本文選題：Exo70 + 血管平滑肌細胞��； 參考：《山東師范大學》2017年碩士論文

【摘要】：血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)是血管中膜的重要組成成分,它的異常增殖與遷移在高血壓、動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、血管成形術(shù)后再狹窄等心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。胞外分泌復合體(exocyst)是一個由從酵母到人類進化上保守的八個亞基蛋白質(zhì)構(gòu)成的復合結(jié)構(gòu),在細胞的胞外分泌過程發(fā)揮主要作用。Exo70是exocyst中的關(guān)鍵組分,它在酵母中主要參與分泌囊泡與靶膜的錨定與融合。而在哺乳動物細胞中,Exo70不僅參與了細胞分泌,在HeLa等多類細胞的遷移過程中也發(fā)揮作用。為了進一步明確Exo70在血管平滑肌由中膜向內(nèi)膜遷移過程中的作用,本實驗以血管平滑肌細胞A7r5細胞作為實驗研究對象,利用細胞生物學、分子生物學、生物化學等實驗方法,對Exo70在A7r5細胞中的表達和定位情況,以及Exo70功能缺失前后A7r5細胞遷移和侵襲能力的變化等方面進行了研究。主要實驗結(jié)果如下:(1)Exo70在平滑肌細胞A7r5中的表達情況RT-PCR及免疫熒光檢測結(jié)果表明,在A7r5細胞中Exo70可以在mRNA水平和蛋白水平上表達,且Exo70的表達主要分布于A7r5細胞的胞質(zhì)中。(2)Exo70在A7r5細胞中的亞細胞定位利用免疫熒光標記法檢測了A7r5細胞中Exo70與細胞骨架的共定位情況。實驗結(jié)果顯示,在A7r5細胞中Exo70是與Actin存在共定位的,與Tublin并不存在共定位現(xiàn)象。為了進一步驗證該結(jié)果,利用細胞松弛素B處理細胞1h后,Actin發(fā)生了解聚,與此同時Exo70在胞質(zhì)中的分布呈現(xiàn)出彌散狀,該實驗表明Exo70是與微絲相互作用從而發(fā)揮功能的。利用免疫熒光雙標記檢測了A7r5劃傷體系中Exo70的定位情況。結(jié)果顯示,Exo70與Actin共定位于遷移的A7r5細胞邊緣。說明Exo70與Actin主要共定位于遷移細胞的邊緣,從而發(fā)揮功能。(3)Exo70在平滑肌細胞A7r5遷移過程中的作用為了進一步明確Exo70在A7r5細胞轉(zhuǎn)移過程中的作用,于是利用RNA干擾技術(shù)抑制了A7r5細胞中Exo70的基因表達,篩選出了Exo70功能缺陷的A7r5細胞株:A7r5-ratExoc7-D2和A7r5-ratExoc7-K1細胞。并以野生型A7r5為對照,對三株細胞進行劃傷愈合實驗,結(jié)果顯示A7r5細胞干擾前后劃傷結(jié)果有明顯差異,其中A7r5-ratExoc7-D2細胞劃痕愈合所需時間最長,其次為A7r5-ratExoc7-K1細胞,這表明了抑制了Exo70在A7r5細胞中的表達后,細胞的遷移能力降低,進一步證明Exo70的表達水平與細胞的遷移能力呈正相關(guān)。(4)Exo70在平滑肌細胞系A(chǔ)7r5侵襲過程中的作用為了進一步明確Exo70在A7r5細胞轉(zhuǎn)移過程中所發(fā)揮的功能,選取上述篩選的功能缺陷型細胞進行Transwell實驗,正常A7r5細胞做對照,檢測三株細胞的侵襲能力。結(jié)果表明,遷移到下室內(nèi)的細胞數(shù)量,A7r5-rat Exoc7-D2和A7r5-rat Exoc7-K1細胞明顯的少于A7r5細胞。說明了抑制了Exo70在A7r5細胞中的表達后,細胞的侵襲能力降低。Exo70在A7r5細胞的遷移和侵襲過程中確實發(fā)揮了重要的作用。本研究明確了Exo70在VSMC中的表達與定位特性及在VSMC遷移過程中所發(fā)揮的功能,有助于進一步的了解心血管疾病的發(fā)病機理,為心血管疾病的治療提供新的潛在治療靶點。
[Abstract]:Exo70 is a key component in A7r5 cells . Exo70 is a key component of exocyst . A7r5 - ratExoc7 - D2 and A7r5 - ratExoc7 - K1 cells were isolated from A7r5 - ratExoc7 - D2 and A7r5 - ratExoc7 - K1 cells .

【學位授予單位】：山東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R54

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 宋磊;錢之玉;陳真;KAZI Hamid Ali;;動脈粥樣硬化與炎癥的關(guān)系及相關(guān)治療藥物[J];藥學進展;2013年02期

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本文編號：1806426