;;老年擴張性心肌病的觀察與護理體會[A];中華護理學(xué)會全國內(nèi)科護理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2009年

4 楊天潼;于曉軍;郭昌茂;呂俊耀;;未分類型心肌病猝死1例[A];中國法醫(yī)學(xué)最新科研與實踐（二）——全國第七次法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文精選[C];2004年

5 孫海燕;;心肌病的超聲診斷進展[A];2004年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

6 郭航遠;李鐘大;沙振球;馬孝泉;;應(yīng)重視老年人心肌病的臨床研究[A];2006年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會、2006年浙江省老年醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

7 廖玉華;;心肌病診治進展[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2006年

8 廖玉華;;心肌病新分類方法[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

9 吳祥;王建安;;擴張性心肌病心電圖表現(xiàn)的新老理念[A];2011年浙江省心電生理與起搏學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

10 姜學(xué)麗;;心肌病的臨床新進展[A];全國心臟內(nèi)、外科�？谱o理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 教授 羅學(xué)宏;貪杯引來心肌病[N];大眾衛(wèi)生報;2013年

2 盧曉娣 姚燕萍;心肌病需系統(tǒng)治療[N];家庭醫(yī)生報;2006年

3 通訊員 吳力勇 本報記者 衣曉峰 靳萬慶;運動康復(fù)對心肌病人很重要[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

4 林鎮(zhèn)南;心肌炎與心肌病[N];民族醫(yī)藥報;2007年

5 韓詠霞;孕婦心肌病別忽視腹中胎兒[N];衛(wèi)生與生活報;2007年

6 林琳 寒冰;乳腺癌化療可增加心肌病風(fēng)險[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 李華虹 方若冰;我省改良Konno手術(shù)治療心肌病[N];黑龍江經(jīng)濟報;2010年

8 袁立新;手術(shù)治療擴張性心肌病在深獲成功[N];中國醫(yī)藥報;2000年

9 石家莊長城中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心肌病研究室;心肌病治療得法也可恢復(fù)健康[N];家庭醫(yī)生報;2007年

10 于麗珊 邢冬梅;奮力拼搏筑“長城”[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 張雨婷;兒童心肌病的臨床特點、影像分析及基因突變篩查[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳曉帆;MicroRNA-184在致心律失常性心肌病中的病理作用機制研究[D];浙江大學(xué);2016年

3 張昕;內(nèi)皮祖細胞聯(lián)合間充質(zhì)干細胞治療異丙腎上腺素?fù)p傷性心肌病效果與機制的研究[D];上海交通大學(xué);2008年

4 柳勝華;左室心肌致密化不全型心肌病分子遺傳機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

5 張斌;左心室動脈偶聯(lián)在膿毒性心肌病中的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

6 黃為;結(jié)蛋白相關(guān)心肌病發(fā)病機制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張陽陽;自噬在Hsp27致心肌病中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

2 陳智軍;心肌病心源性猝死危險分層預(yù)測參數(shù)探討[D];南昌大學(xué);2010年

3 饒姣;兒童心肌病的遺傳代謝病因分析及相關(guān)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

4 李楊;骨髓間充質(zhì)干細胞移植改善心肌病大鼠心功能的相關(guān)基因篩選與克隆[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

5 曾施;速度矢量成像定量評價心肌病左心長軸功能的研究[D];中南大學(xué);2007年

6 龐潔;Takotsubo心肌病診治2例[D];浙江大學(xué);2011年

7 張霞;小鼠心肌特異性高表達Hsp27誘導(dǎo)還原應(yīng)激及心肌病[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

8 王俊紅;細胞凋亡與心動過速性心肌病的動物實驗研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2007年

9 汝鵬;應(yīng)激性心肌病的研究進展[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

10 李發(fā)有;云南地區(qū)一個心肌病家系的致病基因篩查及基因型與表型關(guān)系的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1948264