本文選題：Exo70 + 血管平滑肌細(xì)胞��； 參考：《山東師范大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)是血管中膜的重要組成成分,它的異常增殖與遷移在高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、血管成形術(shù)后再狹窄等心腦血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。胞外分泌復(fù)合體(exocyst)是一個(gè)由從酵母到人類進(jìn)化上保守的八個(gè)亞基蛋白質(zhì)構(gòu)成的復(fù)合結(jié)構(gòu),在細(xì)胞的胞外分泌過(guò)程發(fā)揮主要作用。Exo70是exocyst中的關(guān)鍵組分,它在酵母中主要參與分泌囊泡與靶膜的錨定與融合。而在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,Exo70不僅參與了細(xì)胞分泌,在HeLa等多類細(xì)胞的遷移過(guò)程中也發(fā)揮作用。為了進(jìn)一步明確Exo70在血管平滑肌由中膜向內(nèi)膜遷移過(guò)程中的作用,本實(shí)驗(yàn)以血管平滑肌細(xì)胞A7r5細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,利用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)等實(shí)驗(yàn)方法,對(duì)Exo70在A7r5細(xì)胞中的表達(dá)和定位情況,以及Exo70功能缺失前后A7r5細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化等方面進(jìn)行了研究。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)Exo70在平滑肌細(xì)胞A7r5中的表達(dá)情況RT-PCR及免疫熒光檢測(cè)結(jié)果表明,在A7r5細(xì)胞中Exo70可以在mRNA水平和蛋白水平上表達(dá),且Exo70的表達(dá)主要分布于A7r5細(xì)胞的胞質(zhì)中。(2)Exo70在A7r5細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位利用免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)了A7r5細(xì)胞中Exo70與細(xì)胞骨架的共定位情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在A7r5細(xì)胞中Exo70是與Actin存在共定位的,與Tublin并不存在共定位現(xiàn)象。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)果,利用細(xì)胞松弛素B處理細(xì)胞1h后,Actin發(fā)生了解聚,與此同時(shí)Exo70在胞質(zhì)中的分布呈現(xiàn)出彌散狀,該實(shí)驗(yàn)表明Exo70是與微絲相互作用從而發(fā)揮功能的。利用免疫熒光雙標(biāo)記檢測(cè)了A7r5劃傷體系中Exo70的定位情況。結(jié)果顯示,Exo70與Actin共定位于遷移的A7r5細(xì)胞邊緣。說(shuō)明Exo70與Actin主要共定位于遷移細(xì)胞的邊緣,從而發(fā)揮功能。(3)Exo70在平滑肌細(xì)胞A7r5遷移過(guò)程中的作用為了進(jìn)一步明確Exo70在A7r5細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用,于是利用RNA干擾技術(shù)抑制了A7r5細(xì)胞中Exo70的基因表達(dá),篩選出了Exo70功能缺陷的A7r5細(xì)胞株:A7r5-ratExoc7-D2和A7r5-ratExoc7-K1細(xì)胞。并以野生型A7r5為對(duì)照,對(duì)三株細(xì)胞進(jìn)行劃傷愈合實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示A7r5細(xì)胞干擾前后劃傷結(jié)果有明顯差異,其中A7r5-ratExoc7-D2細(xì)胞劃痕愈合所需時(shí)間最長(zhǎng),其次為A7r5-ratExoc7-K1細(xì)胞,這表明了抑制了Exo70在A7r5細(xì)胞中的表達(dá)后,細(xì)胞的遷移能力降低,進(jìn)一步證明Exo70的表達(dá)水平與細(xì)胞的遷移能力呈正相關(guān)。(4)Exo70在平滑肌細(xì)胞系A(chǔ)7r5侵襲過(guò)程中的作用為了進(jìn)一步明確Exo70在A7r5細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中所發(fā)揮的功能,選取上述篩選的功能缺陷型細(xì)胞進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn),正常A7r5細(xì)胞做對(duì)照,檢測(cè)三株細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果表明,遷移到下室內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量,A7r5-rat Exoc7-D2和A7r5-rat Exoc7-K1細(xì)胞明顯的少于A7r5細(xì)胞。說(shuō)明了抑制了Exo70在A7r5細(xì)胞中的表達(dá)后,細(xì)胞的侵襲能力降低。Exo70在A7r5細(xì)胞的遷移和侵襲過(guò)程中確實(shí)發(fā)揮了重要的作用。本研究明確了Exo70在VSMC中的表達(dá)與定位特性及在VSMC遷移過(guò)程中所發(fā)揮的功能,有助于進(jìn)一步的了解心血管疾病的發(fā)病機(jī)理,為心血管疾病的治療提供新的潛在治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Exo70 is a key component in A7r5 cells . Exo70 is a key component of exocyst . A7r5 - ratExoc7 - D2 and A7r5 - ratExoc7 - K1 cells were isolated from A7r5 - ratExoc7 - D2 and A7r5 - ratExoc7 - K1 cells .

【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

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1 宋磊;錢之玉;陳真;KAZI Hamid Ali;;動(dòng)脈粥樣硬化與炎癥的關(guān)系及相關(guān)治療藥物[J];藥學(xué)進(jìn)展;2013年02期

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本文編號(hào)：1806426